蒲公英杀死癌细胞，治疗甲状腺结节，是科学还是谣言？为你说清楚
蒲公英是我国多数地区田间地头都能够生长的一味野菜，同时也是一味应用历史悠久的中药材，但近年来，关于蒲公英的药理功效，也出现了一些新的研究，而一些关于这些研究的分享，也很容易造成一些朋友的误解和认知误区，其中有两个方面最为常见——
蒲公英根泡水，48小时内能杀灭98%的癌细胞
蒲公英具有消肿散结的功效，可以应用治疗甲状腺结节问题。
关于这两种说法，到底是不是靠谱，我们又应该如何正确地看待这样的一些说法呢？今天就和大家厘清一下这两个说法的真相。
蒲公英根泡水，真的能杀死癌细胞吗？
这种说法的由来，并非空穴来风，而是来自于一个叫做国外的健康网站，该网站的报道称，加拿大的相关研究人员，通过用蒲公英根提取物与相关癌细胞进行培养，发现在48小时内，癌细胞凋亡的数量达到了98%。关于这项研究的官方文献，并没有检索到，但作为这项研究的研究者，加拿大安大略省温莎大学生物化学系的Siyaram Pandey教授，在2011年到2019年期间，发表了多篇有关蒲公英根提取物对相关癌症细胞作用的文章，在这些文章中，包含了黑色素癌，前列腺癌，大肠癌等多种肿瘤，在相关研究中，通过体外细胞培养试验以及初步的动物实验研究，蒲公英根的水提取物都显示出了具有诱导相关癌细胞凋亡，而不影响其他非癌细胞健康的药理作用。
但即使是研究已经持续进行了超过10年的时间，蒲公英根对于人类的癌症是否具有明确的治疗作用，还是需要进一步进行研究的，体外细胞培养试验，用小鼠进行的动物实验虽然表明蒲公英根的提取物对于癌细胞具有一定的对抗作用，而真正的确认药物进入人体后如何才能起效，效果能够达到多少，安全性耐受性如何等等问题，都还要经过长期的研究来证明，因此，仅凭一个蒲公英根提取物能够杀死癌细胞，诱导癌细胞凋亡的研究结果，并不能得出蒲公英具有明确抗癌作用的结论。
除了加拿大的相关研究以外，对于蒲公英提取物的抗癌作用研究，也还有不少，相关研究发现，蒲公英中富含的蒲公英多糖，三萜类物质，植物甾醇类物质，黄酮等多种成分，都可能具有潜在的抗癌功效，这种作用可能与这些活性药理成分或许能够起到抑制肿瘤细胞增殖，作用于肿瘤细胞微环境，抑制其浸润扩散，降低放化疗药物的不良反应等多方面的作用，但上述作用多数也都是基于体外试验或理论研究得出的结论，蒲公英真正应用于临床方面，具有明确效果的抗癌研究，目前还比较缺乏。
综上所述，我们对于蒲公英的抗癌作用可以这样看，蒲公英的提取物可能具有潜在的抗癌作用，对于提高相关癌症的生存质量，改善癌症患者放化疗后的不良反应风险，增强放化疗抗癌效果，提升预后等方面，或许能够起到一定的辅助作用，但是否能够应用于临床，还需要进一步的科学研究来深入探索。
蒲公英真的能消除甲状腺结节吗？
在电影《我和我的家乡》中，其中一段故事情节是得了甲状腺肿瘤的表舅说：“我这病吃蒲公英就能好，蒲公英老家有的是，我当饭吃，我一天三顿,光吃这个，我就不信还治不好。”让人笑中带泪的同时，也给大家提出了一个问题，对于甲状腺的相关问题，不管是结节还是肿瘤，吃蒲公英真的有用吗？
蒲公英能消除甲状腺结节的说法，流传还是挺广泛的，其主要的一点就是在蒲公英的药物作用中，有“消肿散结”这一条。但蒲公英散的这个“结”，与甲状腺结节的这个“结”，是不是一回事，我们还得仔细分析。
蒲公英是一味传统中药，其最早的应用就是治疗哺乳期女性乳腺淤阻导致的急性乳腺炎问题（中医称之为“乳痈”），蒲公英的具有清热解毒，抗炎杀菌，保肝利胆，清胃热等多方面的作用，而蒲公英的消肿散结的功效，针对的主要是体内热毒导致的脓疮肿毒，具有不错的改善效果，比如乳痈，肠痈，肺痈等问题，蒲公英是常用的一种药材，而对于甲状腺结节的辩证施治，却一般不在“散结”的范畴内。
中医理论认为，甲状腺结节属于中医的“瘿病”、“瘿瘤”的范畴，与热毒淤积导致的“结”不同，“瘿”指的是机体组织受病原刺激后的局部增生，多为囊状，其发病机理多是由于情志内伤，饮食水土失调，个人体质等因素导致的，因此，不论从发病机理还是相关症状来看，甲状腺结节与我们中医理论中散结的“结”都是不一样的。
之所以会产生甲状腺结节，一般与长期的愤郁，恼怒或忧思日久，最终导致肝失与调达，气机郁滞，津液得不到正常输布，凝聚成痰，痰凝气滞，停于体内，壅结颈前，发为瘿病。因此，对于甲状腺结节的中医调理，一般以调理肝脾为主，可以结合不同的证型，进行疏肝解郁，健脾化痰，消瘿散结等方面的治疗调理。
旧时常用的药物有富含碘的昆布（海带），海藻，海浮石等，而现在缺碘的情况较为少见，夏枯草，郁金，川楝子，香附，木香，青皮，枳壳等药物，都是常用的单味药材，而一些疏肝健脾散瘿的方剂，也都是可以应用的，但总体来说，不管是单药还是方剂中，都很少用到蒲公英，所以说，对于甲状腺结节的中医调理治疗来说，蒲公英并不是特别对症的药物，想要中医调理甲状腺结节，应当明确辨证后，结合具体情况，选择更适合的药物来进行。
