【环时深度|从瘟疫噩梦到德堡疑云，美国为何对生物武器如此“迷恋”？】#美国为何对生物武器如此迷恋# 编者的话：美国在俄乌爆发军事冲突前煽风点火。眼见火起，华盛顿一边火上浇油，一边尽量远离“火场”，生怕烧到自己。可是，人算不如天算，还是有一颗火星溅到美国身上，烧出一个大洞，引得大家纷纷围过来往洞里瞧，想搞清楚美国人到底在遮掩什么。俄罗斯总统普京说，乌克兰在美国军方的指导和支持下开展军事生物计划。中国外交部发言人也表示,中方呼吁美国开放在乌克兰的生物实验室供国际专家独立调查,并停止独家反对建立《禁止生物武器公约》核查机制。我们几乎可以肯定的是，这些合理要求不会被美国所接受，因为美国推动生物武器的研制、试验、开发和大规模使用，已有近百年时间了。在这段时间里，美国对这种武器的认知在持续加深。我们只有理清美国对生物武器深度认知的过程，才能透过纷纷杂杂的事件以及真真假假的信息，看清华盛顿的底层逻辑，明白美国“欲罢不能”的根本原因。
瘟疫的“可怕”与“可用”
在人类历史上，如果有一个恐怖排行榜的话，居于榜首的肯定是瘟疫。1346年，可怕的鼠疫在现在的乌克兰境内暴发，外逃的人们把这个“死神”带到了西西里岛，之后扩散到整个欧洲大陆。在短短5年时间里，第一波鼠疫就杀死了欧洲1/3到1/2的人口。其实，早在这场大灾难发生1000多年前，强大的罗马帝国就曾经5次被鼠疫攻击。这种可怕的瘟疫不仅严重削弱了罗马帝国，而且击碎了东罗马帝国的复兴之梦。另一种可怕的瘟疫就是天花。15世纪末，当欧洲殖民者登上美洲新大陆的时候，他们带去了这种最致命的“武器”。为什么当时几百名西班牙殖民者能够征服有2500万人口的阿兹台克帝国（现墨西哥）呢？因为阿兹台克人俘虏的一名西班牙士兵染上了天花。之后10年内，阿兹台克人口减少到650万人，生存者也丧失了斗志，一个强大的帝国就此消亡。
瘟疫无疑是人类的噩梦，但如何解梦有两个方向：一个是人类顽强地与病魔作斗争，不断去追求光明；另一个是研究可怕瘟疫的“可用”之处，一步步走向黑暗。瘟疫是可怕的，它对人类的攻击是无差别的，就像发动一场“全民战争”，而故意传播瘟疫的人则是全民公敌。从古至今，无论是瘟疫的传播者，还是生物武器的研发者，都在自己的脑门上深深地刻下两个字——绝密。在二战中，美国军方保密级别最高的工程有两项，一个是研制核武器的“曼哈顿计划”，另一个就是美军化学作战部特别计划处推动的生物武器工程。两个工程在人员上绝不允许交织，相关人员也不允许离开美国。
美国与生物武器：从“相知”“相恋”到“结婚”“生子”
1944年，英国制定了一个绝密轰炸计划，打算派遣重型轰炸机群携带4万多枚特制炸弹，重点轰炸包括柏林、汉堡等在内的6座德国城市。这些炸弹每枚都包括106颗重1.8公斤的“炭疽弹”。据计算，这400多万颗“炭疽弹”能杀死300万德国平民。轰炸过后，被炸过的地方将成为人类禁区。与此同时，英军还打算向德国空投几百万个“炭疽牛肉饼”。这些饼并不是牛肉做的，而是牛非常喜欢吃的亚麻籽饼。英方组织女工往这些饼中注入炭疽热孢子，这种病菌会导致牛大量死亡，并使人类患上炭疽病。肉牛和奶牛的“消亡”将直接影响德国军队和百姓的食品供应。
以上这些计划最终因过于残酷以及盟军已在战场上掌握主动权而没有付诸实施。不过，这种“炭疽弹”已经被大量生产出来。它的诞生地是美国印第安纳州维哥县的一家兵工厂。之所以英国要与美国合作，是因为生物武器的大规模研发、试验、储存和生产，需要有强大的工业实力作为后盾，美国很符合要求，而且愿意参与其中。
以上这些历史告诉我们，美国的生物武器计划始于欧洲的“需求”。生物武器研制真正上升到国家层面是从20世纪20年代开始的，法国首开其端，英美等国紧随其后。这些国家之所以对生物武器研发“趋之若鹜”，是因为这些武器与化学武器一样，能在不摧毁基础设施的情况下，对敌方进行大规模杀伤，同时保存自己的实力。与化学武器等大规模杀伤性武器相比，生物武器有几个特点更受重视：一是全面无差别杀伤，而且以针对平民为主，可以削弱敌国的参战能力；二是使用更加隐蔽，很容易被认为是战争期间“正常”的疫情暴发；三是防护困难；四是技术门槛相对低，成本要求也不高，而且杀伤力并不弱。
在二战中，英国认为德国可能用轰炸机对英发动生物战，因此大力开发生物武器，以随时对德国进行报复，而向英国提供“弹药”的重任就落在了美国身上。1943年，美军的化学作战部组建了高度保密的特别计划处，这个机构以马里兰州弗雷德里克的德特里克营为中心，而德特里克营就是后来在生物武器方面“驰名全球”的德特里克堡。特别计划处建立后，甚至在美国军队内部都高度保密，相关技术人员直接听命于化学作战部官员和华盛顿。美国当时的态度是不在战场上首先使用化学和生物武器，但生产大量的化学战剂和生物弹药提供给英国。为此，化学作战部把位于维哥县的一家兵工厂作为秘密试验和生产的据点。据点中有铁路专线，有1.8万平方米的爆炸试验场地，有46个弹药库和３个大型地下储藏设施，还有厂房和上千人的兵营。美军在这里大量生产炭疽孢子、特制炸弹和炸弹填充物。德特里克营则于1944年开办生物战学校，这所学校培养的大批军官被派往欧洲和太平洋战场。在更大的范围内，特别计划处与包括哈佛大学在内的很多美国名校进行科研合作。
