客户文献分享| IF=14.612,基于酶催化的Asp-Phe-Tyr三肽聚合反应癌症免疫疗

本期解读

题目:A Strategy Based on the Enzyme-Catalyzed Polymerization Reaction of Asp-Phe-Tyr Tripeptide for Cancer Immunotherapy
期刊:JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
影响因子:14.612/Q1
合作技术:iTRAQ定量蛋白组学

一、研究背景
释放免疫系统的力量被认为是治疗癌症的重要策略。尽管大多数癌症都表达肿瘤特异性抗原,但免疫疗法仍是保守的,反应低且不良反应频繁。一个主要原因是癌症已经获得了抑制抗原呈递的能力。约70-95%的人类癌细胞下调与抗原呈递相关的蛋白质的表达。这些蛋白质的系统性缺乏促使癌细胞逃脱免疫识别。激活免疫系统的努力主要集中在使用拮抗剂或抑制剂靶向某些蛋白质上。但是,单靶标药物的功效是有限的,而免疫疗法为癌症提供了一个有前景的治疗策略。然而,即使在高抗原负担的肿瘤中,全身抑制抗原提呈仍然极大地限制了免疫治疗的应用。在此,研究者构建了一种基于功能三肽Asp-Phe-Tyr (DFY)的肿瘤蛋白工程系统,该系统可以自动收集和传递靶向细胞的免疫肿瘤蛋白到免疫细胞中。通过酪氨酸酶催化聚合,DFY三肽选择性地聚集在酪氨酸酶高表达的黑色素瘤细胞中。然后将富含醌的中间体与肿瘤特异性蛋白通过Michael加成共价连接,形成携带肿瘤蛋白的微纤维,该微纤维可被抗原提呈细胞吞噬,并表现出肿瘤抗原特性以增强免疫效果。在抗原递呈不足的黑色素瘤细胞中,该系统可以成功地富集和运输含有肿瘤抗原的蛋白质到免疫细胞。此外,在小鼠黑色素瘤的体内研究中,DFY三肽经皮传递抑制肿瘤生长和术后复发。

二、技术路线
聚合肽筛选鉴定——聚合肽DFY作用机制解析——DFY作用下功能蛋白差异性分析——肿瘤蛋白交联pDFY的免疫激活机制解析——肿瘤模型DFY抗癌作用验证

三、实验结果
1. 酪氨酸酶催化聚合DFY。
首先,研究者筛选得到一种可被酪氨酸酶催化聚合的肽DFY(Asp-Phe-Tyr),并观察到在聚合过程中产生了不溶性黑色沉淀物,利用倒置显微镜和扫描电子显微镜(SEM)观察均表明是由DFY聚合成的微纤维(图1b和图1b)。然后,研究者研究了各种细胞系中酪氨酸酶基因(TYR)表达的差异,基于CCLE数据库(https://t.cn/Ev9rmGW)分析了TYR基因在740个细胞系中的表达水平,结果表明,与其他癌细胞分型相比,黑色素瘤细胞系表现出最高的TYR基因表达量(图1e)。此外,研究了酪氨酸酶过表达的黑色素瘤细胞中DFY的胞内聚合反应(图1f),结果表明DFY在黑素瘤细胞中的聚合是酪氨酸酶依赖性的。此外,研究者验证了DFY的聚合是否可以在体内原位诱导。将DFY和不可聚合肽(Asp-Phe-Phe,DFF)注射到小鼠癌旁组织中以观察其在肿瘤中的清除情况。如图1i所示,注射的DFY比DFF在肿瘤位置停留的时间更长,相比之下,大多数DFF在肿瘤中被快速清除了,因此推测DFY能在肿瘤组织中特异性聚合。

