#原代细胞是如何培养的?选择组织块还是消化液培养法?

原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官,让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体,它们的生物性状尚未发生很大的改变,在一定程度上可反映它们在体内的状态,表现出来源组织或细胞的特性, 因此用于药物实验,尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等,是极好的工具。

那么,原代细胞是如何培养的呢?

常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。

(一)组织块培养法

许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养,因为方法简单,细胞也较容易生长。尤其是培养心肌,有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后, 即可进行传代。

1. 设备材料

培养箱、冰箱、超净工作台/无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。

2. 操作步骤

(1) 在无菌条件下,取待培养的组织适量,置入小烧杯中, 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次,去掉组织块表面的血污。
(2)用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
(3)再用Hanks 溶液反复漂洗, 直至液体不混浊为止。等组织块下沉,将烧杯倾斜,用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。
(4)用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml 青霉素、200μg/ml 链霉素)的培养液再清洗,用吸管吸干后加入5ml 含20%血清的培养液。
(5)用弯头吸管吸取组织小块,均匀地置于培养皿内表面,吸去多余的培养液,各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖,做好标记, 置37°C 的CO2培养箱内。
(6) 2~4h 后,于超净工作台中,缓缓地向培养皿中加入上述含20%血清及双抗溶液( 100U/ml 青霉素及100μg/ml 链霉素)的培养液少量,以使组织块浸没在培养液中。
(7)轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱, 如无特殊情况,不必观察。1~2 周后,可观察到细胞从组织块边缘长出,形成生长晕。
(9) 一般说来,若培养液无明显改变, 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面,即可进行传代培养。

3. 需要说明及注意的问题

(1) 如果是用培养瓶而不是培养皿,则接种组织块千培养瓶底壁后, 要轻轻地翻转培养瓶,令瓶底在上,盖好瓶盖后轻轻置入37°C 的CO2 培养箱, 2~4h 后,取出培养瓶,在超净工作台内打开瓶盖,仍令组织块在上方。在组织块对面瓶壁加入适量上述培养液。然后,轻轻翻转培养瓶,让组织块浸没于培养液中。盖好瓶盖后放回二氧化碳孵箱,继续培养。
(2) 从培养皿表面游离下来的组织块,弃去即可。
(3) 如果使用玻璃培养瓶,而不是新的塑料培养瓶,则最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾胶原,这样不但有利于组织块的黏附,而且可使细胞生长得更好。
(4)本方法适于各种组织的培养,操作者还可根据自己的实验需要和细胞种类加以修改。

(二)消化培养法

它与上述组织块培养法的主要区别有2 点。一要用酶制剂(最常用的是胰蛋白酶)处理组织块,除去细胞间质,使细胞相互分离,形成细胞悬液;二细胞生长方式多为单层( monolayer ) 。本方法的优点在于单层细胞更易摄取营养、排出代谢产物,因此生长较快,可较快地应用于实验研究;缺点是步骤颇为繁琐,操作不慎易污染。此外,消化处理要恰到好处,不然对细胞会有一定的损伤作用。

1. 操作程序

(1) 在无菌条件下, 取待培养的组织1cm3左右,置入平皿或烧杯中,以适量Hanks 溶液消洗3 次,去掉组织块表面的血污及结缔组织。
(2)以锋利的眼科剪将组织块反复剪碎,得到约0.5mm x 1mm 大小的小块。
(3)以Hanks 溶液冲洗数遍,稍候组织块下沉,吸除Hanks 溶液。
(4)用少量Hanks 溶液,将组织小块吸入预先置有无菌的磁力搅拌子的锥形烧杯中,再加入15~30ml 上述胰蛋白酶消化液。
(5)将锥形烧杯用橡皮塞盖紧,外封以锡箔。然后移至预先置入37°C 培养箱内的电磁搅拌器上。
(6)打开搅拌器的电源开关,使搅拌子旋转, 关好培养箱,让胰蛋白酶进行消化。
(7)在消化过程中,每隔一定时间吸取消化物滴于载片上,于光学显微镜下观察,检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散,立即加入适量Hanks 溶液,终止消化。通常需消化10~20min 。
(8)先以100μm 不锈钢筛过滤,滤去未消化的组织块或大细胞团(如获得的细胞量少,这些组织块可继续进行消化,以便取得较多细胞)。继以20μ 不锈钢筛过滤。
(9)将取得的滤液进行低速(每分钟500~ 1000 转)离心5min,吸除上清液。并用Hanks 溶液离心清洗1~2 次,最后加入含血清的培养液,搅匀,制成细胞悬液。
(10)用计数板计数,确定细胞悬液浓度,通常以1×105~3×105个接种于培养瓶或培养皿中。