到二战结束前，美国在生物武器研发方面投入的资金达到了恐怖的4亿美元，而耗资巨大的原子弹项目只是它的5倍。在日本快要投降时，美国计划终止特别计划处的工作，将战时形成的生产力逐渐转向和平用途，但当时的美军作战部部长斯蒂姆逊下令，生物战的研究活动不能停。这才有了后来美国为臭名昭著的日军731部队军官提供庇护的丑闻，以及在朝鲜战场上对中朝军队使用生物武器的事件。
冷战的到来彻底改变了美国对生物武器的态度。生物战构想达到顶峰，因为美方希望生物武器的攻击力达到核武器级别，或者在使用核弹之后，马上使用生物武器，以彻底摧毁对方的军事目标和人们的抵抗意志。此外，在冷战两大阵营进行高度紧张的军事对峙情况下，使用生物武器“不着痕迹”的特点受到重视。事实上，美国一直在“生化并举”，不仅在朝鲜战争中使用过生物武器，也在越南战争中用过脱叶剂和针对农作物的抑制剂。古巴导弹危机发生时，美军做好了播撒委内瑞拉马脑炎病毒的准备。
虽然美国在暗中干得很欢，但生物和化学武器始终是不被国际社会所接受的。1969年，美国媒体曝光了曾被掩盖的生化武器事故，美国国内哗然，而美军在越南使用化学武器也受到国际谴责。美苏之间开始筹备军控谈判。在各方压力下，时任美国总统尼克松于1969年11月25日发表讲话，宣布美国放弃生物武器，并限制化学武器的生产。然而，所谓的“放弃”是指美国将生物武器的研发限定在防卫范畴内。后来，美国认为苏联是一个生物武器领域的庞然大物，所以华盛顿有意模糊防卫和进攻之间的区别，在极端保密的情况下始终没有放弃相关研发。
美国版“生化危机”为何“生生不息”
1991年，苏联轰然倒塌。之后，美国国防部国防减灾局制定了一项旨在销毁俄罗斯和独联体国家核武器、化学武器及其他大规模杀伤性武器的计划，其中就包括“减少生物威胁计划”。与此同时，美国军方乘虚而入，以防止生物威胁为幌子“猎取”苏联生物武器专家和技术，并对苏联遗留在独联体各国的生物设施进行升级改造，建立高级别防护的生物实验室，同时还获得苏联在生物武器领域的许多研究成果。
最大对手“突然死亡”，美国人本以为可以高枕无忧了，但很快笑容就从他们的脸上消失了。因为美国人发现，一个苏联倒下去，还有更多敌人冒出来。巴尔干、中东和非洲的战乱国家、各种极端组织，甚至一些个人，从国际市场上获得大国研制的非常规武器都变得更容易了。如果说核武器门槛较高、化学武器打击能力有限的话，那么生物武器不仅“易得”，而且“好用”，因为它针对的是没有防护能力的平民。
冷战结束后的前十年，美国的目光紧紧盯着几个反美国家。转折点是2001年的“9·11”事件，在恐怖分子劫持飞机发起自杀式袭击后，出现了大规模的炭疽邮件攻击。当时，数百人接触到了炭疽孢子。在此之前，美国在执行《禁止生物武器公约》方面已经有所后退，此后更是态度消极。它在国内建立强大民防系统的同时，在国际上大量部署由军方控制的生物实验室。美国人意识到，能威胁到美国的生物武器，如果与美国的强大科技和军事实力“嫁接”，一定能成为自己手中的撒手锏。
纵观美国历史，从建国到现在，240多年只有16年没打仗。这充分说明，美国人才是名副其实的“战斗民族”。中国明代思想家、文学家、军事家王守仁也就是王阳明说过一句名言——破山中贼易，破心中贼难。美国就是典型的“心贼太盛”、贪欲横行。美国脑海中有太多的敌人，只要有敌人在，华盛顿对生物武器的“迷恋”就不会停止。（《环球时报》3月22日7版文章，作者： 李 剑）
瘟疫的“可怕”与“可用”
在人类历史上，如果有一个恐怖排行榜的话，居于榜首的肯定是瘟疫。1346年，可怕的鼠疫在现在的乌克兰境内暴发，外逃的人们把这个“死神”带到了西西里岛，之后扩散到整个欧洲大陆。在短短5年时间里，第一波鼠疫就杀死了欧洲1/3到1/2的人口。其实，早在这场大灾难发生1000多年前，强大的罗马帝国就曾经5次被鼠疫攻击。这种可怕的瘟疫不仅严重削弱了罗马帝国，而且击碎了东罗马帝国的复兴之梦。另一种可怕的瘟疫就是天花。15世纪末，当欧洲殖民者登上美洲新大陆的时候，他们带去了这种最致命的“武器”。为什么当时几百名西班牙殖民者能够征服有2500万人口的阿兹台克帝国（现墨西哥）呢？因为阿兹台克人俘虏的一名西班牙士兵染上了天花。之后10年内，阿兹台克人口减少到650万人，生存者也丧失了斗志，一个强大的帝国就此消亡。
