一、细菌转化实验实验方法原理:
细菌转化实验中质粒DNA粘附在细菌细胞的表面,并在42°C进行短时热休克处理,以促进DNA的吸收。然后将其在非选择性培养基中培养一代。质粒上携带的抗生素基因表达表达后,不含抗生素的培养基在培养基中生长。
二、细菌转换实验所需材料:
1.涡旋混合器
2.微量移液器采样器
3.移液器吸头
4.1.5ml微量离心管架
5.双面微量离心管架
6.干燥的恒温气浴(或恒温水浴)
7.制冰机
8.恒温摇床
9.培养皿(固体LB-Amp铺砌)
10.超净工作台
11.酒精灯
12.玻璃涂层棒
13.恒温培养箱。
14.培养基(不含抗生素)
15.LB培养基(含抗生素)
16.无菌ddH2O
17.IPTG
18.X-gal。
(注)准备:无菌ddH2O,将1.5ml离心管放入铝制饭盒中(灭菌),将移液器吸头插入相应的吸头盒中(灭菌),20%IPTG(M / V),2%X-gal(M / V,含N,N-二甲基甲酰胺)。
三、细菌转化实验操作步骤:
(1)预先将恒温水浴的温度调节至42°C。
(2)从-70°C超低温冰箱中取一管(100μl)合格细菌,立即用手指加热使其融化,然后将其插入冰,冰浴中5-10min。
(3)加入5μl连接的质粒混合物(DNA含量不超过100ng),轻轻摇动并置于冰上20分钟。
(4)轻轻摇动后,插入42°C水浴中1-2min进行热震,然后迅速将其放回冰中并静置3?5min。
(5)在超干净的工作台中,向上述每个试管中加入500μlLB培养基(不含抗生素),轻轻混合,然后将其固定在摇床上的弹簧架上,并在37°C摇动1h。
(6)在超净工作台上取上述转化混合物100-300μl,分别倒入含有合适抗生素的LB平皿中,用酒精灯燃烧的玻璃涂层棒要均匀涂覆(注意:玻璃涂层)熄灭棒上的酒精后,请稍等片刻,待冷却后再涂抹。
(7)如果载体和宿主细菌适合筛选蓝点和白点,则在滴加细菌溶液后,在平板上添加40μl2%X-gal和8μl20%IPTG,并用玻璃棒均匀地覆盖,酒精灯。 。
(8)标记带涂层的培养皿,将其置于37°C恒温培养箱中30-60min,直到表面上的液体渗透到培养基中,然后将其倒置并置于37°C恒温中保温箱过夜。
(9)在被细菌污染的台式机上喷洒70%的乙醇,干燥台式机,并写出实验报告。
(10)观察平板上生长的菌落克隆,只要可以将菌落彼此分离即可。注意白色斑块。
细菌转化实验中质粒DNA粘附在细菌细胞的表面,并在42°C进行短时热休克处理,以促进DNA的吸收。然后将其在非选择性培养基中培养一代。质粒上携带的抗生素基因表达表达后,不含抗生素的培养基在培养基中生长。
二、细菌转换实验所需材料:
1.涡旋混合器
2.微量移液器采样器
3.移液器吸头
4.1.5ml微量离心管架
5.双面微量离心管架
6.干燥的恒温气浴(或恒温水浴)
7.制冰机
8.恒温摇床
9.培养皿(固体LB-Amp铺砌)
10.超净工作台
11.酒精灯
12.玻璃涂层棒
13.恒温培养箱。
14.培养基(不含抗生素)
15.LB培养基(含抗生素)
16.无菌ddH2O
17.IPTG
18.X-gal。
(注)准备:无菌ddH2O,将1.5ml离心管放入铝制饭盒中(灭菌),将移液器吸头插入相应的吸头盒中(灭菌),20%IPTG(M / V),2%X-gal(M / V,含N,N-二甲基甲酰胺)。
三、细菌转化实验操作步骤:
(1)预先将恒温水浴的温度调节至42°C。
(2)从-70°C超低温冰箱中取一管(100μl)合格细菌,立即用手指加热使其融化,然后将其插入冰,冰浴中5-10min。
(3)加入5μl连接的质粒混合物(DNA含量不超过100ng),轻轻摇动并置于冰上20分钟。
(4)轻轻摇动后,插入42°C水浴中1-2min进行热震,然后迅速将其放回冰中并静置3?5min。
(5)在超干净的工作台中,向上述每个试管中加入500μlLB培养基(不含抗生素),轻轻混合,然后将其固定在摇床上的弹簧架上,并在37°C摇动1h。
(6)在超净工作台上取上述转化混合物100-300μl,分别倒入含有合适抗生素的LB平皿中,用酒精灯燃烧的玻璃涂层棒要均匀涂覆(注意:玻璃涂层)熄灭棒上的酒精后,请稍等片刻,待冷却后再涂抹。
(7)如果载体和宿主细菌适合筛选蓝点和白点,则在滴加细菌溶液后,在平板上添加40μl2%X-gal和8μl20%IPTG,并用玻璃棒均匀地覆盖,酒精灯。 。
(8)标记带涂层的培养皿,将其置于37°C恒温培养箱中30-60min,直到表面上的液体渗透到培养基中,然后将其倒置并置于37°C恒温中保温箱过夜。
(9)在被细菌污染的台式机上喷洒70%的乙醇,干燥台式机,并写出实验报告。
(10)观察平板上生长的菌落克隆,只要可以将菌落彼此分离即可。注意白色斑块。
实验室台面选择标准
实验台在整个实验室中起到了重要的作用,它不仅可以利于我们存储放置各种设备,同时特殊的材质也可以避免被各种化学物质所腐蚀和损坏。特别是现在实验台的设计中,融入了更多的功能设计,比如说专业的水槽酒精灯放置设计等等,这些都更利于我们实验室的使用。同时也在一定程度上给实验室的环境带来了很大的改变,可以说在整个实验室中,实验台的使用频率是蕞高的,所以为了更好的保护这个台面,我们不仅需要注意保养和维护,同时还要在选择时根据你的实验环境进行合理的材质选择。
1.化学实验室家具-物理实验室台面材质选择:物理性实验室在选择台面时,要求相对较低一些,比如说一些花岗岩的台面这些都可以使用,但是你所选择的材质,一定要保证其耐高温的作用和特点,且台面的厚度一定要有保障。因为后期台面中要放置很多重型仪器,其次就是要选择一些耐热机能的台面,这样可以避免高温对台面产生影响。同时尽量注意不要选择有辐射的材质和台面,因为这些对于人体可能会造成一定的危害。