2. 需要说明及注意的问题

(1) 用何种酶进行消化可视所培养细胞而定,除胰蛋白酶外,常用1 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞;用II 型胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
(2)如果没有不锈钢筛, 可用4 层纱布代替,但纱布要预先经高温高压灭菌。
(3) 严格地说,原代培养是指未经传代的细胞,但在实际工作中,人们常将10 代以内的细胞用作原代培养细胞,因为此时的细胞基本上保持着原有的生物学特性。
(4) 从原代培养的操作步骤不难看出,原代细胞中含有多种细胞成分,即它们是异质型( heterogeneity) 的群体,因此在设计实验及分析结果时,切勿忘记这一因素。

#电脑哪些配件可丐且不影响性能#
根据我多年的(翻车)经验
1.内存、固态可以丐
(不过要在正规颗粒正规品牌的前提下)
这两个东西的性能好坏并不会明显地影响日常使用/游戏/创作时的性能表现。
哪怕是能够超频到5000MHz的顶级B-die内存,在日常使用时和便宜的科赋裸条基本没有区别。很多人高估了内存频率对游戏性能的影响,认为用5000MHz内存玩游戏时帧数能比3000MHz强很多。实际上,差距可能只有1-3%,甚至0%,负1%也能有可能。高端内存是硬件发烧友的玩具,普通玩家如果不喜欢折腾,购买高端内存纯属浪费钱。
此外,还有些高端内存卖点其实是颜值!
固态也是如此,980pro 1t也无法让游戏加载速度/日常软件打开速度比入门级固态(比如RC10 1T)快很多,即使有差距,也很小。而且,高端固态并不能提高游戏帧数。如果没有特别的读写需求,高端固态并没有太大意义。
只要没坏,高端/低端的内存/固态在游戏和日常使用中差距很小。但是,我依然不会推荐特别特别丐的内存/固态,尤其是固态,万一坏了,宝贵的数据就没了。
我认为,固态只能买正规颗粒正规品牌的产品,同为正规颗粒+正规品牌的情况下,高端/低端固态的差距很小。内存可以考虑颗粒来路不明的,内存出问题只是死机一次,不会和固态一样导致数据全丢,但是依然建议正规颗粒的,比如科赋、英睿达之类。
2.机箱可以丐
高端机箱散热好吗?其实不然,结构简单的破铁皮机箱散热往往比那些高端的铝合金+钢化玻璃机箱好很多。
高端机箱的唯一好处就是好看,设计感拉满。比如我在CPU测试视频里使用的追风者P600S,真的超级漂亮。
3.显卡可以丐
理论上,同芯片的高配卡和低配卡相比,高配卡的温度更低、超频潜力更好、使用体验更棒。但是现在低配卡的制作水平也越来越高了,低配卡也能把温度和噪音控制得不错。此外,现在RTX3070-RTX3090这种级别的显卡普遍啸叫,即使是高配卡也叫,因而体验也好不到哪去。比如我手头的RTX3070大雕就烦死人。
而最近几年的显卡厂家的技术也在不断进步,显卡出厂时已经被榨干了性能潜力,因而留给玩家操作的空间就很小了。即使是高端卡,超频潜力也非常弱。
那高配卡和乞丐卡的区别是什么?颜值。
有些朋友动不动就超龙、ROG,其实没必要,这些卡价格比普通的卡贵了一大截,性能提升没有,多花的钱基本都用来买漂亮的外壳了。现在我认为七彩虹ultra的性价比才是最高的,颜值也不差。之后映众冰龙超级版可能会大幅度降价,到时候也会非常值得买。
4,散热可以丐(在能压住温度的前提下)
Intel这边,如果不超频,如果不是i9-12900这种顶级CPU,那散热器用一百多元的利民AK140就行,AK140完全能在相对安静的情况下压住满载的i7-12700K。即使用2000元的ROG龙神360,也只是把CPU温度降低几度而已,CPU性能和使用体验上不会有区别。