瘟疫无疑是人类的噩梦，但如何解梦有两个方向：一个是人类顽强地与病魔作斗争，不断去追求光明；另一个是研究可怕瘟疫的“可用”之处，一步步走向黑暗。瘟疫是可怕的，它对人类的攻击是无差别的，就像发动一场“全民战争”，而故意传播瘟疫的人则是全民公敌。从古至今，无论是瘟疫的传播者，还是生物武器的研发者，都在自己的脑门上深深地刻下两个字——绝密。在二战中，美国军方保密级别最高的工程有两项，一个是研制核武器的“曼哈顿计划”，另一个就是美军化学作战部特别计划处推动的生物武器工程。两个工程在人员上绝不允许交织，相关人员也不允许离开美国。
美国与生物武器：从“相知”“相恋”到“结婚”“生子”
1944年，英国制定了一个绝密轰炸计划，打算派遣重型轰炸机群携带4万多枚特制炸弹，重点轰炸包括柏林、汉堡等在内的6座德国城市。这些炸弹每枚都包括106颗重1.8公斤的“炭疽弹”。据计算，这400多万颗“炭疽弹”能杀死300万德国平民。轰炸过后，被炸过的地方将成为人类禁区。与此同时，英军还打算向德国空投几百万个“炭疽牛肉饼”。这些饼并不是牛肉做的，而是牛非常喜欢吃的亚麻籽饼。英方组织女工往这些饼中注入炭疽热孢子，这种病菌会导致牛大量死亡，并使人类患上炭疽病。肉牛和奶牛的“消亡”将直接影响德国军队和百姓的食品供应。
以上这些计划最终因过于残酷以及盟军已在战场上掌握主动权而没有付诸实施。不过，这种“炭疽弹”已经被大量生产出来。它的诞生地是美国印第安纳州维哥县的一家兵工厂。之所以英国要与美国合作，是因为生物武器的大规模研发、试验、储存和生产，需要有强大的工业实力作为后盾，美国很符合要求，而且愿意参与其中。
以上这些历史告诉我们，美国的生物武器计划始于欧洲的“需求”。生物武器研制真正上升到国家层面是从20世纪20年代开始的，法国首开其端，英美等国紧随其后。这些国家之所以对生物武器研发“趋之若鹜”，是因为这些武器与化学武器一样，能在不摧毁基础设施的情况下，对敌方进行大规模杀伤，同时保存自己的实力。与化学武器等大规模杀伤性武器相比，生物武器有几个特点更受重视：一是全面无差别杀伤，而且以针对平民为主，可以削弱敌国的参战能力；二是使用更加隐蔽，很容易被认为是战争期间“正常”的疫情暴发；三是防护困难；四是技术门槛相对低，成本要求也不高，而且杀伤力并不弱。
在二战中，英国认为德国可能用轰炸机对英发动生物战，因此大力开发生物武器，以随时对德国进行报复，而向英国提供“弹药”的重任就落在了美国身上。1943年，美军的化学作战部组建了高度保密的特别计划处，这个机构以马里兰州弗雷德里克的德特里克营为中心，而德特里克营就是后来在生物武器方面“驰名全球”的德特里克堡。特别计划处建立后，甚至在美国军队内部都高度保密，相关技术人员直接听命于化学作战部官员和华盛顿。美国当时的态度是不在战场上首先使用化学和生物武器，但生产大量的化学战剂和生物弹药提供给英国。为此，化学作战部把位于维哥县的一家兵工厂作为秘密试验和生产的据点。据点中有铁路专线，有1.8万平方米的爆炸试验场地，有46个弹药库和３个大型地下储藏设施，还有厂房和上千人的兵营。美军在这里大量生产炭疽孢子、特制炸弹和炸弹填充物。德特里克营则于1944年开办生物战学校，这所学校培养的大批军官被派往欧洲和太平洋战场。在更大的范围内，特别计划处与包括哈佛大学在内的很多美国名校进行科研合作。
到二战结束前，美国在生物武器研发方面投入的资金达到了恐怖的4亿美元，而耗资巨大的原子弹项目只是它的5倍。在日本快要投降时，美国计划终止特别计划处的工作，将战时形成的生产力逐渐转向和平用途，但当时的美军作战部部长斯蒂姆逊下令，生物战的研究活动不能停。这才有了后来美国为臭名昭著的日军731部队军官提供庇护的丑闻，以及在朝鲜战场上对中朝军队使用生物武器的事件。
冷战的到来彻底改变了美国对生物武器的态度。生物战构想达到顶峰，因为美方希望生物武器的攻击力达到核武器级别，或者在使用核弹之后，马上使用生物武器，以彻底摧毁对方的军事目标和人们的抵抗意志。此外，在冷战两大阵营进行高度紧张的军事对峙情况下，使用生物武器“不着痕迹”的特点受到重视。事实上，美国一直在“生化并举”，不仅在朝鲜战争中使用过生物武器，也在越南战争中用过脱叶剂和针对农作物的抑制剂。古巴导弹危机发生时，美军做好了播撒委内瑞拉马脑炎病毒的准备。