蒲公英是一味普通但却功效很好的中药材，在清热解毒，消肿散结，利尿通淋，清理肝胆，清除胃火，消炎抗菌等方面，都有着不错的效果，但关于其抗癌，消除甲状腺结节方面的相关功效，要么是还需要进一步的更多研究来证明，要么是并不是真正的对症，我们也应该理性看待一些相关的宣传，不要“神化了”蒲公英这个药物，合理应用，对于治疗某些疾病问题，它是个宝，滥用药物，则可能影响身体健康，得不偿失。
蒲公英是我国多数地区田间地头都能够生长的一味野菜，同时也是一味应用历史悠久的中药材，但近年来，关于蒲公英的药理功效，也出现了一些新的研究，而一些关于这些研究的分享，也很容易造成一些朋友的误解和认知误区，其中有两个方面最为常见——
蒲公英根泡水，48小时内能杀灭98%的癌细胞
蒲公英具有消肿散结的功效，可以应用治疗甲状腺结节问题。
关于这两种说法，到底是不是靠谱，我们又应该如何正确地看待这样的一些说法呢？今天就和大家厘清一下这两个说法的真相。
蒲公英根泡水，真的能杀死癌细胞吗？
这种说法的由来，并非空穴来风，而是来自于一个叫做国外的健康网站，该网站的报道称，加拿大的相关研究人员，通过用蒲公英根提取物与相关癌细胞进行培养，发现在48小时内，癌细胞凋亡的数量达到了98%。关于这项研究的官方文献，并没有检索到，但作为这项研究的研究者，加拿大安大略省温莎大学生物化学系的Siyaram Pandey教授，在2011年到2019年期间，发表了多篇有关蒲公英根提取物对相关癌症细胞作用的文章，在这些文章中，包含了黑色素癌，前列腺癌，大肠癌等多种肿瘤，在相关研究中，通过体外细胞培养试验以及初步的动物实验研究，蒲公英根的水提取物都显示出了具有诱导相关癌细胞凋亡，而不影响其他非癌细胞健康的药理作用。
但即使是研究已经持续进行了超过10年的时间，蒲公英根对于人类的癌症是否具有明确的治疗作用，还是需要进一步进行研究的，体外细胞培养试验，用小鼠进行的动物实验虽然表明蒲公英根的提取物对于癌细胞具有一定的对抗作用，而真正的确认药物进入人体后如何才能起效，效果能够达到多少，安全性耐受性如何等等问题，都还要经过长期的研究来证明，因此，仅凭一个蒲公英根提取物能够杀死癌细胞，诱导癌细胞凋亡的研究结果，并不能得出蒲公英具有明确抗癌作用的结论。
除了加拿大的相关研究以外，对于蒲公英提取物的抗癌作用研究，也还有不少，相关研究发现，蒲公英中富含的蒲公英多糖，三萜类物质，植物甾醇类物质，黄酮等多种成分，都可能具有潜在的抗癌功效，这种作用可能与这些活性药理成分或许能够起到抑制肿瘤细胞增殖，作用于肿瘤细胞微环境，抑制其浸润扩散，降低放化疗药物的不良反应等多方面的作用，但上述作用多数也都是基于体外试验或理论研究得出的结论，蒲公英真正应用于临床方面，具有明确效果的抗癌研究，目前还比较缺乏。
综上所述，我们对于蒲公英的抗癌作用可以这样看，蒲公英的提取物可能具有潜在的抗癌作用，对于提高相关癌症的生存质量，改善癌症患者放化疗后的不良反应风险，增强放化疗抗癌效果，提升预后等方面，或许能够起到一定的辅助作用，但是否能够应用于临床，还需要进一步的科学研究来深入探索。
蒲公英真的能消除甲状腺结节吗？
在电影《我和我的家乡》中，其中一段故事情节是得了甲状腺肿瘤的表舅说：“我这病吃蒲公英就能好，蒲公英老家有的是，我当饭吃，我一天三顿,光吃这个，我就不信还治不好。”让人笑中带泪的同时，也给大家提出了一个问题，对于甲状腺的相关问题，不管是结节还是肿瘤，吃蒲公英真的有用吗？
蒲公英能消除甲状腺结节的说法，流传还是挺广泛的，其主要的一点就是在蒲公英的药物作用中，有“消肿散结”这一条。但蒲公英散的这个“结”，与甲状腺结节的这个“结”，是不是一回事，我们还得仔细分析。
蒲公英是一味传统中药，其最早的应用就是治疗哺乳期女性乳腺淤阻导致的急性乳腺炎问题（中医称之为“乳痈”），蒲公英的具有清热解毒，抗炎杀菌，保肝利胆，清胃热等多方面的作用，而蒲公英的消肿散结的功效，针对的主要是体内热毒导致的脓疮肿毒，具有不错的改善效果，比如乳痈，肠痈，肺痈等问题，蒲公英是常用的一种药材，而对于甲状腺结节的辩证施治，却一般不在“散结”的范畴内。
中医理论认为，甲状腺结节属于中医的“瘿病”、“瘿瘤”的范畴，与热毒淤积导致的“结”不同，“瘿”指的是机体组织受病原刺激后的局部增生，多为囊状，其发病机理多是由于情志内伤，饮食水土失调，个人体质等因素导致的，因此，不论从发病机理还是相关症状来看，甲状腺结节与我们中医理论中散结的“结”都是不一样的。
之所以会产生甲状腺结节，一般与长期的愤郁，恼怒或忧思日久，最终导致肝失与调达，气机郁滞，津液得不到正常输布，凝聚成痰，痰凝气滞，停于体内，壅结颈前，发为瘿病。因此，对于甲状腺结节的中医调理，一般以调理肝脾为主，可以结合不同的证型，进行疏肝解郁，健脾化痰，消瘿散结等方面的治疗调理。
