自2012年CRISPR/Cas9基因编辑技术问世,DNA碱基编辑技术受到科研界的高度关注。为了提高碱基编辑效率,依次构建成功了第二代碱基编辑器(BE2)、第三代碱基编辑器(BE3)、和第四代碱基编辑器(ABE7.10、ABE 6.3、ABE 7.8和ABE 7.9)。
这些碱基编辑方法可实现在基因组DNA中直接产生所需的点突变,而不需要产生双链断裂(DSB)。但最近几项研究表明碱基编辑技术在基因组DNA研究中存在脱靶效应,常用的DNA碱基编辑器依赖的脱氨酶呈现出RNA结合活性。如:胞嘧啶碱基编辑器(CBE)中使用的胞嘧啶脱氨酶APOBEC1可以作用于DNA和RNA;腺嘌呤碱基编辑器(ABE)中使用的腺嘌呤脱氨酶TadA诱导RNA上的位点特异性肌苷形成。
然而,目前却缺乏由DNA碱基编辑引起的任何潜在的RNA突变的报道。针对该问题,腺相关病毒是DNA编辑基因疗法最常用的传递系统,这些病毒可以在体内维持长期基因表达,因此其用于DNA碱基编辑诱导的潜在RNA突变的程度受到高度重视。
所以,由周昌阳博士等人带领的研究团队,通过利用此系统定量评估了由CBEs和ABEs诱导的RNA单核苷酸变异(SNV)。发现了胞嘧啶碱基编辑器BE3和腺嘌呤碱基编辑器ABE7.10都产生了数万个脱靶RNA SNV。随后,利用工程化脱氨酶,找到了三种CBE变体和一种ABE变体能将脱靶RNA单核苷酸变异(SNV)降低至低水平状态,同时保持其有效的DNA靶向活性。该研究揭示了之前一直被忽略的DNA编辑技术产生的脱靶效应的问题,且证明了通过工程化脱氨酶可以消除这种效应。
诺唯赞(Vazyme)One Step Mouse Genotyping Kit(Vazyme PD101)助力该项科研研究。One Step Mouse Genotyping Kit提供了整套的DNA粗提取以及PCR扩增体系,适用于小鼠基因型快速鉴定 (Rapid Genotyping)。可用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中快速释放基因组DNA,产物可直接进行PCR扩增,无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作,极大缩短了实验耗时。
试剂盒中配有2×Taq Plus Master Mix (Dye Plus),包含高性能的 Taq Plus DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系,PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了开管/移液等操作,显著降低了样品交叉污染并且提高了检测通量和结果的重现性。独特的保护剂使得TaqPlus Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。体系中预混有电泳缓冲液和染料,可在反应结束后直接进行电泳,使用方便快捷。
在该实验中,293T细胞的裂解采用了该试剂盒中的裂解Buffer,获得的粗品DNA随后用于Sanger测序,通过测序数据结果分析,从而鉴定不同的DNA碱基编辑器产生的效率。
该研究团队利用转录组水平的RNA测序技术,发现了DNA单碱基编辑技术存在着大量的RNA脱靶效应的问题,初次证明了BE3、BE3-hA3A和ABE7.10等多个单碱基编辑技术均产生大量的RNA脱靶现象,同时验证了ABE7.10碱基编辑器还会导致大量的与癌症相关的癌基因和抑癌基因的突变,有较强的致癌风险。此外,ABE7.10F148A 有望应用于高特异性的DNA与RNA水平的碱基编辑,且不存在脱靶效应,为单碱基编辑技术进入临床治疗领域打下了夯实的基础。
产品信息
名称:One Step Mouse Genotyping Kit
货号:PD101-01
产品优势
1、基于蛋白酶 K 的特制裂解液
使用时,将组织浸泡在预添加了Proteinase K的裂解液中,55℃孵育20 min后95℃加热5 min即可灭活Proteinase K。
2、裂解产物直接用于PCR扩增,无需提取基因组
裂解产物经离心后可直接用做PCR扩增模板,无需传统提取方式的匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作,极大缩短了实验耗时。也可将裂解产物上清转移至另一个灭菌EP管中,- 20℃可存放至少三个月。
3、广泛适用于2 kb以内目标片段扩增,并适用于4对引物以内的多重PCR 反应。
适用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中快速释放基因组DNA,可扩增2kb以内基因进行基因型鉴定,扩增多重性达到4重。
这些碱基编辑方法可实现在基因组DNA中直接产生所需的点突变,而不需要产生双链断裂(DSB)。但最近几项研究表明碱基编辑技术在基因组DNA研究中存在脱靶效应,常用的DNA碱基编辑器依赖的脱氨酶呈现出RNA结合活性。如:胞嘧啶碱基编辑器(CBE)中使用的胞嘧啶脱氨酶APOBEC1可以作用于DNA和RNA;腺嘌呤碱基编辑器(ABE)中使用的腺嘌呤脱氨酶TadA诱导RNA上的位点特异性肌苷形成。
然而,目前却缺乏由DNA碱基编辑引起的任何潜在的RNA突变的报道。针对该问题,腺相关病毒是DNA编辑基因疗法最常用的传递系统,这些病毒可以在体内维持长期基因表达,因此其用于DNA碱基编辑诱导的潜在RNA突变的程度受到高度重视。