虽然美国在暗中干得很欢，但生物和化学武器始终是不被国际社会所接受的。1969年，美国媒体曝光了曾被掩盖的生化武器事故，美国国内哗然，而美军在越南使用化学武器也受到国际谴责。美苏之间开始筹备军控谈判。在各方压力下，时任美国总统尼克松于1969年11月25日发表讲话，宣布美国放弃生物武器，并限制化学武器的生产。然而，所谓的“放弃”是指美国将生物武器的研发限定在防卫范畴内。后来，美国认为苏联是一个生物武器领域的庞然大物，所以华盛顿有意模糊防卫和进攻之间的区别，在极端保密的情况下始终没有放弃相关研发。
美国版“生化危机”为何“生生不息”
1991年，苏联轰然倒塌。之后，美国国防部国防减灾局制定了一项旨在销毁俄罗斯和独联体国家核武器、化学武器及其他大规模杀伤性武器的计划，其中就包括“减少生物威胁计划”。与此同时，美国军方乘虚而入，以防止生物威胁为幌子“猎取”苏联生物武器专家和技术，并对苏联遗留在独联体各国的生物设施进行升级改造，建立高级别防护的生物实验室，同时还获得苏联在生物武器领域的许多研究成果。
最大对手“突然死亡”，美国人本以为可以高枕无忧了，但很快笑容就从他们的脸上消失了。因为美国人发现，一个苏联倒下去，还有更多敌人冒出来。巴尔干、中东和非洲的战乱国家、各种极端组织，甚至一些个人，从国际市场上获得大国研制的非常规武器都变得更容易了。如果说核武器门槛较高、化学武器打击能力有限的话，那么生物武器不仅“易得”，而且“好用”，因为它针对的是没有防护能力的平民。
冷战结束后的前十年，美国的目光紧紧盯着几个反美国家。转折点是2001年的“9·11”事件，在恐怖分子劫持飞机发起自杀式袭击后，出现了大规模的炭疽邮件攻击。当时，数百人接触到了炭疽孢子。在此之前，美国在执行《禁止生物武器公约》方面已经有所后退，此后更是态度消极。它在国内建立强大民防系统的同时，在国际上大量部署由军方控制的生物实验室。美国人意识到，能威胁到美国的生物武器，如果与美国的强大科技和军事实力“嫁接”，一定能成为自己手中的撒手锏。
纵观美国历史，从建国到现在，240多年只有16年没打仗。这充分说明，美国人才是名副其实的“战斗民族”。中国明代思想家、文学家、军事家王守仁也就是王阳明说过一句名言——破山中贼易，破心中贼难。美国就是典型的“心贼太盛”、贪欲横行。美国脑海中有太多的敌人，只要有敌人在，华盛顿对生物武器的“迷恋”就不会停止。（《环球时报》3月22日7版文章，作者： 李 剑）
#原代细胞是如何培养的？选择组织块还是消化液培养法？
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是极好的工具。
那么，原代细胞是如何培养的呢？
常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。
（一）组织块培养法
许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。
1. 设备材料
培养箱、冰箱、超净工作台／无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。
2. 操作步骤
（1） 在无菌条件下，取待培养的组织适量，置入小烧杯中， 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉组织块表面的血污。
（2）用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
（3）再用Hanks 溶液反复漂洗， 直至液体不混浊为止。等组织块下沉，将烧杯倾斜，用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml 青霉素、200μg/ml 链霉素）的培养液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培养液。
（5）用弯头吸管吸取组织小块，均匀地置于培养皿内表面，吸去多余的培养液，各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖，做好标记， 置37°C 的CO2培养箱内。
（6） 2~4h 后，于超净工作台中，缓缓地向培养皿中加入上述含20％血清及双抗溶液( 100U/ml 青霉素及100μg/ml 链霉素）的培养液少量，以使组织块浸没在培养液中。
（7）轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱， 如无特殊情况，不必观察。1~2 周后，可观察到细胞从组织块边缘长出，形成生长晕。
（9） 一般说来，若培养液无明显改变， 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面，即可进行传代培养。
3. 需要说明及注意的问题