旧时常用的药物有富含碘的昆布（海带），海藻，海浮石等，而现在缺碘的情况较为少见，夏枯草，郁金，川楝子，香附，木香，青皮，枳壳等药物，都是常用的单味药材，而一些疏肝健脾散瘿的方剂，也都是可以应用的，但总体来说，不管是单药还是方剂中，都很少用到蒲公英，所以说，对于甲状腺结节的中医调理治疗来说，蒲公英并不是特别对症的药物，想要中医调理甲状腺结节，应当明确辨证后，结合具体情况，选择更适合的药物来进行。
蒲公英是一味普通但却功效很好的中药材，在清热解毒，消肿散结，利尿通淋，清理肝胆，清除胃火，消炎抗菌等方面，都有着不错的效果，但关于其抗癌，消除甲状腺结节方面的相关功效，要么是还需要进一步的更多研究来证明，要么是并不是真正的对症，我们也应该理性看待一些相关的宣传，不要“神化了”蒲公英这个药物，合理应用，对于治疗某些疾病问题，它是个宝，滥用药物，则可能影响身体健康，得不偿失。
随着以90后为主的年轻一代逐渐成为了汽车市场中的消费主力，各大汽车品牌在车型的设计与调教上也相应地作出了转变，这不仅使得诸多新车均是有着潮流而个性的颜值，同时更让它们在驾控感受上也偏向于激情和舒适兼顾了。而今天我们要与大家分享的正是一款专为年轻人打造的轿跑——新宝骏RC-5，它不仅在设计、配置等多方面均充分迎合了年轻人的期待，同时更全面发展，让人几乎找不出明显的槽点。具体来看：
试驾潮流座驾RC-5，1.5T、1.5L两套动力，全车无槽点，售5.98万起
作为一款即将在8月8日上市的新车，新宝骏RC-5目前还处于预售阶段；因此对新宝骏RC-5感兴趣的消费者，都还得再等一等。而在这几天受邀对新宝骏RC-5进行了一次深度试驾后，笔者发现，新宝骏RC-5可以说是很好地诠释了啥叫“好车不怕晚”。预售价为6.98万元-11.08万元的它，无论是在静态表现，还是动态表现上，都拿出了超15万元级别的态度。所以，它并不会让消费者们白等。
试驾潮流座驾RC-5，1.5T、1.5L两套动力，全车无槽点，售5.98万起
首先，我们先来聊一聊新宝骏RC-5的动态表现。本次笔者试驾的是新宝骏RC-5 1.5T CVT智耀旗舰型（除了1.5T车型外，新宝骏RC-5还有着1.5L车型）。这款车搭载的是一台使用了霍尼韦尔新一代增压器的1.5T涡轮增加发动机，不仅身具可靠耐用的特质，同时还能爆发出最大147马力的功率和250N·m的扭矩。而与之匹配的是一台可模拟8挡变速的CVT变速箱，除了也是有着可靠耐用的特点之外，同时得益于传动比较大，还有着经济节油的优点。
试驾潮流座驾RC-5，1.5T、1.5L两套动力，全车无槽点，售5.98万起
试驾潮流座驾RC-5，1.5T、1.5L两套动力，全车无槽点，售5.98万起
实际跑起来之后，新宝骏RC-5这台1.5T+CVT的动力组合会给到人一种很直观的平顺感，不仅有着线性而直接的动力输出，同时无论是升档还是降档，都没有丝毫的顿挫感，且并没有涡轮迟滞的感受，让人在驾驶起来会觉得很舒适和平稳。同时，新宝骏RC-5把油门调教得也很不错，不管是深踩，还是轻踩都能带来良好的力度反馈，这对于长途驾驶时是非常友好的。此外，得益于新宝骏RC-5的转向助力对于路感的抑制做得很充分，且方向盘的指向性和握感很出色，它在驾驶起来还很容易给到人一种轻松之感。
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底盘方面，新宝骏RC-5走得则是那种韧性和舒适兼顾的风格，这种调教风格最直观的好处就是悬架虑震优异的同时，还有着十足的支撑性，让车在跑起来后会显得很平稳，非常适合当下国内的城市道路。而且，值得一提的是，新宝骏RC-5的座椅还填充得很厚实、支撑感不错，在底盘过滤了一层路感之后，还能通过座椅进行更进一步的过滤，从而能带来不错的乘坐舒适性。
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当然，除了底盘、转向和动力总成能直观地影响驾驶感受之外，同时车型的NVH水平也能直观地影响驾驶感受。而在这方面，新宝骏RC-5算得上是拿出了越级的态度，它对于胎噪、风噪和发动机噪音都处理得很不错，除了急加速时会让人明显感觉到发动机噪音瞬间有些许升高之外，其余行驶工况车内均是比较静谧的。
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最后，由于我这次试驾的新宝骏RC-5还配置了领先的L2级自动驾驶辅助，因此在驾驶方面，它相较于竞品中的逸动PLUS、帝豪等还有着一定的附加分，那就是能直观地提升驾驶安全性和舒适性。而新宝骏RC-5的驾驶辅助涵盖了全速自适应续航、弯道辅助等多达17项的自动驾驶辅助，不仅可实现在堵车时自行刹车、跟车前行，高速时解放驾驶员双脚等，从而能充分地削减驾驶疲劳，同时还能探测前方是否具有碰撞风险，并通过警示驾驶员、主动刹车等来规避碰撞风险，从而实现保障行车安全的目的。所以，在优秀的三大件、NVH和转向调教，以及全面的智能驾驶辅助配置的加持下，新宝骏RC-5整体的动态表现是能用“十分出色”来形容的，且相对其预售价来看，更是明显的物超所值了。