2. DFY的胞内蛋白捕获。
研究者通过MTT分析表明,DFY在33μM的浓度下可抑制小鼠B16细胞的增殖达57%(图2e),在与各种B16细胞抑制剂孵育后,发现单苯甲酮(酪氨酸酶抑制剂)和谷胱甘肽(GSH)均可将B16细胞从DFY聚合引起的细胞死亡过程中拯救出来(图2f)。Ac-DEVD-CHO(凋亡抑制剂),ferrostatin-1(促肥大症抑制剂),necrostatin-1(坏死性抑制剂),TBHQ和BHA(醌氧化还原酶诱导剂)却无法挽救DFY对细胞的伤害。得出的结论是,单苯甲酮和谷胱甘肽的解毒作用归因于GSH和DFY之间的迈克尔加成。通过荧光显微镜观察,发现长期培养后,微纤维从细胞中释放出来(图4Sd,e)。实验证明DFY收集靶细胞的胞内蛋白,并以类似于坏死的方式将它们转运出细胞,并伴随DFY聚合诱导的细胞死亡。因此,由pDFY携带的肿瘤蛋白的释放可能刺激随后的抗原触发的免疫反应。

3. 交联蛋白的蛋白质组学研究。
由于蛋白质的免疫原性因蛋白质而异,研究者研究了通过抗原工程系统收集的蛋白质类型,与金开瑞合作的串联质谱用于定量分析蛋白质含量。如图3a,b和S5所示,在DFY聚合后,确定了190个上调蛋白和346个下调蛋白(倍数变化1.5和P <0.05,超几何测试)。然后通过GO数据库富集分析了这些差异蛋白的功能。结果表明,这些蛋白质大多数与细胞代谢(氨基酸代谢,糖代谢),能量供应(糖酵解,有氧呼吸)和蛋白质合成(核糖体)相关(图3c)。发现这些蛋白质在功能上涵盖了细胞最重要的生物学功能(图3d)。差异蛋白主要来自核糖体,线粒体,细胞核和高尔基体。此外,通过STRING功能蛋白缔合网络研究了DFY聚合后减少的蛋白质之间的相互作用(图3e)。来自细胞器的蛋白质,特别是核糖体,线粒体和细胞核中的蛋白质,形成紧密的簇。该结果表明DFY可以特异性地交联来自这些细胞器的蛋白质,从而导致这些蛋白质的显着减少。另外,作为专业的产生黑色素的细胞器,还分析了在DFY处理的黑色素瘤细胞中黑色素体的蛋白质表达(图S5)。GO富集分析的结果表明,用DFY处理后,黑素体中的大多数相关蛋白也被下调。使用主成分分析(PCA)分析了Cys含量,理论等电点和差异蛋白质脂肪族指数三个指标(图3f),该结果表明被下调的蛋白质可以被DFY结构结合或化学交联。从实验上观察到,DFY处理可抑制线粒体功能,抑制蛋白质合成并损害细胞骨架形成(图S6)。这些实验结果与理论推测吻合良好。

4. 肿瘤蛋白交联pDFY的免疫激活。
为了研究B16细胞释放的纤维是否可以被APC吞噬,通过共聚焦荧光显微镜和流式细胞术检查了B16和APC(RAW264.7和DC)对DFY或pDFY的摄取(图4a,b)。荧光成像表明DFY在各种细胞中积累,但pDFY倾向于被APC吞噬。该观察证明,纤维携带的抗原蛋白更倾向于递送至APC。为了阐明pDFY携带的肿瘤蛋白是否能增强免疫反应,用流式细胞仪进一步分析了裂解物蛋白交联的pDFY在DCs成熟中的能力(图4c)。与裂解物组相比,裂解物+ pDFY在DC的成熟度上增加了2.3倍。此外,与裂解物+ pDFY相比,裂解物@pDFY诱导的DC成熟也更为显着(P = 0.0002)。然后将B16蛋白交联的经pDFY处理的B16细胞和脾细胞以1:10的比例共孵育,以研究智能抗原工程系统引发针对癌细胞的特异性免疫反应的能力(图4d),研究发现经裂解物@pDFY处理的脾细胞消除了59.3%的B16细胞。相反,裂解物或裂解物+ pDFY处理的脾细胞的混合物仅杀死了不到30%的B16细胞。携带肿瘤抗原蛋白的裂解物@ pDFY成功触发了针对B16细胞的特异性免疫杀伤。在此基础上,考虑到pDFY的佐剂作用和交联蛋白的强免疫原性,抗原工程系统可作为黑色素瘤治疗的免疫增强疫苗型材料。最后,经B16荷瘤小鼠皮下药物注射研究,证明了由于某些功能蛋白被裂解物@ pDFY富集,裂解物@ pDFY可以成功激活体内抗癌免疫反应。