AMD这边,众生平等。R9 5950X日常用的话,一百多元的AK140依然能轻松压住且维持高频率,持续满载的话,ROG龙神360也无法维持高频率。
其实,水冷的溢价非常高,ROG龙神360和299元的利民240水冷,性能差距也不会很大。随便举个栗子,假如用实体店的垃圾双热管散热器压i9-12900k是100度,利民AK120这种良心风冷可能是75度,猫头鹰D15S高端顶级风冷可能72度,利民240水冷可能62度,ROG龙神360则是60度。
5,主板不能丐
主板的丐体现在两个地方,
1,品牌丐
除了华硕/xx/微星/华擎以外的牌子,都不要买,翻车概率非常高。
首先,需要明确的是,主板比显卡更难做。撇开核心不论,因为核心是Intel/Nvidia/AMD提供的,不是主板/显卡制造商们自己做的。如果只讨论制造商自己负责的那部分,主板的技术含量比显卡高很多很多。说夸张点的话,如果我现在投资一笔钱,收购一些能用的二手核心(或许可以找精影问问门路),找到合适的代工厂,我也能做出以自己名字命名的显卡,比如表哥牌GTX 1080 Ti。
显卡买小众品牌的乞丐版,最多只是体验差点,又不是不能用。而杂牌主板经常是 直 接 无 法 使 用。具体表现为:次品率很高,买到手直接无法点亮。
这是大概是因为提高良品率的成本远比提供免费更换服务要低。每更换一次主板,对于厂家来说只需要承担十几元的物流和仓储费用。但是改良生产线,提高良品率的成本可能是几千万。这其实是把成本转嫁给消费者,多数消费者在装好电脑后再花费大量时间排查才能找到问题所在,这个过程浪费了消费者的时间、精力甚至金钱(检测费)。但是厂家完全不在意这些,反正只要把主板供电堆满,搭配些水军把黑这些主板的知乎回答举报掉(我就被举报过很多次),价格再降低点,就不愁卖不掉。
另外,就算不坏,也不好用,操作反人类,Bug一大堆。因为主板的精髓在BIOS和电路设计,这两项是小厂根本没有能力做好的。他们只能堆料、堆料、再堆料,把主板外表做的很好看,但是内里一塌糊涂。
显卡和主板不同的是,二三线品牌的显卡价格低、用起来和一线大厂没有区别,反而显得性价比很高。这是因为显卡直接套用NV/AMD的公版设计就行,显卡的vBIOS非常简单,和主板的BIOS完全不是一个概念。
2,用料丐
大品牌也有一堆低端板子,这些主板不适合搭配高端CPU
比如下面这个B660M-G,虽然非常值得推荐,性价比很高,但是供电太弱鸡,不适合搭配i7-12700K/i9-12900K之类的CPU。否则供电温度太高,轻则主板寿命下降,CPU频率无法跑满导致性能降低,重则板毁U亡。
供电差的低配板子只适合搭配i3 i5级别的CPU,切莫强行用小马拉大车。
相比之下,B660M MORTAR这种级别的板子,供电比B660M-G强了不止一个档次,而且做工扎实,带i9-12900K也是游刃有余。
6,电源不能丐

家用自驾可兼得,年轻人的第一台瓦罐,到店实拍Valli,7.98万起
随着生活水平提高,以及交通出行网络完善,最近几年自驾游越来越流行。久而久之除了传统轿车以及SUV外,消费者对于旅行车也开始感兴趣。但奈何国内旅行车市场,一直都是以进口、合资品牌为主,定位轻奢且不便宜,所以市场一直难以打开。然而随着自主品牌不断崛起进步,宝骏汽车率先带来一款9万级“瓦罐”——Valli,也是目前这个价位唯一一款在售的休旅车。那么,这款车的表现又是怎么样呢?这次我们就到4S店一探究竟。