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聊完了动态表现，我们再来看静态表现。首先，从设计上来看，新宝骏RC-5依旧采用了新宝骏品牌前沿的星际几何设计理念，整车由内而外均是有着大量几何元素的点缀，使之看起来既立体，又有点科幻的意味。
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其中，外观造型方面。新宝骏RC-5前脸部分点阵式进气格栅在结构层次分明的同时，还有着硕大的尺寸，既显得气场十足，更与狭长的日间行车灯完美地衔接在了一起，使得整个前脸的立体感、时尚感都得到了凸显。与此同时，新宝骏RC-5还有着溜背式车身造型和旋风式轮毂等运动化设计，且它的溜背还带有一份儿“GT”的味道，整体看来会显得十分的个性，很符合时下年轻人的审美。而在尾部，新宝骏RC-5则是采用了贯穿式尾灯的设计，且整个尾部看起来很协调，也有着十足的立体感和潮流气息。
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内饰方面，得益于大尺寸的中控屏和液晶仪表的中心处于了同一水平线，营造出了连屏的视觉效果，进入新宝骏RC-5车内即能让人感受到一股扑面而来的科技感。且在此基础上，新宝骏RC-5的前排还采用了钢琴烤漆式按键、战斗机挡杆和两幅式平底多功能方向盘等运动化设计，它的整车内饰还营造出了不错的驾驶氛围。
试驾潮流座驾RC-5，1.5T、1.5L两套动力，全车无槽点，售5.98万起
并且，值得注意的是，新宝骏RC-5的车内的两块大屏并不只是样子货，而是在支持双屏联动的同时，还内置了行业领先的新宝骏车联网系统，既能实现语音控制车内功能、手机应有车机用、语音聊微信、语音抢红包等实用功能，更有着手机寻车、手机远程控制车辆和查看车辆状态等功能。
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综合来看，无论是静态表现，还是动态表现，新宝骏RC-5均是拿出了同级领先或越级的态度，全面发展的它，正是为诸多只知道堆砌配置和宣扬低价的国产家轿作出了榜样，这势必能助力它在上市后取得优异的市场成绩。而且，尽管产品硬实力过硬，但为了打开市场，新宝骏RC-5的门槛却并不高，预售价仅6.98万元起的它，在时下更有着前10000名预订用户5.98万元起的先享价，这势必能进一步提高它的市场竞争力。所以，即将在8月上市的新宝骏RC-5，是真的不会让年轻人和消费者白等。
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作为一款即将在8月8日上市的新车，新宝骏RC-5目前还处于预售阶段；因此对新宝骏RC-5感兴趣的消费者，都还得再等一等。而在这几天受邀对新宝骏RC-5进行了一次深度试驾后，笔者发现，新宝骏RC-5可以说是很好地诠释了啥叫“好车不怕晚”。预售价为6.98万元-11.08万元的它，无论是在静态表现，还是动态表现上，都拿出了超15万元级别的态度。所以，它并不会让消费者们白等。
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首先，我们先来聊一聊新宝骏RC-5的动态表现。本次笔者试驾的是新宝骏RC-5 1.5T CVT智耀旗舰型（除了1.5T车型外，新宝骏RC-5还有着1.5L车型）。这款车搭载的是一台使用了霍尼韦尔新一代增压器的1.5T涡轮增加发动机，不仅身具可靠耐用的特质，同时还能爆发出最大147马力的功率和250N·m的扭矩。而与之匹配的是一台可模拟8挡变速的CVT变速箱，除了也是有着可靠耐用的特点之外，同时得益于传动比较大，还有着经济节油的优点。
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客户文献分享| IF=14.612，基于酶催化的Asp-Phe-Tyr三肽聚合反应癌症免疫疗
本期解读
题目：A Strategy Based on the Enzyme-Catalyzed Polymerization Reaction of Asp-Phe-Tyr Tripeptide for Cancer Immunotherapy
期刊：JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