2.化学实验室家具-化学实验室台面材质选择:化学实验室中经常会接触到各种强酸类的物质,所以说对台面材质的要求会高一些。通常一些陶瓷台面,包括环氧树脂台面等等都可以使用。台面中一定要含有防火材料,同时一定要有较强的防腐蚀能力。
3.不同材质的台面特性比较
种类 抗化学腐蚀性能 抗菌 耐刮磨 耐高温 耐冲击 耐水 导电性能
贴面理化板台面 ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆ ☆☆ ☆☆ 无
实芯理化板台面 ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆ 无
环氧树脂台面 ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ 无
人造石材 ☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ 无
工业陶瓷台面 ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ 无
不锈钢台面 ☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ 导电
PP台面 ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ 无
#实验室设备#
实验台在整个实验室中起到了重要的作用,它不仅可以利于我们存储放置各种设备,同时特殊的材质也可以避免被各种化学物质所腐蚀和损坏。特别是现在实验台的设计中,融入了更多的功能设计,比如说专业的水槽酒精灯放置设计等等,这些都更利于我们实验室的使用。同时也在一定程度上给实验室的环境带来了很大的改变,可以说在整个实验室中,实验台的使用频率是蕞高的,所以为了更好的保护这个台面,我们不仅需要注意保养和维护,同时还要在选择时根据你的实验环境进行合理的材质选择。
1.化学实验室家具-物理实验室台面材质选择:物理性实验室在选择台面时,要求相对较低一些,比如说一些花岗岩的台面这些都可以使用,但是你所选择的材质,一定要保证其耐高温的作用和特点,且台面的厚度一定要有保障。因为后期台面中要放置很多重型仪器,其次就是要选择一些耐热机能的台面,这样可以避免高温对台面产生影响。同时尽量注意不要选择有辐射的材质和台面,因为这些对于人体可能会造成一定的危害。
2.化学实验室家具-化学实验室台面材质选择:化学实验室中经常会接触到各种强酸类的物质,所以说对台面材质的要求会高一些。通常一些陶瓷台面,包括环氧树脂台面等等都可以使用。台面中一定要含有防火材料,同时一定要有较强的防腐蚀能力。
3.不同材质的台面特性比较
种类 抗化学腐蚀性能 抗菌 耐刮磨 耐高温 耐冲击 耐水 导电性能
贴面理化板台面 ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆ ☆☆ ☆☆ 无
实芯理化板台面 ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆ 无
环氧树脂台面 ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ 无
人造石材 ☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ 无
工业陶瓷台面 ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ 无
不锈钢台面 ☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ 导电
PP台面 ☆☆☆☆ ☆☆☆☆ ☆☆☆ ☆☆ ☆☆☆ ☆☆☆☆ 无
#实验室设备#
记第一次实验室之旅
就是说14年中的第一次化学实验我就这样了,是不是不太好。
刚开始我和谢同学就是一整个配合默契,超级快速的就搞好了实验的步骤,甚至我已经点燃酒精灯均匀受热了,但此时我抬头一看啧,大家都没弄好,不禁反思是不是漏了什么步骤,于是我下意识的把酒精灯吹灭了。。。。(幸亏没炸)(接下来就是开始实验收集氧气了)但是由于前期我点燃过了所以我和谢同学的药品竟然不足以支撑我们收集三瓶氧气
此时的我看到隔壁桌已经开始了木炭燃烧,我们也开始了,木炭燃烧的产生的现象有一个是火星四射(已经牢牢记住了)是的没错它炸的时候我飞了,我手中的玻璃片也飞了(p1是它的残骸),(也有可能是因为谢同学拿的木炭太大了,且烧的不久,所以火花比较大),此时的人类很伤心,第一次就碎了个玻璃片,下次还会碎什么
就是说14年中的第一次化学实验我就这样了,是不是不太好。
刚开始我和谢同学就是一整个配合默契,超级快速的就搞好了实验的步骤,甚至我已经点燃酒精灯均匀受热了,但此时我抬头一看啧,大家都没弄好,不禁反思是不是漏了什么步骤,于是我下意识的把酒精灯吹灭了。。。。(幸亏没炸)(接下来就是开始实验收集氧气了)但是由于前期我点燃过了所以我和谢同学的药品竟然不足以支撑我们收集三瓶氧气
此时的我看到隔壁桌已经开始了木炭燃烧,我们也开始了,木炭燃烧的产生的现象有一个是火星四射(已经牢牢记住了)是的没错它炸的时候我飞了,我手中的玻璃片也飞了(p1是它的残骸),(也有可能是因为谢同学拿的木炭太大了,且烧的不久,所以火花比较大),此时的人类很伤心,第一次就碎了个玻璃片,下次还会碎什么
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