（1） 如果是用培养瓶而不是培养皿，则接种组织块千培养瓶底壁后， 要轻轻地翻转培养瓶，令瓶底在上，盖好瓶盖后轻轻置入37°C 的CO2 培养箱， 2~4h 后，取出培养瓶，在超净工作台内打开瓶盖，仍令组织块在上方。在组织块对面瓶壁加入适量上述培养液。然后，轻轻翻转培养瓶，让组织块浸没于培养液中。盖好瓶盖后放回二氧化碳孵箱，继续培养。
（2） 从培养皿表面游离下来的组织块，弃去即可。
（3） 如果使用玻璃培养瓶，而不是新的塑料培养瓶，则最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾胶原，这样不但有利于组织块的黏附，而且可使细胞生长得更好。
（4）本方法适于各种组织的培养，操作者还可根据自己的实验需要和细胞种类加以修改。
（二）消化培养法
它与上述组织块培养法的主要区别有2 点。一要用酶制剂（最常用的是胰蛋白酶）处理组织块，除去细胞间质，使细胞相互分离，形成细胞悬液；二细胞生长方式多为单层( monolayer ) 。本方法的优点在于单层细胞更易摄取营养、排出代谢产物，因此生长较快，可较快地应用于实验研究；缺点是步骤颇为繁琐，操作不慎易污染。此外，消化处理要恰到好处，不然对细胞会有一定的损伤作用。
1. 操作程序
（1） 在无菌条件下， 取待培养的组织1cm3左右，置入平皿或烧杯中，以适量Hanks 溶液消洗3 次，去掉组织块表面的血污及结缔组织。
（2）以锋利的眼科剪将组织块反复剪碎，得到约0.5mm x 1mm 大小的小块。
（3）以Hanks 溶液冲洗数遍，稍候组织块下沉，吸除Hanks 溶液。
（4）用少量Hanks 溶液，将组织小块吸入预先置有无菌的磁力搅拌子的锥形烧杯中，再加入15~30ml 上述胰蛋白酶消化液。
（5）将锥形烧杯用橡皮塞盖紧，外封以锡箔。然后移至预先置入37°C 培养箱内的电磁搅拌器上。
（6）打开搅拌器的电源开关，使搅拌子旋转， 关好培养箱，让胰蛋白酶进行消化。
（7）在消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴于载片上，于光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散，立即加入适量Hanks 溶液，终止消化。通常需消化10~20min 。
（8）先以100μm 不锈钢筛过滤，滤去未消化的组织块或大细胞团（如获得的细胞量少，这些组织块可继续进行消化，以便取得较多细胞）。继以20μ 不锈钢筛过滤。
（9）将取得的滤液进行低速（每分钟500~ 1000 转）离心5min，吸除上清液。并用Hanks 溶液离心清洗1~2 次，最后加入含血清的培养液，搅匀，制成细胞悬液。
（10）用计数板计数，确定细胞悬液浓度，通常以1×105~3×105个接种于培养瓶或培养皿中。
2. 需要说明及注意的问题
（1） 用何种酶进行消化可视所培养细胞而定，除胰蛋白酶外，常用1 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞；用II 型胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
（2）如果没有不锈钢筛， 可用4 层纱布代替，但纱布要预先经高温高压灭菌。
（3） 严格地说，原代培养是指未经传代的细胞，但在实际工作中，人们常将10 代以内的细胞用作原代培养细胞，因为此时的细胞基本上保持着原有的生物学特性。
（4） 从原代培养的操作步骤不难看出，原代细胞中含有多种细胞成分，即它们是异质型( heterogeneity) 的群体，因此在设计实验及分析结果时，切勿忘记这一因素。
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是极好的工具。
那么，原代细胞是如何培养的呢？
常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。
（一）组织块培养法
许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。
1. 设备材料
培养箱、冰箱、超净工作台／无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。
2. 操作步骤
（1） 在无菌条件下，取待培养的组织适量，置入小烧杯中， 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉组织块表面的血污。