影响因子：14.612/Q1
合作技术：iTRAQ定量蛋白组学
一、研究背景
释放免疫系统的力量被认为是治疗癌症的重要策略。尽管大多数癌症都表达肿瘤特异性抗原，但免疫疗法仍是保守的，反应低且不良反应频繁。一个主要原因是癌症已经获得了抑制抗原呈递的能力。约70-95％的人类癌细胞下调与抗原呈递相关的蛋白质的表达。这些蛋白质的系统性缺乏促使癌细胞逃脱免疫识别。激活免疫系统的努力主要集中在使用拮抗剂或抑制剂靶向某些蛋白质上。但是，单靶标药物的功效是有限的，而免疫疗法为癌症提供了一个有前景的治疗策略。然而，即使在高抗原负担的肿瘤中，全身抑制抗原提呈仍然极大地限制了免疫治疗的应用。在此，研究者构建了一种基于功能三肽Asp-Phe-Tyr (DFY)的肿瘤蛋白工程系统，该系统可以自动收集和传递靶向细胞的免疫肿瘤蛋白到免疫细胞中。通过酪氨酸酶催化聚合，DFY三肽选择性地聚集在酪氨酸酶高表达的黑色素瘤细胞中。然后将富含醌的中间体与肿瘤特异性蛋白通过Michael加成共价连接，形成携带肿瘤蛋白的微纤维，该微纤维可被抗原提呈细胞吞噬，并表现出肿瘤抗原特性以增强免疫效果。在抗原递呈不足的黑色素瘤细胞中，该系统可以成功地富集和运输含有肿瘤抗原的蛋白质到免疫细胞。此外，在小鼠黑色素瘤的体内研究中，DFY三肽经皮传递抑制肿瘤生长和术后复发。
二、技术路线
聚合肽筛选鉴定——聚合肽DFY作用机制解析——DFY作用下功能蛋白差异性分析——肿瘤蛋白交联pDFY的免疫激活机制解析——肿瘤模型DFY抗癌作用验证
三、实验结果
1. 酪氨酸酶催化聚合DFY。
首先，研究者筛选得到一种可被酪氨酸酶催化聚合的肽DFY（Asp-Phe-Tyr），并观察到在聚合过程中产生了不溶性黑色沉淀物，利用倒置显微镜和扫描电子显微镜（SEM）观察均表明是由DFY聚合成的微纤维（图1b和图1b）。然后，研究者研究了各种细胞系中酪氨酸酶基因（TYR）表达的差异，基于CCLE数据库（https://t.cn/Ev9rmGW）分析了TYR基因在740个细胞系中的表达水平，结果表明，与其他癌细胞分型相比，黑色素瘤细胞系表现出最高的TYR基因表达量（图1e）。此外，研究了酪氨酸酶过表达的黑色素瘤细胞中DFY的胞内聚合反应（图1f），结果表明DFY在黑素瘤细胞中的聚合是酪氨酸酶依赖性的。此外，研究者验证了DFY的聚合是否可以在体内原位诱导。将DFY和不可聚合肽（Asp-Phe-Phe，DFF）注射到小鼠癌旁组织中以观察其在肿瘤中的清除情况。如图1i所示，注射的DFY比DFF在肿瘤位置停留的时间更长，相比之下，大多数DFF在肿瘤中被快速清除了，因此推测DFY能在肿瘤组织中特异性聚合。
2. DFY的胞内蛋白捕获。
研究者通过MTT分析表明，DFY在33μM的浓度下可抑制小鼠B16细胞的增殖达57％（图2e），在与各种B16细胞抑制剂孵育后，发现单苯甲酮（酪氨酸酶抑制剂）和谷胱甘肽（GSH）均可将B16细胞从DFY聚合引起的细胞死亡过程中拯救出来（图2f）。Ac-DEVD-CHO（凋亡抑制剂），ferrostatin-1（促肥大症抑制剂），necrostatin-1（坏死性抑制剂），TBHQ和BHA（醌氧化还原酶诱导剂）却无法挽救DFY对细胞的伤害。得出的结论是，单苯甲酮和谷胱甘肽的解毒作用归因于GSH和DFY之间的迈克尔加成。通过荧光显微镜观察，发现长期培养后，微纤维从细胞中释放出来（图4Sd，e）。实验证明DFY收集靶细胞的胞内蛋白，并以类似于坏死的方式将它们转运出细胞，并伴随DFY聚合诱导的细胞死亡。因此，由pDFY携带的肿瘤蛋白的释放可能刺激随后的抗原触发的免疫反应。
3. 交联蛋白的蛋白质组学研究。
由于蛋白质的免疫原性因蛋白质而异，研究者研究了通过抗原工程系统收集的蛋白质类型，与金开瑞合作的串联质谱用于定量分析蛋白质含量。如图3a，b和S5所示，在DFY聚合后，确定了190个上调蛋白和346个下调蛋白（倍数变化1.5和P <0.05，超几何测试）。然后通过GO数据库富集分析了这些差异蛋白的功能。结果表明，这些蛋白质大多数与细胞代谢（氨基酸代谢，糖代谢），能量供应（糖酵解，有氧呼吸）和蛋白质合成（核糖体）相关（图3c）。发现这些蛋白质在功能上涵盖了细胞最重要的生物学功能（图3d）。差异蛋白主要来自核糖体，线粒体，细胞核和高尔基体。此外，通过STRING功能蛋白缔合网络研究了DFY聚合后减少的蛋白质之间的相互作用（图3e）。来自细胞器的蛋白质，特别是核糖体，线粒体和细胞核中的蛋白质，形成紧密的簇。该结果表明DFY可以特异性地交联来自这些细胞器的蛋白质，从而导致这些蛋白质的显着减少。另外，作为专业的产生黑色素的细胞器，还分析了在DFY处理的黑色素瘤细胞中黑色素体的蛋白质表达（图S5）。GO富集分析的结果表明，用DFY处理后，黑素体中的大多数相关蛋白也被下调。使用主成分分析（PCA）分析了Cys含量，理论等电点和差异蛋白质脂肪族指数三个指标（图3f），该结果表明被下调的蛋白质可以被DFY结构结合或化学交联。从实验上观察到，DFY处理可抑制线粒体功能，抑制蛋白质合成并损害细胞骨架形成（图S6）。这些实验结果与理论推测吻合良好。