5. DFY在不可切除黑色素瘤中的抗癌作用。
随后,研究者对抗原工程系统的肿瘤抑制能力进行了分析。抗PD1抗体(aPD1)或化学治疗药物已与基于DFY的抗原工程系统结合用于治疗B16荷瘤小鼠(图5a)实验结果表明DFY + aPD1的治疗抑制了91%的肿瘤生长。研究者还记录了各种治疗后小鼠的存活率(图5c)。在所有组中,用DFY + aPD1处理的小鼠的存活时间最长。该结果表明,肿瘤周围注射DFY不仅可以收集可能含有肿瘤抗原的肿瘤蛋白,而且可以将免疫原性肿瘤蛋白递送至APC并引起随后的CTL激活以抑制肿瘤进展。酶联免疫吸附试验(ELISA)显示,DFY + aPD1处理后,包括干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)在内的免疫激活标记物增加(图5f)。

6. DFY经皮给药治疗黑色素瘤。
研究者将凝胶状的DFY @ gel作为一种透皮治疗系统,粘附在皮肤上时释放DFY。如图6g所示,在相同深度下,用DFY @ gel治疗的肿瘤的平均荧光强度(MFI)高于DFY。使用V-C扩散池和荧光光谱仪研究了分离的猪皮中DFY @ gel的透皮吸收。与游离DFY相比,DFY @ gel的透皮渗透提高了1.5倍(图6h)。然后通过测量肿瘤体积评估DFY @ gel抑制肿瘤生长的能力(图6i)。在为期16天的实验中,DFY @ gel显示出与DFY(腹膜内注射)相似的治疗效果。IFN-α在临床上用于术后黑色素瘤的治疗。与临床方案相比,评估了DFY @ gel的治疗效果。IFN-α和经皮凝胶治疗均显着抑制了肿瘤的复发。该结果表明透皮DFY @ gel在预防黑素瘤复发方面具有与临床上使用的IFN-α几乎相同的治疗效果。

四、小结
在这项研究中,研究者设计了一种基于肽的肿瘤蛋白工程系统,该系统对黑素瘤治疗表现出强大的免疫原性。一旦进入恶性黑色素瘤细胞,该三肽进行酪氨酸酶催化的氧化聚合。同时,通过迈克尔加成反应还捕获了来自细胞核,线粒体和核糖体的高免疫原性功能蛋白,这引起了类似于坏死的快速细胞死亡。随后,肿瘤蛋白交联的pDFY从垂死和破裂的癌细胞中释放出来,形成的聚集纤维更易于被APC内吞。因此,设计的肿瘤蛋白质工程系统成功地收集了免疫原性蛋白质并将其递送至APC,并表现出辅助作用以增强免疫应答以消除肿瘤。DFY的经皮免疫疗法在小鼠和小型猪模型中也显示出高效率和高生物相容性,并显着延长了肿瘤小鼠的存活时间。在可切除的黑色素瘤中,发现DFY@gel具有与临床IFN-α治疗相似的复发预防效果。

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HR做了十年依然是小主管,到底是什么“坑”拖延了你?

“我做HR这行也快十年了,却依然只是一名普通的小主管,看着别人五年的都升经理了好心酸。我该如何跳出执行者的角色呢?”

聊了很久,我发现其实他专业基本功还不错,人力资源六大模块都有实操经验。

但当我问他几个问题:

你知道现在的95后喜欢什么样的招聘文案吗?

作为HR,你是否懂得每一个员工的需求、了解他们的特点,真正实现人岗匹配?

你知道公司领导对HR的期望是什么吗?