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一进到店内便能够发现,宝骏Valli摆在一个非常显眼的位置,同时4S店员也告知,这款车算是目前宝骏的主打产品之一,既能满足家用又比较适合自驾。据了解,宝骏Valli共有四款车型,分别为莫干山谷、伊利牧场、大理天空、那曲繁星 ,价格对应为7.98、9.28、9.98、10.58万。而这台现场展车则是顶配版,采用了苏杭青的配色,有点沉稳商务的味道。

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先看外观,Valli和店内其它采用钻石标的宝骏车一对比,辨识度还是挺高的,但如果不看“车屁股”,只看前脸其实与家轿RC-5非常相似。前脸是一个倒梯形的中网,细长的LED日行灯通过镀铬饰条连接,营造了贯穿式的风格,进一步拉伸了视觉上的感官,再配合上下方的分体式大灯组,看起来比较时尚大气。

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侧面部分,Valli由于采用了旅行车的设计构造,所以视觉上的气质也是有着修长优雅的感觉。C柱后面则是采用了平直线条来收拢,不会给人太过臃肿的体验。配置上店内这款展车则是采用了215/55 R17的轮胎规格,而车顶原厂行李箱也算是这款车的一大亮点,容积能够达到500L,不仅能够让装载能力进一步提升,旅行车的味儿也显得更为浓厚。

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坐进车内,Valli内饰有一定的高级感,前排座舱采用了环抱式设计,阶梯式布局配合上规整排列的实体按键,带来了一种时尚简约的氛围。用料方面,Valli也还算主流,座椅、方向盘、扶手箱等绝大部分地方都是采用了仿皮材质覆盖,整体做工算是中规中矩,但按键反馈略显粘滞,考虑到价位,倒也符合情理。

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车机方面,Valli配备了全液晶仪表盘和中控大屏,出厂就有宝骏最新车联网2.0系统。所以点火启动之后,能够发现界面为更直观的卡片式布局,自带有导航、音乐、消息盒子等功能,还支持网易云音乐、抖音、爱奇艺等第三方工具。此外,它还可以通过语音指令来操控车内系统,包括打开空调、调低音量等。并且系统响应也较为流畅迅捷,基本没有卡顿、延迟现象。

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然后Valli的座椅舒适性表现也还不错,至少放在9万级车型里,算是非常优秀的水准。且由于是顶配,店内展车不仅配备了真皮座椅,驾驶位还具有电动调节、加热、通风等功能,靠背以及坐垫也比较柔软,坐在上面的包裹性比较不错。同时,它的主驾驶座椅与后视镜还有记忆功能,挂上“P”挡,后视镜即可自动下翻,配合360度环影,可提供最佳的泊车条件。

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空间部分,据店内展台的信息资料显示,这款Valli在没有车顶行李厢的情况下,长宽高分别为:4685/1806/1485mm,轴距为2700mm。笔者178cm的身高在驾驶位时,头部空间在四指左右,表现一般;然后保持座椅不变去到后排,头部空间为三指,腿部空间则能达到一拳左右,腿部空间具有一定的凸起,但能够放下双脚,使得长途乘坐不会感到太难受。

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除了500L顶箱外,Valli本身的后备厢也是亮点。据展车来看,该车的后排座椅进行了特定的优化,被称为“大平层”,放倒后能和后备厢呈现完全纯平的状态,最大进深可达1.8m,笔者平躺进去基本上没有什么大问题,并且除了能够用来放东西以外,宝骏官方还针对这个“双人床”后备厢,推出了一个可选装的原厂床垫,在野外的情况下,还可以当作临时的休息场所,适合自驾。

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最后动力部分,无论是展车还是其它车型,Valli都是配备的1.5T发动机,而这款顶配展车的传动配置则是CVT变速箱,最入门车型则是6MT手动变速箱。根据店员给出的数据来看,该车拥有最大功率147Ps,峰值扭矩250N·m的动力输出,NEDC油耗为6.8L/100km,经济性与性能兼顾的不错。

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综合来看,作为一款9万级瓦罐,Valli整车实际表现还是让我感到挺惊艳的。它的外观造型不仅修长动感,同时配置、性能方面也达到了同级主流甚至领先水平。结合丰富完善的配套设施,以及本身独特的旅行车定位,毫无疑问性价比赶超了绝大部分的同价位轿车以及SUV。如果你是平常工作家用,节假日又喜欢自驾游的年轻人,那么Valli应该值得一试。


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