4. 肿瘤蛋白交联pDFY的免疫激活。
为了研究B16细胞释放的纤维是否可以被APC吞噬，通过共聚焦荧光显微镜和流式细胞术检查了B16和APC（RAW264.7和DC）对DFY或pDFY的摄取（图4a，b）。荧光成像表明DFY在各种细胞中积累，但pDFY倾向于被APC吞噬。该观察证明，纤维携带的抗原蛋白更倾向于递送至APC。为了阐明pDFY携带的肿瘤蛋白是否能增强免疫反应，用流式细胞仪进一步分析了裂解物蛋白交联的pDFY在DCs成熟中的能力（图4c）。与裂解物组相比，裂解物+ pDFY在DC的成熟度上增加了2.3倍。此外，与裂解物+ pDFY相比，裂解物@pDFY诱导的DC成熟也更为显着（P = 0.0002）。然后将B16蛋白交联的经pDFY处理的B16细胞和脾细胞以1:10的比例共孵育，以研究智能抗原工程系统引发针对癌细胞的特异性免疫反应的能力（图4d），研究发现经裂解物@pDFY处理的脾细胞消除了59.3％的B16细胞。相反，裂解物或裂解物+ pDFY处理的脾细胞的混合物仅杀死了不到30％的B16细胞。携带肿瘤抗原蛋白的裂解物@ pDFY成功触发了针对B16细胞的特异性免疫杀伤。在此基础上，考虑到pDFY的佐剂作用和交联蛋白的强免疫原性，抗原工程系统可作为黑色素瘤治疗的免疫增强疫苗型材料。最后，经B16荷瘤小鼠皮下药物注射研究，证明了由于某些功能蛋白被裂解物@ pDFY富集，裂解物@ pDFY可以成功激活体内抗癌免疫反应。
5. DFY在不可切除黑色素瘤中的抗癌作用。
随后，研究者对抗原工程系统的肿瘤抑制能力进行了分析。抗PD1抗体（aPD1）或化学治疗药物已与基于DFY的抗原工程系统结合用于治疗B16荷瘤小鼠（图5a）实验结果表明DFY + aPD1的治疗抑制了91％的肿瘤生长。研究者还记录了各种治疗后小鼠的存活率（图5c）。在所有组中，用DFY + aPD1处理的小鼠的存活时间最长。该结果表明，肿瘤周围注射DFY不仅可以收集可能含有肿瘤抗原的肿瘤蛋白，而且可以将免疫原性肿瘤蛋白递送至APC并引起随后的CTL激活以抑制肿瘤进展。酶联免疫吸附试验（ELISA）显示，DFY + aPD1处理后，包括干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）在内的免疫激活标记物增加（图5f）。
6. DFY经皮给药治疗黑色素瘤。
研究者将凝胶状的DFY @ gel作为一种透皮治疗系统，粘附在皮肤上时释放DFY。如图6g所示，在相同深度下，用DFY @ gel治疗的肿瘤的平均荧光强度（MFI）高于DFY。使用V-C扩散池和荧光光谱仪研究了分离的猪皮中DFY @ gel的透皮吸收。与游离DFY相比，DFY @ gel的透皮渗透提高了1.5倍（图6h）。然后通过测量肿瘤体积评估DFY @ gel抑制肿瘤生长的能力（图6i）。在为期16天的实验中，DFY @ gel显示出与DFY（腹膜内注射）相似的治疗效果。IFN-α在临床上用于术后黑色素瘤的治疗。与临床方案相比，评估了DFY @ gel的治疗效果。IFN-α和经皮凝胶治疗均显着抑制了肿瘤的复发。该结果表明透皮DFY @ gel在预防黑素瘤复发方面具有与临床上使用的IFN-α几乎相同的治疗效果。
四、小结
在这项研究中，研究者设计了一种基于肽的肿瘤蛋白工程系统，该系统对黑素瘤治疗表现出强大的免疫原性。一旦进入恶性黑色素瘤细胞，该三肽进行酪氨酸酶催化的氧化聚合。同时，通过迈克尔加成反应还捕获了来自细胞核，线粒体和核糖体的高免疫原性功能蛋白，这引起了类似于坏死的快速细胞死亡。随后，肿瘤蛋白交联的pDFY从垂死和破裂的癌细胞中释放出来，形成的聚集纤维更易于被APC内吞。因此，设计的肿瘤蛋白质工程系统成功地收集了免疫原性蛋白质并将其递送至APC，并表现出辅助作用以增强免疫应答以消除肿瘤。DFY的经皮免疫疗法在小鼠和小型猪模型中也显示出高效率和高生物相容性，并显着延长了肿瘤小鼠的存活时间。在可切除的黑色素瘤中，发现DFY@gel具有与临床IFN-α治疗相似的复发预防效果。
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本期解读
题目：A Strategy Based on the Enzyme-Catalyzed Polymerization Reaction of Asp-Phe-Tyr Tripeptide for Cancer Immunotherapy