……

他一下子懵了,这才觉得自己做了那么多年HR,似乎只是在做资源,而非搞人力,没有好好去研究人力资源的心理学。

1
什么是人力资源的心理学

俗话说:有人的地方就有江湖。

相对于其他职业来说,HR是一个与人打交道非常多的职业。

记得刚踏入这行时,有位HR前辈曾问我:你觉得人力资源是做什么的?我很机械地查了下百度,把定义给他背了一遍。

前辈笑笑,有点鄙夷地说:你那是官方版本,不是行家话。人力资源,就是先做人再做事,把人搞定了,你就搞定了一切。

当时对前辈说的话感受还不深,但随着经验的积累,职位的升迁,我发现前辈归纳得很对。大道至简,真的就是把人搞定就可以。

而要搞定人,一定离不开心理学。

所谓人力资源的心理学,简单说就是从心理学的角度进行人力资源管理。

心理学贯穿于人力资源选、用、育、留的全过程,那么与HR有关常见的心理学理论主要包括哪些呢?

(一)马斯洛需求理论

该理论将人的需求从低到高分为生理、安全、归属、受尊重、自我实现五种类型。这就促使管理者必须考虑如何更好地从心理上去满足员工的高层次需要,从文化上对员工加以调控和引导,帮助他们实现各自的愿望。

(二)麦克利兰冰山模型理论

该理论就是将人员个体素质划分为显性(基本知识、基本技能)、隐性(社会角色、自我形象、特质和动机)两部分,通过对员工隐性素质的挖掘与激发,帮助个体与组织绩效的进步。(见图2)

(三)赫兹伯格双因素理论

该理论认为,影响员工工作态度的因素有两种,一种是保健因素,另一种是激励因素。从保健到激励,即从防止员工产生不满情绪到激励员工工作热情。 (见图3)

2
HR为什么要懂心理学

前段时间我在网上看到过一个资深HR招聘官的经验分享,他说如果某个求职者一坐下就翘腿,代表这个人充满企图心与自信;十指交叉紧扣是紧张和缺乏自信的信号;手指搓动手掌或双手搓动是缓解心理的不安;求职者遇到困难和压力的时候,通常会把嘴唇藏起来或绷紧……

于是底下留言跟帖的网友惊呼:被懂心理学的HR面试太可怕了!这一进门我不就彻底“赤裸裸”了?

从这个段子来看,心理学对HR的技能加成真是太大了!

所谓养花要懂花性,养鱼要懂鱼性,因此做HR当然也需要懂心理学,理由如下:

(一)人力资源传统六大模块都围绕人,而与人沟通就少不了心理学。

例如一位HR要进行年度培训计划的需求调研,假设他直接问员工:“关于培训计划,你有什么需求吗?”

则员工可能会说:“又要搞培训,我没啥需求呀!”

但如果HR学过心理学,一定会在调研前先花几分钟营造彼此接纳的氛围;接着再问:“如果你希望绩效能够有所改进的话,公司可以在哪些方面给你提供培训帮助?”

可见在沟通中运用心理学,能让HR的工作更加顺畅。

(二)做好员工的情绪管理也需要心理学。

每个员工都是一个独立的个体,他们在生活中每一个细节的变化都会影响到他的工作情绪,而不良的情绪必然会影响到工作,导致工作效率降低。

运用心理学的知识与技巧,HR可以帮助员工解脱负面情绪的困扰,让积极情绪的能量通过员工在企业里自由流动,最终推动整个组织产生积极的变化。

(三)心理学是实现组织变革的助推剂

无边界的时代,每个行业都在悄然变革。戴维•尤里奇指出,需要对人力资源管理者的角色重新定义,HR应是变革的推进者,可以发挥重要的作用。

“组织者人之心、人者心之器”,要改变组织必须先从改变个人开始。善用心理学的HR,才能做好变革的“唤醒者”与文化的“传播者”。

3
心理学在人力资源管理中的应用

既然心理学对HR如此的重要,那么作为HR来说,又该如何去运用心理学知识呢?我们可拿招聘、薪酬、员工关系三个模块来举例分析。

(一)人员招聘

香港心理学家顾修全博士说得好:“成功的销售从心理开始。”

而招聘何尝不是一场营销,招聘的过程实际上就是一场心理战术。HR在甄选员工时,可以运用心理学知识与工具对员工进行评估:

一是个人能力,包括知识面、智力、管理能力、专业技能等;

二是个性品质,如情绪的稳定性、决策的果断性、独立性、活泼性、责任心等;

