时隔24年，中国再度申报世界“双遗产”
海南省林业局副局长李新民10日在海口举行的2023年“文化和自然遗产日”主题宣传活动开幕式上宣布，海南省已正式启动“海南热带雨林和黎族传统聚落”世界文化与自然双遗产（简称“海南‘双遗产’”）申报工作。这是1999年武夷山入列世界“双遗产”以来，中国时隔24年再度申报。
截至2023年，全球范围内有39项世界“双遗产”，中国占4项，分别是泰山、黄山、峨眉山-乐山大佛、武夷山。泰山是中国也是世界上第一个自然文化“双遗产”，于1987年入列联合国教科文组织世界遗产委员会“世界自然遗产和文化遗产名录”。1999年12月，在世界遗产委员会第23届会议上，武夷山顺利通过遴选标准，成为中国目前最“年轻”的世界“双遗产”。
图片
6月1日，晨光照射在海南热带雨林国家公园五指山片区。海南日报记者 李天平 摄
依据《保护世界文化和自然遗产公约》之主旨，“双遗产”是指兼具自然与文化之美的代表。海南岛拥有丰富多样的自然资源和不同历史时期的文化遗存，“海南热带雨林和黎族传统聚落”作为其中典型代表，2022年4月被联合国教科文组织世界遗产中心列入世界遗产预备清单。
海南“双遗产”申报工作技术团队由北京大学城市与环境学院副教授宋峰领衔。宋峰10日接受记者采访时表示，中国当前的世界遗产大都是在原有的自然保护的基础上诞生，在海南“双遗产”申报工作中，海南热带雨林国家公园是重要基础，也是极大优势。
据介绍，海南热带雨林是中国生物多样性分布最集中、保存最完好、连片面积最大的雨林生态系统，是全球生物多样性分布热点地区之一，也是重点鸟区集中地和零灭绝联盟保护地。黎族传统聚落的村落形态及建筑，反映出黎族人民不断适应自然环境条件，并与自身生产生活的需要相融合的特点。黎族人民传统的土地利用方式，形成了山、林、草、田镶嵌的多样化生态环境，为一些特有物种提供了独一无二的栖息地，形成了海南岛传统人居环境下特殊的生命共同体。
“中国的世界遗产事业从无到有、从小到大，在世界遗产申报、保护、管理和利用等方面取得了举世瞩目的成就。”国家林草局自然保护地管理司二级巡视员袁小虹介绍，目前中国已拥有56项世界遗产，总面积超7万平方公里，有效保护了一大批珍贵独特的自然文化遗产资源，维护了生物多样性和文化丰富性，为全球世界遗产事业发展贡献了中国经验和中国力量。
海南省林业局副局长李新民10日在海口举行的2023年“文化和自然遗产日”主题宣传活动开幕式上宣布，海南省已正式启动“海南热带雨林和黎族传统聚落”世界文化与自然双遗产（简称“海南‘双遗产’”）申报工作。这是1999年武夷山入列世界“双遗产”以来，中国时隔24年再度申报。
截至2023年，全球范围内有39项世界“双遗产”，中国占4项，分别是泰山、黄山、峨眉山-乐山大佛、武夷山。泰山是中国也是世界上第一个自然文化“双遗产”，于1987年入列联合国教科文组织世界遗产委员会“世界自然遗产和文化遗产名录”。1999年12月，在世界遗产委员会第23届会议上，武夷山顺利通过遴选标准，成为中国目前最“年轻”的世界“双遗产”。
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6月1日，晨光照射在海南热带雨林国家公园五指山片区。海南日报记者 李天平 摄
依据《保护世界文化和自然遗产公约》之主旨，“双遗产”是指兼具自然与文化之美的代表。海南岛拥有丰富多样的自然资源和不同历史时期的文化遗存，“海南热带雨林和黎族传统聚落”作为其中典型代表，2022年4月被联合国教科文组织世界遗产中心列入世界遗产预备清单。
海南“双遗产”申报工作技术团队由北京大学城市与环境学院副教授宋峰领衔。宋峰10日接受记者采访时表示，中国当前的世界遗产大都是在原有的自然保护的基础上诞生，在海南“双遗产”申报工作中，海南热带雨林国家公园是重要基础，也是极大优势。
据介绍，海南热带雨林是中国生物多样性分布最集中、保存最完好、连片面积最大的雨林生态系统，是全球生物多样性分布热点地区之一，也是重点鸟区集中地和零灭绝联盟保护地。黎族传统聚落的村落形态及建筑，反映出黎族人民不断适应自然环境条件，并与自身生产生活的需要相融合的特点。黎族人民传统的土地利用方式，形成了山、林、草、田镶嵌的多样化生态环境，为一些特有物种提供了独一无二的栖息地，形成了海南岛传统人居环境下特殊的生命共同体。
“中国的世界遗产事业从无到有、从小到大，在世界遗产申报、保护、管理和利用等方面取得了举世瞩目的成就。”国家林草局自然保护地管理司二级巡视员袁小虹介绍，目前中国已拥有56项世界遗产，总面积超7万平方公里，有效保护了一大批珍贵独特的自然文化遗产资源，维护了生物多样性和文化丰富性，为全球世界遗产事业发展贡献了中国经验和中国力量。
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 1722-2009 蔬菜中敌菌灵残留量的测定 高效液相色谱法
Determination of anilazine residue in vegetables by HPLC
（转载自：https://t.cn/A6pLWc7s）
前言
本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。