（2）用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
（3）再用Hanks 溶液反复漂洗， 直至液体不混浊为止。等组织块下沉，将烧杯倾斜，用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml 青霉素、200μg/ml 链霉素）的培养液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培养液。
（5）用弯头吸管吸取组织小块，均匀地置于培养皿内表面，吸去多余的培养液，各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖，做好标记， 置37°C 的CO2培养箱内。
（6） 2~4h 后，于超净工作台中，缓缓地向培养皿中加入上述含20％血清及双抗溶液( 100U/ml 青霉素及100μg/ml 链霉素）的培养液少量，以使组织块浸没在培养液中。
（7）轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱， 如无特殊情况，不必观察。1~2 周后，可观察到细胞从组织块边缘长出，形成生长晕。
（9） 一般说来，若培养液无明显改变， 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面，即可进行传代培养。
3. 需要说明及注意的问题
（1） 如果是用培养瓶而不是培养皿，则接种组织块千培养瓶底壁后， 要轻轻地翻转培养瓶，令瓶底在上，盖好瓶盖后轻轻置入37°C 的CO2 培养箱， 2~4h 后，取出培养瓶，在超净工作台内打开瓶盖，仍令组织块在上方。在组织块对面瓶壁加入适量上述培养液。然后，轻轻翻转培养瓶，让组织块浸没于培养液中。盖好瓶盖后放回二氧化碳孵箱，继续培养。
（2） 从培养皿表面游离下来的组织块，弃去即可。
（3） 如果使用玻璃培养瓶，而不是新的塑料培养瓶，则最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾胶原，这样不但有利于组织块的黏附，而且可使细胞生长得更好。
（4）本方法适于各种组织的培养，操作者还可根据自己的实验需要和细胞种类加以修改。
（二）消化培养法
它与上述组织块培养法的主要区别有2 点。一要用酶制剂（最常用的是胰蛋白酶）处理组织块，除去细胞间质，使细胞相互分离，形成细胞悬液；二细胞生长方式多为单层( monolayer ) 。本方法的优点在于单层细胞更易摄取营养、排出代谢产物，因此生长较快，可较快地应用于实验研究；缺点是步骤颇为繁琐，操作不慎易污染。此外，消化处理要恰到好处，不然对细胞会有一定的损伤作用。
1. 操作程序
（1） 在无菌条件下， 取待培养的组织1cm3左右，置入平皿或烧杯中，以适量Hanks 溶液消洗3 次，去掉组织块表面的血污及结缔组织。
（2）以锋利的眼科剪将组织块反复剪碎，得到约0.5mm x 1mm 大小的小块。
（3）以Hanks 溶液冲洗数遍，稍候组织块下沉，吸除Hanks 溶液。
（4）用少量Hanks 溶液，将组织小块吸入预先置有无菌的磁力搅拌子的锥形烧杯中，再加入15~30ml 上述胰蛋白酶消化液。
（5）将锥形烧杯用橡皮塞盖紧，外封以锡箔。然后移至预先置入37°C 培养箱内的电磁搅拌器上。
（6）打开搅拌器的电源开关，使搅拌子旋转， 关好培养箱，让胰蛋白酶进行消化。
（7）在消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴于载片上，于光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散，立即加入适量Hanks 溶液，终止消化。通常需消化10~20min 。
（8）先以100μm 不锈钢筛过滤，滤去未消化的组织块或大细胞团（如获得的细胞量少，这些组织块可继续进行消化，以便取得较多细胞）。继以20μ 不锈钢筛过滤。
（9）将取得的滤液进行低速（每分钟500~ 1000 转）离心5min，吸除上清液。并用Hanks 溶液离心清洗1~2 次，最后加入含血清的培养液，搅匀，制成细胞悬液。
（10）用计数板计数，确定细胞悬液浓度，通常以1×105~3×105个接种于培养瓶或培养皿中。
2. 需要说明及注意的问题
（1） 用何种酶进行消化可视所培养细胞而定，除胰蛋白酶外，常用1 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞；用II 型胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