三是个人的职业兴趣与职业适应性,即个人适合于做何种工作。

常见的心理学测试工具有:九型人格测试、霍兰德职业兴趣量表、卡特尔16PF、MBTI、大五人格测试、DISC、性格色彩测试等。

此外,招聘中HR需要注意的心理学效应有:首应效应(第一印象)、光环效应(晕轮效应)、刻板效应、从众心理、霍桑效应等。

(二)薪酬设计

薪酬设计的背后其实是人际心理,一种心理契约的达成。

好的薪酬体系是符合人性的,而符合人性的机制一定会对企业带来*大的帮助。

从心理学的角度,薪酬体系可以这样设计:

第一步:认识不同类别员工的需求层次

要知道员工除了物质需要,还有精神需要,这里可以运用本文所提到的马斯洛需求理论。

第二步:设计薪酬体系

1、开展工作分析与岗位价值评估;

2、做好员工个人能力与素质的评估,尤其关注“冰山”下的部分,HR需要判断员工是否胜任该岗位以及对该岗位的胜任程度;

3、做好市场薪酬调查工作,并进行企业人力成本分析。

第三步:选择薪酬模式

薪酬模式有许多,但不同级别员工的诉求有所不同,所以应加以区分,例如:

对于基层员工:基本工资+绩效+晋升

对于中层员工:基本工资+绩效+管理激励(含物质和文化)+晋升

对于高层员工:年薪制+分红(期权)/合伙人(成立新公司独立核算方式为佳)

薪酬的本质是传递企业价值观,所以HR既要清楚组织领导者的利益心理,也要了解员工对价值回报的期望心理。

(三)员工关系

说到员工关系的心理学,则不得不提著名的EAP计划。

EAP即员工帮助计划,是指帮助员工及其家庭成员解决心理和行为问题,从而提高绩效及改善组织氛围的项目。

HR要操作一项比较完整的EAP项目至少涉及三个层面内容:

1、生活层面,包括为员工的身心健康问题、人际交往问题、情感困扰问题、法律问题等提供培训和咨询服务;以及做好外派员工的家庭关系维护;为员工提供心理健康评估和教练服务等。

2、工作层面,向员工提供职业发展、压力管理等方面的培训和咨询服务;以及做好对外派员工的心理适应性评估、工作压力疏导等。

3、组织层面,解决由于组织调整给员工带来岗位变动或裁员而产生的适应性问题;或者由于公司兼并、重组、收购等引起的老员工与新公司、新同事、新文化之间的适应性问题等。

4
写在最后

英国著名企业家诺斯克特•帕金森说过:管理,即是处理各种人际关系。

HR掌握人力资源心理学的目的,是为了更好地调动、激发员工的干事创业的热情,为他们赋能,增强员工对组织的认同感和归属感,从而提高工作绩效。

未来你想成为一名更加优秀的HR,那就从“心”开始。#人力资源研究[超话]#

铂燕超级工厂发布会在钦州港片区隆重举行
5月14日,铂燕在中国(广西)自由贸易试验区钦州港片区(以下简称钦州港片区)发布了燕窝超级工厂签约及施工启动仪式,并现场宣布完成超21亿人民币B轮股权融资。本次发布也是全球燕窝产业迄今为止最大的工厂建设和融资规模。

铂燕超级工厂建成后,将成为世界上第一个燕窝超级工厂,全流程自动化、无人车间、智能制造,能承接全国溯源净燕总进口量1/3的产能。这标志着燕窝食品生产迈入超级生产时代,也标志着燕窝行业将很快出现产业聚焦和龙头效益。

铂燕超级工厂,从理想到现实
燕窝作为传统滋补品,在生产工艺上一直存在挑毛处理时间长、添加物多、误差率高、原料损耗高以及营养留存率低等难点待解决。铂燕,秉承科技赋能助力中国营养滋补食品类目的智能化、全渠道发展。铂燕超级工厂的建设,将首次投入使用生物分离技术,解决燕窝行业人工挑毛、机械臂挑毛存在的痛点。从行业刻度称1%的误差率直接实现千毫克误差率,大大提升了燕窝产业的自动化生产效率。

铂燕超级工厂的全流程自动化生产的实现,结合中马钦州产业园区燕窝集群的优势,快速将行业数据分散做聚焦收口,并衍生到东南亚的其它海产品和农产品。从贸易上实现中国与东南亚的快速对接,从产业升级上,将更优质、更便捷的产品、更高效的输出到中国消费者手上。