本标准由全国蔬菜标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：农业部蔬菜品质监督检验测试中心（北京）。
本标准主要起草人：赵文、靳松、刘肃、林桓。
1范围
本标准规定了新鲜蔬菜中敌菌灵残留量的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于番茄、菜豆、黄瓜、甘蓝、白菜、芹菜、胡萝卜等蔬菜中敌菌灵残留量的测定。本标准方法的检出限为0. 01 mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/ T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
在弱酸性条件下用乙腈提取试样中敌菌灵，加氯化钠盐析分层，经弗罗里硅土固相萃取柱净化后，用高效液相色谱仪进行分离。敌菌灵苯环上的π电子在波长250nm处被激发，其吸收强度由紫外检测器检测。分别记录标样和试样的峰高，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和GB/ T 6682中规定的至少二级水。
4.1氯化钠（NaCI）。
4.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。
4.3正己烷（C6H14）：色谱纯。
4.4丙酮（C3H6O）：色谱纯。
4.5乙腈（CH3CN）：色谱纯。
4.6磷酸（H3PO4）。
4.7丙酮+正己烷混合溶液（1+19）。
4.8丙酮+正己烷混合溶液（15+85）。
4.9磷酸溶液[ ω（H3PO4）= 1%]：称取10g磷酸（4.6） ，加水至1 000 mL，摇匀。
4.10敌菌灵标准品：纯度≥98%。
4.11敌菌灵标准贮备液：准确称取0.1mg敌菌灵标准品，用甲醇（4.2）溶解并转移至100mL容量瓶中，再用甲醇（4.2）定容至刻度，得到质量浓度约为1 000 mg/ L的敌菌灵标准贮备液。贮于-20℃~-16℃ 冰柜中备用。有效期为2个月。
4.12敌菌灵标准工作溶液：使用时将敌菌灵标准贮备液（4.11）用甲醇（4.2）稀释得到质量浓度为0.5mg/L的敌菌灵标准工作溶液。有效期为1周。
4.13 0.45μm有机微孔滤膜。
4.14固相萃取柱，填料为弗罗里硅土，容积6mL，填充物1g。
5仪器
5.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。
5.2分析天平，感量0.1mg和0.01g。
5.3食品加工机。
5.4均质器，6 000 r/min~36 000 r/min。
5.5旋转蒸发仪。
5.6氮吹仪。
6试样制备
将蔬菜样品取可食部分，用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物，采用对角线分割法，取对角部分，将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入食品加工机中捣碎成匀浆。匀浆放入容器（除聚氯乙烯材质外）中，于-20℃~-16℃条件下保存。称取试样前，常温试样应搅拌均匀，冷冻试样应先解冻再混匀。
7分析步骤
7.1 提取
称取试样20g（精确至0.01g）于150mL烧杯中，向烧杯中加入1.00mL磷酸溶液（4.9），然后加入50.0 mL乙腈（4.5），高速均质约1 min。滤液经滤纸过滤至装有7 g~10 g氯化钠（4.1）的具塞玻璃试管中，盖上塞子，剧烈振荡约1 min，在室温下静止2 h以上或使用离心机离心，使得乙腈相和水相充分分层（若有乳化现象，加少量蒸馏水振摇后继续分层）。
用移液管准确吸取10.00mL乙腈提取液至50mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪上（水浴温度40℃）浓缩至近干，加入3. 0 mL正己烷（4.3）待净化。
7.2净化
依次用3 mL丙酮-正己烷混合溶液（4.7）和4 mL正己烷（4.3）预淋弗罗里硅土柱，弃去流出液。当正己烷液面到达柱吸附层表面时，立即倒入7.1中得到的溶液，用15mL丙酮-正己烷混合溶液（4.8）分三次冲洗烧杯后淋洗弗罗里硅土柱（4.14），用100 mL烧杯接收洗脱液。将盛有洗脱液的烧杯置于氮吹仪上，在水浴温度40℃条件下，氮吹蒸发至完全干燥，用4.00 mL甲醇（4.1）溶解蒸残物，用微孔滤膜（4.13）过滤至2mL样品瓶中，待测。
7.3色谱参考条件
7.3.1色谱柱：C18不锈钢柱，柱长250 mm，内径4. 6 mm，粒径5μm，或相当者。
7. 3.2 流动相：A：水，B：乙腈，按表1进行梯度洗脱。
image.png
7.3.3柱温：30℃。
7.3. 4流 速：1.0 mL/ min。
7.3.5检测波长：250 nm。
7.3.6进样量：10μL。
7.4 测定
分别吸取10μL标准溶液和待测液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以待测液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。
