【Hepatology | 与慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎或非酒精性脂肪性肝炎相关的重度肝纤维化和肝硬化的线粒体应激】
在实验模型中，乙型肝炎病毒（HBV）感染会导致线粒体氧化应激（OS）并改变线粒体。我们的目标是研究是否乙型肝炎病毒也有可能改变人类的肝脏线粒体，且由此产生的线粒体应激是否有可能影响慢性乙型肝炎纤维化的进程。
本研究纳入了146名未经治疗的单纯感染HBV的慢性乙型肝炎患者。慢性乙型肝炎患者中有重度肝纤维化的患者（AF）或肝硬化患者（F3-F4）与无肝纤维化或轻中度肝纤维化（F0-F2）患者相比较。慢性乙型肝炎患者进一步与慢性丙型肝炎（CHC；n=33）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH；n=12）及健康对照组（n=24）做比较。我们发现包括使mtDNA链断裂在内的对线粒体DNA的氧化损伤，并确认了与F0-F2期患者相比，F3-F4期患者存在多个线粒体DNA片段的缺失。在慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、非酒精性脂肪性肝炎患者里伴有重度肝纤维化或肝硬化的患者中观察到了线粒体功能、线粒体未折叠蛋白应答、生物合成、线粒体自噬及肝脏炎症的改变。在体外实验中，复制乙型肝炎病毒或短暂表达乙型肝炎病毒X蛋白的HepG2细胞内，线粒体超氧化物和过氧亚硝酸盐的形成、线粒体DNA的损伤、线粒体呼吸链复合体硝化以及呼吸链复合体I的损伤显著增加。线粒体DNA损伤和呼吸链复合体I损伤可使用能清除超氧化物的Mito-Tempo或诱导型一氧化氮合酶（iNOS）特异性抑制剂1400W进行预防。
本研究结果强调了在慢性乙型肝炎及非酒精性脂肪性肝炎中的重度肝纤维化及肝硬化进程中线粒体氧化应激、线粒体DNA损伤及同线粒体功能及动力相关的改变的重要性。线粒体可能是阻止肝纤维化进展的药物开发的作用靶点。
摘译自：Loureiro D, Tout I, Narguet S, et al. Mitochondrial stress in advanced fibrosis and cirrhosis associated with chronic hepatitis B, chronic hepatitis C, or nonalcoholic steatohepatitis. Hepatology. 2022 Aug 16. doi: 10.1002/hep.32731. Epub ahead of print. PMID: 35971873.
吉林大学第一医院肝胆胰内科 李航 高普均 报道
在实验模型中，乙型肝炎病毒（HBV）感染会导致线粒体氧化应激（OS）并改变线粒体。我们的目标是研究是否乙型肝炎病毒也有可能改变人类的肝脏线粒体，且由此产生的线粒体应激是否有可能影响慢性乙型肝炎纤维化的进程。
本研究纳入了146名未经治疗的单纯感染HBV的慢性乙型肝炎患者。慢性乙型肝炎患者中有重度肝纤维化的患者（AF）或肝硬化患者（F3-F4）与无肝纤维化或轻中度肝纤维化（F0-F2）患者相比较。慢性乙型肝炎患者进一步与慢性丙型肝炎（CHC；n=33）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH；n=12）及健康对照组（n=24）做比较。我们发现包括使mtDNA链断裂在内的对线粒体DNA的氧化损伤，并确认了与F0-F2期患者相比，F3-F4期患者存在多个线粒体DNA片段的缺失。在慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、非酒精性脂肪性肝炎患者里伴有重度肝纤维化或肝硬化的患者中观察到了线粒体功能、线粒体未折叠蛋白应答、生物合成、线粒体自噬及肝脏炎症的改变。在体外实验中，复制乙型肝炎病毒或短暂表达乙型肝炎病毒X蛋白的HepG2细胞内，线粒体超氧化物和过氧亚硝酸盐的形成、线粒体DNA的损伤、线粒体呼吸链复合体硝化以及呼吸链复合体I的损伤显著增加。线粒体DNA损伤和呼吸链复合体I损伤可使用能清除超氧化物的Mito-Tempo或诱导型一氧化氮合酶（iNOS）特异性抑制剂1400W进行预防。
本研究结果强调了在慢性乙型肝炎及非酒精性脂肪性肝炎中的重度肝纤维化及肝硬化进程中线粒体氧化应激、线粒体DNA损伤及同线粒体功能及动力相关的改变的重要性。线粒体可能是阻止肝纤维化进展的药物开发的作用靶点。
摘译自：Loureiro D, Tout I, Narguet S, et al. Mitochondrial stress in advanced fibrosis and cirrhosis associated with chronic hepatitis B, chronic hepatitis C, or nonalcoholic steatohepatitis. Hepatology. 2022 Aug 16. doi: 10.1002/hep.32731. Epub ahead of print. PMID: 35971873.
