中华人民共和国国家标准
GB/T 30955-2014 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定
免疫亲和柱净化-高效液相色谱法
(转载自:https://t.cn/A6C15Osu)
1范围
本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的免疫亲和层析净化高效液相色谱法的测定方法。
本标准适用于饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。
本标准的检测限:黄曲霉毒素B1为0.2μg/kg,黄曲霉毒素B2为0.2μg/kg,黄曲霉毒素G1为0.3μg/kg,黄曲霉毒素G2为0.3 μg/kg。
本标准的定量限:黄曲霉毒素B1为1.0μg/kg,黄曲霉毒素B2为1.0μg/kg,黄曲霉毒素G1为1.0μg/kg,黄曲霉毒素G2为1.0μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14699.1饲料 采样
GB/T 20195动物饲料 试样的制备
3原理
试样经过甲醇-水提取后,提取液经过滤、稀释后,滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析柱层析净化,经高效液相色谱仪分离,荧光检测器柱后光化学衍生测定黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。
4试剂
除非另有说明,均为分析纯的试剂;实验室用水符合GB/T6682中二级用水规定,标准溶液和流动相用水符合一级用水规定。
4.1甲醇:色谱纯。
4.2苯: 色谱纯。
4.3乙腈:色谱纯。
4.4甲醇+水(8+2):取 80 mL甲醇(4.1)加20 mL水,混合均匀。
4.5 甲醇+水(45+55):取45 mL甲醇(4.1)加55 mL水,混合均匀。
4.6苯+乙 腈(98+2):取2 mL乙腈(4.3)加入98 mL苯(4.2),混合均匀。
4.7黄曲霉毒素标准储备溶液:用苯+乙腈(98+2)溶液(4.6)分别配制0.100 mg/mL的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备液,保存于4℃备用,可使用1年。
4.8黄曲霉毒素混合标准工作液:准确移取适量的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备溶液(4.7), 50℃下,氮气吹干仪吹干,用适量的甲醇+水(45+ 55)溶液(4.5)定容为混合标准工作液,黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各分别为0 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/ mL、50 ng/mL。
4.9 PBS缓冲溶液:称取8.0 g氯化钠,1.2 g磷酸氢二钠,0.2 g磷酸二氢钾,0.2 g氯化钾,用990 mL 纯水溶解,然后用浓盐酸调节pH值至7.0, 最后用纯水稀释至1000 mL。
4.10次氯酸钠。
5仪器和设备
实验室常规仪器、设备、材料及下列各项。
5.1 高速均质器,18 000 r/ min~22 000 r/min,或震荡器。
5.2 黄曲霉毒素免疫亲和柱,柱容量≥300 ng。
5.3玻璃纤维滤纸,直径 11 cm,孔径1.5 μm。
5.4玻璃定量管,10 mL。
5.5 氮吹仪,50℃。
5.6 光化学衍生系统。
5.7高效液相色谱仪,带荧光检测器。
6试样采集与制备
按GB/T 14699.1采样;按GB/T 20195用四分法缩减至500 g,粉碎后过1 mm孔径的分析筛,混匀后装入密闭容器,冷藏保存。
7分析步骤
7.1 提取
称取试样(粒度小于1mm)50.0 g于250 mL具塞锥形瓶中,加入5.0 g氯化钠及准确加入100.0 mL(V1)甲醇+水(8+2)溶液(4.4),以均质器高速搅拌提取2 min,或震荡器震荡30 min。定量滤纸过滤,准确移取10.0 mL(V2 )滤液并加入40.0 mL(V3 )PBS缓冲溶液(4.9)稀释,用玻璃纤维滤纸过滤1~2次,至滤液澄清,备用。
7.2净化
将免疫亲和柱连接于10.0 mL玻璃定量管下。准确移取10.0 mL(V,)样品提取液注入玻璃定量管中,将空气压力泵与玻璃定量管连接,调节压力使溶液以不超过2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,待溶液全部流出后,以10.0 mL纯水清洗柱子2次,弃去全部流出液。准确加入1.0 mL(V)甲醇(4.1) 洗脱,流速不超过1mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,加纯水定容为2.0mL,供色谱检测用。
7.3测定
7.3.1色谱条件
色谱柱:C18柱,长150 mm,内径4.6 mm,填料直径5μm,或相当者。
流动相:甲醇+水(45+ 55)溶液(4.5)。
流速:0.8 mL/min。
检测波长:激发波长360 nm;发射波长440 nm。
光化学衍生系统。
柱温:30 ℃。
进样量:20μL。
7.3.2色谱测定
分别取相同体积样液和标准工作溶液注入高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定试样的响应值(峰高或峰面积)。经过与黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准溶液谱图比较响应值得到试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的浓度c(μg/L)。标准品色谱图参见附录A。
警告——黄曲霉毒素是高致癌性物质,应十分小心处理。使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用5%浓度次氯酸钠溶液浸泡过夜。
8结果计算与表述
8.1 结果计算
试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量以质量分数Xi计,单位为微克每千克(μg/kg),按式(1)计算:
image.png
式中:
Pi——试样溶液中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各组分的峰面积值;
Vi——样品的总稀释体积,单位为毫升(mL);
ci——黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各标准溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
V——标准溶液的进样体积(μL);
P——黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各标准溶液峰面积平均值;
m——试样质量,单位为克(g)。
8.2 结果表示
测定结果用平行测定的算术平均值表示,计算结果表示到小数点后一位。
9重复性
在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的15%。