铂燕合伙人团队认为,铂燕,带来的将是现代食品技术创新和工业革命。以铂燕鲜泡燕窝为入口,将形成一个巨大的食品平台,以及中产阶层消费为受众的健康生活平台;将孵化上下游生态企业,例如家庭健康食品、可降解食品包材、家庭订制旅游、养老产业、绿色食品的无尽探索等。

坚持科技创新,助力行业变革
一个燕窝新兵,怎么有能力、有意愿在燕窝深加工领域的技术创新做巨大的投入。
铂燕超级工厂的建设和先进技术的研发,对未来中国食品整体产业化有促进作用,对中国营养滋补市场的影响更是穿透式的。所以,铂燕创始团队和战略投资机构,都认为共同在做一件对的事情,将坚定不移的投入和持续赋能。

燕窝消费中坚力量的年轻一代更倾向于更便携、更营养的即食燕窝产品。铂燕,虽作为燕窝行业的新兴品牌,在全国范围内首创“开启营养滋补品的鲜泡时代”,致力于为消费者提供“泡一泡就能吃的燕窝”。

钦州港片区投资建设的燕窝加工贸易基地,是中国首个集毛燕进口、贸易、检测、标准化加工、文化研究等功能于一体的燕窝产业综合平台,同时也是全国唯一燕窝及营养保健品重点监测实验室坐落在此。此次铂燕超级工厂落户钦州港片区,一方面铂燕将协助国家级重点实验室进行燕窝及协同增效产品的深度研发和科研成果的申报,另一方面铂燕通过进一步提升产能和溯源进口量,从而配合和帮助国家关于燕窝原料进口标准和燕窝产品定时定量食用标准的优化和迭代。铂燕将实现毛燕进口、生产加工、溯源追踪、品牌打造等全方位发力,加快推进营养滋补的改革创新,助力燕窝以及中国食品工业的创新与突破式发展。

钦州港片区招商服务中心主任徐超然指出,燕窝加工贸易是钦州港片区推进国际产能合作及“一带一路”倡议探索和实践的重要产业,铂燕超级工厂落户在这里,不仅给园区现有的燕窝产业带来新鲜血液,同时铂燕还与国家燕窝重点实验室达成合作开展新产品研发,这将会让新一代燕窝产品在这里生根发芽,延长整个燕窝产业链,为整个燕窝行业带来新发展格局。

同心共筑,产业共赢
在滋补品这个领域,口碑和信誉价值千金。这条产业链需要从业者拥有全流程把控能力。任何环节上的疏忽和不协同,都有可能影响整个行业的公信力。燕窝产业升级,需要所有燕窝企业和上下游生态链共同努力、践行社会责任感,为广大消费者提供值得信赖的全新的产品和服务。

铂燕,作为燕窝行业的新兴品牌。在这一年的发展历程中,铂燕已荣获“中国燕窝营养滋补十大影响品牌 ”、“中国最佳商业模式创新奖”、“2020品牌强国·食补行业示范单位”、“国家科技部生产力促进中心会员单位”“国家科技部重点培育中小企业之一”、“2021年新型消费示范项目”等殊荣。

大潮资本创始人陈宏城对此认为,优秀的品牌要有全渠道流量能力+全渠道销售能力。燕窝消费中坚力量的年轻一代更倾向于简便易得的即食燕窝,工业工艺的变革创新也使其为必然。铂燕,虽作为燕窝行业的新兴品牌,却一直以科技赋能和品牌打造,实现弯道超车。未来将与铂燕展开全方面深度合作,助力铂燕快速曝光、渗透市场。

对于此次投资,资方代表现场表示,非常认可未来中国营养滋食品工业整体产业的发展机会。此次投资旨在帮助铂燕加速生产、品牌势能的数字化升级,实现制造的自动化、专业化和智能化,以此提高生产和管理效率、产业价值。同时,非常认可铂燕鲜泡的品牌理念,坚持使用科技创新,赋能中国营养滋补品,让消费者能随时随地轻滋补,始终把更好地服务消费者放在第一位。


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