（2）如果没有不锈钢筛， 可用4 层纱布代替，但纱布要预先经高温高压灭菌。
（3） 严格地说，原代培养是指未经传代的细胞，但在实际工作中，人们常将10 代以内的细胞用作原代培养细胞，因为此时的细胞基本上保持着原有的生物学特性。
（4） 从原代培养的操作步骤不难看出，原代细胞中含有多种细胞成分，即它们是异质型( heterogeneity) 的群体，因此在设计实验及分析结果时，切勿忘记这一因素。
北京赵作明律师点评。他山之石，为我辅路。把坏事变好事，把复杂变纯粹，这需要智慧和能力。俄乌冲突中展示的世界性深度反思的现象和力量令人欣慰，尼泊尔国内对MCC协议的真真假假反对，在实质上形成了对以美国为首干涉的一组有效策略——让他的5亿美元援助更好接受国内外监督，使其不能或尽可能少做妖，努力把美钞弄“干净”。安全的永恒性、动态性、相对性、关联性和总体不可分割性。一夜长梦，关于“未来形势下，符合国际法和各方意愿的领土组合（重整）问题”，究竟该如何的最佳解决方案，竟然活活把人难醒。这反映出自己的能力不足。全球变暖海平面上升，以及深刻地缘政治下的平衡，都会出现相关新情况新问题，谁主动谁就可能赢得先机，包括其他涉及土地的自然性新生成问题。
一、欧盟外交与安全政策高级代表博雷利认为，西方对俄罗斯犯下一系列错误，其中包括承诺乌克兰加入北约。他在接受法国TF1电视台采访时称：“我愿意承认，我们犯下一系列错误，我们失去让俄罗斯与西方接近的可能性。有些事情，我们本来能够做得更好，有些东西，我们先提出，但是无法落实，例如，承诺乌克兰和格鲁吉亚加入北约。我认为，做出一些无法实现的承诺是一个错误。”
二、当地时间周五，美国总统拜登称：“我们继续与欧洲盟友站在一起，发出明确无误的信息。我们将尽全力保卫北约的每一寸土地。”但他同时指出：“我们不会在乌克兰与俄罗斯开战。北约和俄罗斯之间的冲突将是第三次世界大战，这是我们一直极力避免的。”
外界注意到，对于“美国在什么情况下会军事干预乌克兰局势”这个问题，这是拜登迄今为止给出的最清晰答案。
此前，有美国国会议员推动在乌克兰设立禁飞区，但白宫否决了这个提议，因为这意味着美国或其盟友的空军需要将闯入禁飞区的俄战机击落。
另外近日，各媒体记者也在反复询问白宫，如果俄罗斯在乌克兰动用生化武器，这是否会突破导致美国军事介入的“红线”。
不过拜登本人及其内阁成员此前一直坚称，无意将美军部署到乌克兰与俄军对抗。
三、当地时间周五，总部位于意大利罗马的联合国粮农组织其在一份声明中表示，如果战争持续下去，还不清楚乌克兰能否收获庄稼，而俄罗斯明年粮食出口的前景也存在不确定性。
粮农组织称，俄罗斯是全球最大的小麦出口国，乌克兰是第五大小麦出口国，它们提供了全球19%的大麦、14%的小麦和4%的玉米，占全球谷物出口的三分之一以上。俄罗斯也是世界主要肥料出口国之一。
粮农组织总干事屈冬玉在一份声明中说：“这两个主要大宗商品出口国的农业活动可能受到干扰，这可能会严重加剧全球粮食不安全。”
俄乌冲突爆发后，粮农组织的食品价格指数在2月创下历史新高，随着冲突的影响在世界各地蔓延，价格指数预计会在未来几个月继续攀升。
报告称:“令人担忧的是，由此造成的全球供应缺口可能会使国际食品和饲料价格在本已上涨的水平上再上涨8 - 22%.”
据介绍，50个国家三成或以上的小麦供应依赖于俄罗斯和乌克兰，其中包括许多最不发达的国家，这使得这些国家尤为脆弱。
粮农组织称：“到2022/23年，全球营养不良人口数量可能增加800万至1300万人。”最显著的饥饿人口增长将出现在亚太区域，其次是撒哈拉以南非洲、近东和北非。
粮农组织敦促其他国家不要对本国农产品实施出口限制。该机构称，这些行动“会加剧价格波动，限制全球市场的缓冲能力，并在中期内产生了负面影响”。
在俄乌大规模冲突发生后，世界上许多国家已经宣布了食品出口限制，或正在考虑实施禁令，以保护国内供应。
四、在美国最晚2月28日的限定期限下，尼泊尔众议院27日晚间批准了受到众多关注的“千禧年挑战公司协议”（简称MCC协议）。“千禧年挑战公司协议”（简称MCC协议）。协议规定美政府援助5亿美元、尼泊尔政府投入1.3亿美元用于尼国内的基础设施建设。 美国驻尼泊尔大使馆在协议通过的第一时间发了声明，对尼泊尔议会的最新行动表示赞许，称尼泊尔现在可以努力实施协议了，还表示它对尼泊尔民众意味着“更多就业机会、可靠的电力供应以及更低的运输成本”。 但该协议中的部分条款，如规定该协议“优于尼泊尔国内法”、援助款不能用于“违反美国法律或美国政策”、MCC项目美方人员不受尼泊尔法院管辖等，在尼泊尔引发巨大争议，被反对人士称为“不平等条约”。