吉林大学第一医院肝胆胰内科 李航 高普均 报道
AICAR,AMPK激活剂 是一种 AMP 活化蛋白激酶的细胞渗透激活剂（也是一种 AMPK激活剂）。 被腺苷转运体吸收到细胞中，并被腺苷激酶磷酸化为活性核苷酸 ZMP（5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷），它模拟 AMP 对 AMPK 系统的影响。 在体内和体外都有活性。也是一种 AMPK 激活剂。AICAR 调节葡萄糖和脂质的代谢，并抑制促炎细胞因子和 iNOS 的产生。AICAR 也是一种自噬 (autophagy)，YAP 和 mitophagy 抑制剂。
案例：功能研究 - AICAR（Acadesine/AICA 核苷），AMPK 激活剂
通过 ICC/IF 对用 AICAR 处理的 HepG2 细胞中的 AMPK α1（磷酸 S496）进行染色。 如文献中所述，AMPK alpha 1（磷酸化 S496）表达的增加与 AICAR 浓度的增加相关。
将细胞在含有不同浓度 (AICAR) 的 DMSO 培养基中于 37°C 孵育 1 小时，在室温下用 4% 甲醛固定 10 分钟，然后用含有 10% 山羊血清、0.3 M 甘氨酸、1% 的 PBS 封闭 BSA 和 0.1% 吐温在室温下放置 2 小时。 在含有 1% BSA 和 0.1% 吐温的 PBS 中，在 4°C 下用 ab39400 (5 µg/ml) 对处理过的细胞进行染色过夜。 使用 1/250 稀释度的 DyLight 488 山羊抗兔多克隆抗体 作为二抗。 细胞核用 DAPI 复染并以蓝色显示。
见图
案例：功能研究 - AICAR（Acadesine/AICA 核苷），AMPK 激活剂
通过 ICC/IF 对用 AICAR 处理的 HepG2 细胞中的 AMPK α1（磷酸 S496）进行染色。 如文献中所述，AMPK alpha 1（磷酸化 S496）表达的增加与 AICAR 浓度的增加相关。
将细胞在含有不同浓度 (AICAR) 的 DMSO 培养基中于 37°C 孵育 1 小时，在室温下用 4% 甲醛固定 10 分钟，然后用含有 10% 山羊血清、0.3 M 甘氨酸、1% 的 PBS 封闭 BSA 和 0.1% 吐温在室温下放置 2 小时。 在含有 1% BSA 和 0.1% 吐温的 PBS 中，在 4°C 下用 ab39400 (5 µg/ml) 对处理过的细胞进行染色过夜。 使用 1/250 稀释度的 DyLight 488 山羊抗兔多克隆抗体 作为二抗。 细胞核用 DAPI 复染并以蓝色显示。
见图
帕金森病(PD)的特征是黑质致密部(SNpc)的多巴胺能神经元进行性变性。线粒体功能障碍和细胞凋亡被认为是积极参与帕金森病的发病机制。在本研究中，从卷柏中天然存在的双黄酮化合物穗花杉双黄酮(AF)在体外和体内的PD模型中检测了其神经保护作用。在SH-SY5Y细胞上，房颤治疗剂量依赖性地减少1-甲基-4-苯基吡啶鎓(MPP+)-诱导细胞核凝聚和细胞活力丧失，无明显细胞毒性。它抑制caspase-3和p21的激活，但增加Bcl-2/Bax比值。进一步的研究发现，房颤增强了MPP下调的PI3K、Akt和ERK1/2的磷酸化+在SH-SY5Y细胞中，这种作用可被PI3K抑制剂LY294002阻断。在甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)诱导的小鼠中，房颤持续缓解了极和牵引试验中的行为恶化，并挽救了SNpc中多巴胺能神经元和纹状体中纤维的丢失。它还能增强SN中PI3K和Akt的活化以及Bcl-2/Bax比值。此外，房颤减轻了神经元的胶质增生，降低了IL-1β和iNOS的基因表达水平。总之，这些结果表明房颤保护多巴胺能神经元对抗MPTP/MPP+-诱导的神经毒性，这可能是通过多巴胺能神经元中PI3K/Akt和ERK信号通路的激活和神经炎症的减轻而介导的。 https://t.cn/RisT0K3
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