所以,由周昌阳博士等人带领的研究团队,通过利用此系统定量评估了由CBEs和ABEs诱导的RNA单核苷酸变异(SNV)。发现了胞嘧啶碱基编辑器BE3和腺嘌呤碱基编辑器ABE7.10都产生了数万个脱靶RNA SNV。随后,利用工程化脱氨酶,找到了三种CBE变体和一种ABE变体能将脱靶RNA单核苷酸变异(SNV)降低至低水平状态,同时保持其有效的DNA靶向活性。该研究揭示了之前一直被忽略的DNA编辑技术产生的脱靶效应的问题,且证明了通过工程化脱氨酶可以消除这种效应。
诺唯赞(Vazyme)One Step Mouse Genotyping Kit(Vazyme PD101)助力该项科研研究。One Step Mouse Genotyping Kit提供了整套的DNA粗提取以及PCR扩增体系,适用于小鼠基因型快速鉴定 (Rapid Genotyping)。可用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中快速释放基因组DNA,产物可直接进行PCR扩增,无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作,极大缩短了实验耗时。
试剂盒中配有2×Taq Plus Master Mix (Dye Plus),包含高性能的 Taq Plus DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系,PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了开管/移液等操作,显著降低了样品交叉污染并且提高了检测通量和结果的重现性。独特的保护剂使得TaqPlus Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。体系中预混有电泳缓冲液和染料,可在反应结束后直接进行电泳,使用方便快捷。
在该实验中,293T细胞的裂解采用了该试剂盒中的裂解Buffer,获得的粗品DNA随后用于Sanger测序,通过测序数据结果分析,从而鉴定不同的DNA碱基编辑器产生的效率。
该研究团队利用转录组水平的RNA测序技术,发现了DNA单碱基编辑技术存在着大量的RNA脱靶效应的问题,初次证明了BE3、BE3-hA3A和ABE7.10等多个单碱基编辑技术均产生大量的RNA脱靶现象,同时验证了ABE7.10碱基编辑器还会导致大量的与癌症相关的癌基因和抑癌基因的突变,有较强的致癌风险。此外,ABE7.10F148A 有望应用于高特异性的DNA与RNA水平的碱基编辑,且不存在脱靶效应,为单碱基编辑技术进入临床治疗领域打下了夯实的基础。
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名称:One Step Mouse Genotyping Kit
货号:PD101-01
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1、基于蛋白酶 K 的特制裂解液
使用时,将组织浸泡在预添加了Proteinase K的裂解液中,55℃孵育20 min后95℃加热5 min即可灭活Proteinase K。
2、裂解产物直接用于PCR扩增,无需提取基因组
裂解产物经离心后可直接用做PCR扩增模板,无需传统提取方式的匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作,极大缩短了实验耗时。也可将裂解产物上清转移至另一个灭菌EP管中,- 20℃可存放至少三个月。
3、广泛适用于2 kb以内目标片段扩增,并适用于4对引物以内的多重PCR 反应。
适用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中快速释放基因组DNA,可扩增2kb以内基因进行基因型鉴定,扩增多重性达到4重。
想表白一下我大一这一年中最重要的贵人,给了我太多温暖与依靠的学姐[心]
记得是在新生报道那天在马院帐篷的旁边初次相识,到后来一起在部门工作,成为了我的部长。她就像一颗开心果一样,和她在一起永远是很放松的状态,因为她会将就着你,也会注意到你的情绪。
无论是在学校还是出去旅游,只要和她在一起,都会是被照顾的那一个。我们两个总是喜欢问彼此你想吃什么,买了好吃的也会惦记着对方,一定是彼此减肥路上最大的绊脚石。虽然她老是说我傻,但是还不是对我好[太开心][太开心][太开心]
记得在海滩的时候,她说:我们一定要一直联系哦!嗯,我们一定要一直联系[心]
未来漫漫长路,放心,我一定一直站在你这边[心]
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#黄子韬[超话]# #遇见子韬,共享浓醇好时光#
新粉报道,初次追星,求带路~求指路~[太开心]
顺便求问图是谁做的?用来当头像可以吗?
如何可以,有没有大神可以教我做图或者帮忙把字弄到头像中间啊?
跪求……图太好看了~但是字没能在头像里看到,好可惜……
@猜猜下个会是谁 #Z.TAO的MV合伙人#
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