期刊：JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
影响因子：14.612/Q1
合作技术：iTRAQ定量蛋白组学
一、研究背景
释放免疫系统的力量被认为是治疗癌症的重要策略。尽管大多数癌症都表达肿瘤特异性抗原，但免疫疗法仍是保守的，反应低且不良反应频繁。一个主要原因是癌症已经获得了抑制抗原呈递的能力。约70-95％的人类癌细胞下调与抗原呈递相关的蛋白质的表达。这些蛋白质的系统性缺乏促使癌细胞逃脱免疫识别。激活免疫系统的努力主要集中在使用拮抗剂或抑制剂靶向某些蛋白质上。但是，单靶标药物的功效是有限的，而免疫疗法为癌症提供了一个有前景的治疗策略。然而，即使在高抗原负担的肿瘤中，全身抑制抗原提呈仍然极大地限制了免疫治疗的应用。在此，研究者构建了一种基于功能三肽Asp-Phe-Tyr (DFY)的肿瘤蛋白工程系统，该系统可以自动收集和传递靶向细胞的免疫肿瘤蛋白到免疫细胞中。通过酪氨酸酶催化聚合，DFY三肽选择性地聚集在酪氨酸酶高表达的黑色素瘤细胞中。然后将富含醌的中间体与肿瘤特异性蛋白通过Michael加成共价连接，形成携带肿瘤蛋白的微纤维，该微纤维可被抗原提呈细胞吞噬，并表现出肿瘤抗原特性以增强免疫效果。在抗原递呈不足的黑色素瘤细胞中，该系统可以成功地富集和运输含有肿瘤抗原的蛋白质到免疫细胞。此外，在小鼠黑色素瘤的体内研究中，DFY三肽经皮传递抑制肿瘤生长和术后复发。
二、技术路线
聚合肽筛选鉴定——聚合肽DFY作用机制解析——DFY作用下功能蛋白差异性分析——肿瘤蛋白交联pDFY的免疫激活机制解析——肿瘤模型DFY抗癌作用验证
三、实验结果
1. 酪氨酸酶催化聚合DFY。
首先，研究者筛选得到一种可被酪氨酸酶催化聚合的肽DFY（Asp-Phe-Tyr），并观察到在聚合过程中产生了不溶性黑色沉淀物，利用倒置显微镜和扫描电子显微镜（SEM）观察均表明是由DFY聚合成的微纤维（图1b和图1b）。然后，研究者研究了各种细胞系中酪氨酸酶基因（TYR）表达的差异，基于CCLE数据库（https://t.cn/Ev9rmGW）分析了TYR基因在740个细胞系中的表达水平，结果表明，与其他癌细胞分型相比，黑色素瘤细胞系表现出最高的TYR基因表达量（图1e）。此外，研究了酪氨酸酶过表达的黑色素瘤细胞中DFY的胞内聚合反应（图1f），结果表明DFY在黑素瘤细胞中的聚合是酪氨酸酶依赖性的。此外，研究者验证了DFY的聚合是否可以在体内原位诱导。将DFY和不可聚合肽（Asp-Phe-Phe，DFF）注射到小鼠癌旁组织中以观察其在肿瘤中的清除情况。如图1i所示，注射的DFY比DFF在肿瘤位置停留的时间更长，相比之下，大多数DFF在肿瘤中被快速清除了，因此推测DFY能在肿瘤组织中特异性聚合。
2. DFY的胞内蛋白捕获。
研究者通过MTT分析表明，DFY在33μM的浓度下可抑制小鼠B16细胞的增殖达57％（图2e），在与各种B16细胞抑制剂孵育后，发现单苯甲酮（酪氨酸酶抑制剂）和谷胱甘肽（GSH）均可将B16细胞从DFY聚合引起的细胞死亡过程中拯救出来（图2f）。Ac-DEVD-CHO（凋亡抑制剂），ferrostatin-1（促肥大症抑制剂），necrostatin-1（坏死性抑制剂），TBHQ和BHA（醌氧化还原酶诱导剂）却无法挽救DFY对细胞的伤害。得出的结论是，单苯甲酮和谷胱甘肽的解毒作用归因于GSH和DFY之间的迈克尔加成。通过荧光显微镜观察，发现长期培养后，微纤维从细胞中释放出来（图4Sd，e）。实验证明DFY收集靶细胞的胞内蛋白，并以类似于坏死的方式将它们转运出细胞，并伴随DFY聚合诱导的细胞死亡。因此，由pDFY携带的肿瘤蛋白的释放可能刺激随后的抗原触发的免疫反应。
3. 交联蛋白的蛋白质组学研究。
由于蛋白质的免疫原性因蛋白质而异，研究者研究了通过抗原工程系统收集的蛋白质类型，与金开瑞合作的串联质谱用于定量分析蛋白质含量。如图3a，b和S5所示，在DFY聚合后，确定了190个上调蛋白和346个下调蛋白（倍数变化1.5和P <0.05，超几何测试）。然后通过GO数据库富集分析了这些差异蛋白的功能。结果表明，这些蛋白质大多数与细胞代谢（氨基酸代谢，糖代谢），能量供应（糖酵解，有氧呼吸）和蛋白质合成（核糖体）相关（图3c）。发现这些蛋白质在功能上涵盖了细胞最重要的生物学功能（图3d）。差异蛋白主要来自核糖体，线粒体，细胞核和高尔基体。此外，通过STRING功能蛋白缔合网络研究了DFY聚合后减少的蛋白质之间的相互作用（图3e）。来自细胞器的蛋白质，特别是核糖体，线粒体和细胞核中的蛋白质，形成紧密的簇。该结果表明DFY可以特异性地交联来自这些细胞器的蛋白质，从而导致这些蛋白质的显着减少。另外，作为专业的产生黑色素的细胞器，还分析了在DFY处理的黑色素瘤细胞中黑色素体的蛋白质表达（图S5）。GO富集分析的结果表明，用DFY处理后，黑素体中的大多数相关蛋白也被下调。使用主成分分析（PCA）分析了Cys含量，理论等电点和差异蛋白质脂肪族指数三个指标（图3f），该结果表明被下调的蛋白质可以被DFY结构结合或化学交联。从实验上观察到，DFY处理可抑制线粒体功能，抑制蛋白质合成并损害细胞骨架形成（图S6）。这些实验结果与理论推测吻合良好。