GB/T 30955-2014 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定
免疫亲和柱净化-高效液相色谱法
(转载自:https://t.cn/A6C15Osu)
1范围
本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的免疫亲和层析净化高效液相色谱法的测定方法。
本标准适用于饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。
本标准的检测限:黄曲霉毒素B1为0.2μg/kg,黄曲霉毒素B2为0.2μg/kg,黄曲霉毒素G1为0.3μg/kg,黄曲霉毒素G2为0.3 μg/kg。
本标准的定量限:黄曲霉毒素B1为1.0μg/kg,黄曲霉毒素B2为1.0μg/kg,黄曲霉毒素G1为1.0μg/kg,黄曲霉毒素G2为1.0μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14699.1饲料 采样
GB/T 20195动物饲料 试样的制备
3原理
试样经过甲醇-水提取后,提取液经过滤、稀释后,滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析柱层析净化,经高效液相色谱仪分离,荧光检测器柱后光化学衍生测定黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。
4试剂
除非另有说明,均为分析纯的试剂;实验室用水符合GB/T6682中二级用水规定,标准溶液和流动相用水符合一级用水规定。
4.1甲醇:色谱纯。
4.2苯: 色谱纯。
4.3乙腈:色谱纯。
4.4甲醇+水(8+2):取 80 mL甲醇(4.1)加20 mL水,混合均匀。
4.5 甲醇+水(45+55):取45 mL甲醇(4.1)加55 mL水,混合均匀。
4.6苯+乙 腈(98+2):取2 mL乙腈(4.3)加入98 mL苯(4.2),混合均匀。
4.7黄曲霉毒素标准储备溶液:用苯+乙腈(98+2)溶液(4.6)分别配制0.100 mg/mL的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备液,保存于4℃备用,可使用1年。
4.8黄曲霉毒素混合标准工作液:准确移取适量的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备溶液(4.7), 50℃下,氮气吹干仪吹干,用适量的甲醇+水(45+ 55)溶液(4.5)定容为混合标准工作液,黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各分别为0 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/ mL、50 ng/mL。
4.9 PBS缓冲溶液:称取8.0 g氯化钠,1.2 g磷酸氢二钠,0.2 g磷酸二氢钾,0.2 g氯化钾,用990 mL 纯水溶解,然后用浓盐酸调节pH值至7.0, 最后用纯水稀释至1000 mL。
4.10次氯酸钠。
5仪器和设备
实验室常规仪器、设备、材料及下列各项。
5.1 高速均质器,18 000 r/ min~22 000 r/min,或震荡器。
5.2 黄曲霉毒素免疫亲和柱,柱容量≥300 ng。
5.3玻璃纤维滤纸,直径 11 cm,孔径1.5 μm。
5.4玻璃定量管,10 mL。
5.5 氮吹仪,50℃。
5.6 光化学衍生系统。
5.7高效液相色谱仪,带荧光检测器。
6试样采集与制备
按GB/T 14699.1采样;按GB/T 20195用四分法缩减至500 g,粉碎后过1 mm孔径的分析筛,混匀后装入密闭容器,冷藏保存。
7分析步骤
7.1 提取
称取试样(粒度小于1mm)50.0 g于250 mL具塞锥形瓶中,加入5.0 g氯化钠及准确加入100.0 mL(V1)甲醇+水(8+2)溶液(4.4),以均质器高速搅拌提取2 min,或震荡器震荡30 min。定量滤纸过滤,准确移取10.0 mL(V2 )滤液并加入40.0 mL(V3 )PBS缓冲溶液(4.9)稀释,用玻璃纤维滤纸过滤1~2次,至滤液澄清,备用。
7.2净化
将免疫亲和柱连接于10.0 mL玻璃定量管下。准确移取10.0 mL(V,)样品提取液注入玻璃定量管中,将空气压力泵与玻璃定量管连接,调节压力使溶液以不超过2mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,待溶液全部流出后,以10.0 mL纯水清洗柱子2次,弃去全部流出液。准确加入1.0 mL(V)甲醇(4.1) 洗脱,流速不超过1mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,加纯水定容为2.0mL,供色谱检测用。
7.3测定
7.3.1色谱条件
色谱柱:C18柱,长150 mm,内径4.6 mm,填料直径5μm,或相当者。
流动相:甲醇+水(45+ 55)溶液(4.5)。
流速:0.8 mL/min。
检测波长:激发波长360 nm;发射波长440 nm。
光化学衍生系统。
柱温:30 ℃。
进样量:20μL。
7.3.2色谱测定
分别取相同体积样液和标准工作溶液注入高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定试样的响应值(峰高或峰面积)。经过与黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准溶液谱图比较响应值得到试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的浓度c(μg/L)。标准品色谱图参见附录A。
警告——黄曲霉毒素是高致癌性物质,应十分小心处理。使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用5%浓度次氯酸钠溶液浸泡过夜。
8结果计算与表述
8.1 结果计算
试样中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量以质量分数Xi计,单位为微克每千克(μg/kg),按式(1)计算:
image.png
式中:
Pi——试样溶液中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各组分的峰面积值;
Vi——样品的总稀释体积,单位为毫升(mL);
ci——黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各标准溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
V——标准溶液的进样体积(μL);
P——黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2各标准溶液峰面积平均值;
m——试样质量,单位为克(g)。
8.2 结果表示
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9重复性
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我去!!烂脸回春了!!敏感皮苦到头了...
