​如何制作稳定的转染细胞系

转染是一种基因转移方法，其中遗传物质通过化学或非化学方法故意引入宿主细胞。有两种类型的稳定转染细胞系：

稳定细胞系的主要类型是通过将转染的DNA直接整合到宿主生物体的基因组中而产生的。转染的DNA通过同源重组整合到基因组中。

产生稳定细胞系的另一种方法是转染DNA的游离体维持。真核载体用于转染未整合到基因组中的DNA。然而，游离体DNA的稳定性很低。此外，附生体仅由某些类型的物种维持。稳定转染的细胞系如图1所示。

图1：稳定转染的细胞系

步骤

生成稳定细胞系所涉及的步骤如下所述。

生成确定最佳选择抗生素浓度的杀伤曲线 – 细胞承受越来越多的抗生素浓度，以确定在一周内杀死所有细胞所需的最低抗生素浓度。

转染具有所需质粒构建体的细胞 – 转染方法因宿主细胞类型而异。脂质体试剂用于贴壁细胞系的转染。电转染或病毒方法用于转染悬浮细胞系。

选择和扩增稳定的多克隆菌落 – 在转染 48-72 小时时，将高浓度、最佳浓度和低浓度的选择性抗生素添加到培养物中，以获得稳定转染的细胞系。

如何在细胞系中选择转染的DNA

选择标记与转染的DNA共表达，用于选择成功转染的细胞。标记基因可能位于用于转染宿主细胞的同一载体（顺式）中，也可能位于另一个载体（反式）中。对抗生素的耐药性，如新霉素，沸蛋白，潮霉素，嘌呤霉素，DHFR等可用于选择。此外，转染的基因可以用GFP标记。

结论

稳定的细胞系主要可以通过将转染的DNA整合到基因组中来制造。此外，转染DNA的游离体维持也可用于在某些宿主生物中长时间制造稳定的细胞系。应该有一种选择方法用于鉴定细胞系中转染的DNA。

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法斗神经炎：诊断+治疗+预防经验分享

法斗在狗狗品种里面算是得神经炎概率较高的狗狗，我家狗狗神经炎复发了几回，还是今年年初才把病情给控制住。

我家狗狗得神经炎的这几年，可真把我折腾的不轻，每次发病都让我很崩溃，身边也有人劝我给它安乐，但我真的舍不得...为了能好好照顾它，我看了很多相关书籍，怎样治疗、怎样预防复发全都是花费很多时间和精力研究试验出来的。

今天把这些分享出来，希望能够帮助到正在受难的毛孩子和家长们。

【关于诊断】

狗狗出现神经炎可能会出现共济失调，四肢肌肉的协调能力丧失，引起摇晃和肌肉运动不协调，最常见的患病动物四肢交叉，导致在行走的时间四肢相互影响，在换步时四肢可能过度外展，并且运动可能被夸大或伸展过度。

有些可能会出现轻瘫或者偏瘫，有四肢抽搐、僵直性痉挛、角弓反张、运动障碍或肌痉挛等症状。

一般只有去宠物医院做磁核共振才能明确病因是什么，但是乡镇医院很难辨别病因的，只做x光的话，很容易就被误判成是关节问题。

【关于治疗】

可以选择手术治疗和保守治疗（手术治疗会有一定的复发几率）

保守治疗，病情严重需要打神经激素，以及配合消炎、止痛、营养针；病情不严重只吃药就可以了。

我家前期是打针、后期是吃药进行治疗。

速诺，250mg，早晚各一片（抗菌消炎）

甲钴胺，早晚各一片（改善神经传导）

申维通达，早晚各吃4粒（可以加速细胞的再生）

维生素B1、B12，早晚各一片（补充神经营养）

大活络丸，早晚各1/3丸（通筋活络）

需要注意的是要是狗狗疼痛难忍的时候再用止疼药，平时看着没啥问题的时候还是尽量不要用止疼药，长期服用对狗狗的身体是有伤害的。

【怎么预防】

1、调整饮食，不要单一喂食，要做到营养均衡，防止狗狗体内缺乏维生素B（不要将罐头当主食！！平时可给狗狗喂维生素复合B）

2、加强锻炼，有利于促进狗狗体内血液循环，提升狗狗免疫力（禁止爬楼梯锻炼！！！）

3、注意不要让狗狗受到刺激，容易引起发病（得了该病的狗狗尽量绝育，发情也会引起病发）#狗狗##养狗#