4. 肿瘤蛋白交联pDFY的免疫激活。
为了研究B16细胞释放的纤维是否可以被APC吞噬，通过共聚焦荧光显微镜和流式细胞术检查了B16和APC（RAW264.7和DC）对DFY或pDFY的摄取（图4a，b）。荧光成像表明DFY在各种细胞中积累，但pDFY倾向于被APC吞噬。该观察证明，纤维携带的抗原蛋白更倾向于递送至APC。为了阐明pDFY携带的肿瘤蛋白是否能增强免疫反应，用流式细胞仪进一步分析了裂解物蛋白交联的pDFY在DCs成熟中的能力（图4c）。与裂解物组相比，裂解物+ pDFY在DC的成熟度上增加了2.3倍。此外，与裂解物+ pDFY相比，裂解物@pDFY诱导的DC成熟也更为显着（P = 0.0002）。然后将B16蛋白交联的经pDFY处理的B16细胞和脾细胞以1:10的比例共孵育，以研究智能抗原工程系统引发针对癌细胞的特异性免疫反应的能力（图4d），研究发现经裂解物@pDFY处理的脾细胞消除了59.3％的B16细胞。相反，裂解物或裂解物+ pDFY处理的脾细胞的混合物仅杀死了不到30％的B16细胞。携带肿瘤抗原蛋白的裂解物@ pDFY成功触发了针对B16细胞的特异性免疫杀伤。在此基础上，考虑到pDFY的佐剂作用和交联蛋白的强免疫原性，抗原工程系统可作为黑色素瘤治疗的免疫增强疫苗型材料。最后，经B16荷瘤小鼠皮下药物注射研究，证明了由于某些功能蛋白被裂解物@ pDFY富集，裂解物@ pDFY可以成功激活体内抗癌免疫反应。
5. DFY在不可切除黑色素瘤中的抗癌作用。
随后，研究者对抗原工程系统的肿瘤抑制能力进行了分析。抗PD1抗体（aPD1）或化学治疗药物已与基于DFY的抗原工程系统结合用于治疗B16荷瘤小鼠（图5a）实验结果表明DFY + aPD1的治疗抑制了91％的肿瘤生长。研究者还记录了各种治疗后小鼠的存活率（图5c）。在所有组中，用DFY + aPD1处理的小鼠的存活时间最长。该结果表明，肿瘤周围注射DFY不仅可以收集可能含有肿瘤抗原的肿瘤蛋白，而且可以将免疫原性肿瘤蛋白递送至APC并引起随后的CTL激活以抑制肿瘤进展。酶联免疫吸附试验（ELISA）显示，DFY + aPD1处理后，包括干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）在内的免疫激活标记物增加（图5f）。
6. DFY经皮给药治疗黑色素瘤。
研究者将凝胶状的DFY @ gel作为一种透皮治疗系统，粘附在皮肤上时释放DFY。如图6g所示，在相同深度下，用DFY @ gel治疗的肿瘤的平均荧光强度（MFI）高于DFY。使用V-C扩散池和荧光光谱仪研究了分离的猪皮中DFY @ gel的透皮吸收。与游离DFY相比，DFY @ gel的透皮渗透提高了1.5倍（图6h）。然后通过测量肿瘤体积评估DFY @ gel抑制肿瘤生长的能力（图6i）。在为期16天的实验中，DFY @ gel显示出与DFY（腹膜内注射）相似的治疗效果。IFN-α在临床上用于术后黑色素瘤的治疗。与临床方案相比，评估了DFY @ gel的治疗效果。IFN-α和经皮凝胶治疗均显着抑制了肿瘤的复发。该结果表明透皮DFY @ gel在预防黑素瘤复发方面具有与临床上使用的IFN-α几乎相同的治疗效果。
四、小结
在这项研究中，研究者设计了一种基于肽的肿瘤蛋白工程系统，该系统对黑素瘤治疗表现出强大的免疫原性。一旦进入恶性黑色素瘤细胞，该三肽进行酪氨酸酶催化的氧化聚合。同时，通过迈克尔加成反应还捕获了来自细胞核，线粒体和核糖体的高免疫原性功能蛋白，这引起了类似于坏死的快速细胞死亡。随后，肿瘤蛋白交联的pDFY从垂死和破裂的癌细胞中释放出来，形成的聚集纤维更易于被APC内吞。因此，设计的肿瘤蛋白质工程系统成功地收集了免疫原性蛋白质并将其递送至APC，并表现出辅助作用以增强免疫应答以消除肿瘤。DFY的经皮免疫疗法在小鼠和小型猪模型中也显示出高效率和高生物相容性，并显着延长了肿瘤小鼠的存活时间。在可切除的黑色素瘤中，发现DFY@gel具有与临床IFN-α治疗相似的复发预防效果。
了解金开瑞iTRAQ定量蛋白质组学技术：https://t.cn/A6V4xP7Y
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