尼泊尔内阁也提交了对MCC协议的“解释性声明”。解释性声明的内容包括尼泊尔不加入美国任何战略、军事或安全同盟，其中也包括“印太战略”，声明还要求尼泊尔法律优先于协议，如果违反尼泊尔法律，尼泊尔有权利终止协议。据报道，尼泊尔已经向美国提交了解释性声明，并宣称如果美国不接受，那么尼泊尔就不会执行MCC协议。
2020-21财年，按财年平均汇率以美元计价，尼泊尔名义GDP折合360.88亿美元，同比增长7.2%，增量24.31亿美元；人均名义GDP折合1191美元，同比增长5.8%。
一、欧盟外交与安全政策高级代表博雷利认为，西方对俄罗斯犯下一系列错误，其中包括承诺乌克兰加入北约。他在接受法国TF1电视台采访时称：“我愿意承认，我们犯下一系列错误，我们失去让俄罗斯与西方接近的可能性。有些事情，我们本来能够做得更好，有些东西，我们先提出，但是无法落实，例如，承诺乌克兰和格鲁吉亚加入北约。我认为，做出一些无法实现的承诺是一个错误。”
二、当地时间周五，美国总统拜登称：“我们继续与欧洲盟友站在一起，发出明确无误的信息。我们将尽全力保卫北约的每一寸土地。”但他同时指出：“我们不会在乌克兰与俄罗斯开战。北约和俄罗斯之间的冲突将是第三次世界大战，这是我们一直极力避免的。”
外界注意到，对于“美国在什么情况下会军事干预乌克兰局势”这个问题，这是拜登迄今为止给出的最清晰答案。
此前，有美国国会议员推动在乌克兰设立禁飞区，但白宫否决了这个提议，因为这意味着美国或其盟友的空军需要将闯入禁飞区的俄战机击落。
另外近日，各媒体记者也在反复询问白宫，如果俄罗斯在乌克兰动用生化武器，这是否会突破导致美国军事介入的“红线”。
不过拜登本人及其内阁成员此前一直坚称，无意将美军部署到乌克兰与俄军对抗。
三、当地时间周五，总部位于意大利罗马的联合国粮农组织其在一份声明中表示，如果战争持续下去，还不清楚乌克兰能否收获庄稼，而俄罗斯明年粮食出口的前景也存在不确定性。
粮农组织称，俄罗斯是全球最大的小麦出口国，乌克兰是第五大小麦出口国，它们提供了全球19%的大麦、14%的小麦和4%的玉米，占全球谷物出口的三分之一以上。俄罗斯也是世界主要肥料出口国之一。
粮农组织总干事屈冬玉在一份声明中说：“这两个主要大宗商品出口国的农业活动可能受到干扰，这可能会严重加剧全球粮食不安全。”
俄乌冲突爆发后，粮农组织的食品价格指数在2月创下历史新高，随着冲突的影响在世界各地蔓延，价格指数预计会在未来几个月继续攀升。
报告称:“令人担忧的是，由此造成的全球供应缺口可能会使国际食品和饲料价格在本已上涨的水平上再上涨8 - 22%.”
据介绍，50个国家三成或以上的小麦供应依赖于俄罗斯和乌克兰，其中包括许多最不发达的国家，这使得这些国家尤为脆弱。
粮农组织称：“到2022/23年，全球营养不良人口数量可能增加800万至1300万人。”最显著的饥饿人口增长将出现在亚太区域，其次是撒哈拉以南非洲、近东和北非。
粮农组织敦促其他国家不要对本国农产品实施出口限制。该机构称，这些行动“会加剧价格波动，限制全球市场的缓冲能力，并在中期内产生了负面影响”。
在俄乌大规模冲突发生后，世界上许多国家已经宣布了食品出口限制，或正在考虑实施禁令，以保护国内供应。
四、在美国最晚2月28日的限定期限下，尼泊尔众议院27日晚间批准了受到众多关注的“千禧年挑战公司协议”（简称MCC协议）。“千禧年挑战公司协议”（简称MCC协议）。协议规定美政府援助5亿美元、尼泊尔政府投入1.3亿美元用于尼国内的基础设施建设。 美国驻尼泊尔大使馆在协议通过的第一时间发了声明，对尼泊尔议会的最新行动表示赞许，称尼泊尔现在可以努力实施协议了，还表示它对尼泊尔民众意味着“更多就业机会、可靠的电力供应以及更低的运输成本”。 但该协议中的部分条款，如规定该协议“优于尼泊尔国内法”、援助款不能用于“违反美国法律或美国政策”、MCC项目美方人员不受尼泊尔法院管辖等，在尼泊尔引发巨大争议，被反对人士称为“不平等条约”。
尼泊尔内阁也提交了对MCC协议的“解释性声明”。解释性声明的内容包括尼泊尔不加入美国任何战略、军事或安全同盟，其中也包括“印太战略”，声明还要求尼泊尔法律优先于协议，如果违反尼泊尔法律，尼泊尔有权利终止协议。据报道，尼泊尔已经向美国提交了解释性声明，并宣称如果美国不接受，那么尼泊尔就不会执行MCC协议。
2020-21财年，按财年平均汇率以美元计价，尼泊尔名义GDP折合360.88亿美元，同比增长7.2%，增量24.31亿美元；人均名义GDP折合1191美元，同比增长5.8%。
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