还在“用最贵的护肤品熬最晚的夜”?达咩!亲测无效!
▪️马上黑暗荣耀要出第二部了
这两天熬夜狂补第一季,乔姐太美了!
每天肝到2点不说 ,一边涂着抗初老面霜一边熬
困了直接倒头就睡,连着几天下来
早上起来脸又暗又干,面霜可以说是白涂
熬夜又赶上春敏季脸比较脆弱的时候
皮肤直接一整个绷不住了
稍微拍点精华,脸就有辣辣的刺痛感!
还有一块块得泛红
m肌多年的我意识到应该是被我造得皮肤屏障受损了
撒腿就去找我的老朋友玉泽
作为资深脆皮怎么能没有她家的玉泽屏障修护面霜
每到这时候就知道专门研究屏障修护的品牌有多可靠!
✅成分上扒开来给你们看看
玉泽自己家的黑科技
PBS植物仿⽣脂质技术
它可以模拟出我们肌肤细胞间脂质
促进皮肤屏障的自我修护
妍珍呐,凌晨2点起床跳绳熬夜垮脸的时候
是不是也很需要玉泽面霜呢?
还有神经酰胺➕角鲨烷➕半乳糖阿拉伯聚糖等神仙阵容
一整个“复仇者联盟”的搭配
让肌肤的水润度直线拉满
补水同时做到锁水!!
奶油慕斯一样的质地
丝滑好推开!!
可以用手心揉化后再按压上脸
本油皮不会觉得粘腻!!
就像钻到毛孔里一样
有它后本人真的实现了黑暗荣耀自由
爽!!沉醉乔姐美貌到凌晨2.3点
脸皮子还厚的和城墙皮一样
稳如泰山!!泛红爆皮通通886
连我来姨妈都没有闹脾气!
玉泽啊玉泽!!真的是敏感脆皮再生父母
效果还都是有临床验证的!!
给它给机会!!冲起来!!
cr:熊猫猫
#种草花花万物##平价好物种草##好物推荐#
还在“用最贵的护肤品熬最晚的夜”?达咩!亲测无效!
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困了直接倒头就睡,连着几天下来
早上起来脸又暗又干,面霜可以说是白涂
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还有一块块得泛红
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每到这时候就知道专门研究屏障修护的品牌有多可靠!
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它可以模拟出我们肌肤细胞间脂质
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是不是也很需要玉泽面霜呢?
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一整个“复仇者联盟”的搭配
让肌肤的水润度直线拉满
补水同时做到锁水!!
奶油慕斯一样的质地
丝滑好推开!!
可以用手心揉化后再按压上脸
本油皮不会觉得粘腻!!
就像钻到毛孔里一样
有它后本人真的实现了黑暗荣耀自由
爽!!沉醉乔姐美貌到凌晨2.3点
脸皮子还厚的和城墙皮一样
稳如泰山!!泛红爆皮通通886
连我来姨妈都没有闹脾气!
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就是…你们都是为了黑普做的纪录片
能不能稍微~保持那么一丢丢的一致性
同样的场景,
PBS的立场是,格鲁吉亚事件后,美向俄施压
BBC的立场是,就利比亚问题进行‘商谈’
嗯…按克宫记录的M与壁灯的会面,BBC是对的[二哈]
会面时台词:我们在推进美/俄关系方面做的很好(然后,利比亚问题弃权票)[二哈]
名台词:我们不是在进行ZQ更迭,我们是在拯救生命(诶,就有人信美丽卡这种胡言乱语)
能不能稍微~保持那么一丢丢的一致性
同样的场景,
PBS的立场是,格鲁吉亚事件后,美向俄施压
BBC的立场是,就利比亚问题进行‘商谈’
嗯…按克宫记录的M与壁灯的会面,BBC是对的[二哈]
会面时台词:我们在推进美/俄关系方面做的很好(然后,利比亚问题弃权票)[二哈]
名台词:我们不是在进行ZQ更迭,我们是在拯救生命(诶,就有人信美丽卡这种胡言乱语)
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