7.5空白实验
除不称取试样外，采用与试样完全相同的测定步骤进行平行操作。
8结果计算
试料中敌菌灵含量用质量分数ω计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按下列公式计算：
image.png
式中：
ρS——标准溶液质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
VS——标准溶液进样体积，单位为微升（μL）；
V0——试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
VX——待测液进样体积， 单位为微升（μL）；
AS——标准溶液的峰面积；
AX——待测液的峰面积；
m——试料质量， 单位为克（g）；
F——提取液体积/分取体积；
计算结果保留两位有效数字。
9精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%。在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的30%。
10色谱图
敌菌灵标准溶液色谱图见图1。
image.png
NY/T 1722-2009 蔬菜中敌菌灵残留量的测定 高效液相色谱法
Determination of anilazine residue in vegetables by HPLC
（转载自：https://t.cn/A6pLWc7s）
前言
本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。
本标准由全国蔬菜标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：农业部蔬菜品质监督检验测试中心（北京）。
本标准主要起草人：赵文、靳松、刘肃、林桓。
1范围
本标准规定了新鲜蔬菜中敌菌灵残留量的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于番茄、菜豆、黄瓜、甘蓝、白菜、芹菜、胡萝卜等蔬菜中敌菌灵残留量的测定。本标准方法的检出限为0. 01 mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/ T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
在弱酸性条件下用乙腈提取试样中敌菌灵，加氯化钠盐析分层，经弗罗里硅土固相萃取柱净化后，用高效液相色谱仪进行分离。敌菌灵苯环上的π电子在波长250nm处被激发，其吸收强度由紫外检测器检测。分别记录标样和试样的峰高，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和GB/ T 6682中规定的至少二级水。
4.1氯化钠（NaCI）。
4.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。
4.3正己烷（C6H14）：色谱纯。
4.4丙酮（C3H6O）：色谱纯。
4.5乙腈（CH3CN）：色谱纯。
4.6磷酸（H3PO4）。
4.7丙酮+正己烷混合溶液（1+19）。
4.8丙酮+正己烷混合溶液（15+85）。
4.9磷酸溶液[ ω（H3PO4）= 1%]：称取10g磷酸（4.6） ，加水至1 000 mL，摇匀。
4.10敌菌灵标准品：纯度≥98%。
4.11敌菌灵标准贮备液：准确称取0.1mg敌菌灵标准品，用甲醇（4.2）溶解并转移至100mL容量瓶中，再用甲醇（4.2）定容至刻度，得到质量浓度约为1 000 mg/ L的敌菌灵标准贮备液。贮于-20℃~-16℃ 冰柜中备用。有效期为2个月。
4.12敌菌灵标准工作溶液：使用时将敌菌灵标准贮备液（4.11）用甲醇（4.2）稀释得到质量浓度为0.5mg/L的敌菌灵标准工作溶液。有效期为1周。
4.13 0.45μm有机微孔滤膜。
4.14固相萃取柱，填料为弗罗里硅土，容积6mL，填充物1g。
5仪器
5.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。
5.2分析天平，感量0.1mg和0.01g。
5.3食品加工机。
5.4均质器，6 000 r/min~36 000 r/min。
5.5旋转蒸发仪。
5.6氮吹仪。
6试样制备
将蔬菜样品取可食部分，用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物，采用对角线分割法，取对角部分，将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入食品加工机中捣碎成匀浆。匀浆放入容器（除聚氯乙烯材质外）中，于-20℃~-16℃条件下保存。称取试样前，常温试样应搅拌均匀，冷冻试样应先解冻再混匀。
7分析步骤
7.1 提取
称取试样20g（精确至0.01g）于150mL烧杯中，向烧杯中加入1.00mL磷酸溶液（4.9），然后加入50.0 mL乙腈（4.5），高速均质约1 min。滤液经滤纸过滤至装有7 g~10 g氯化钠（4.1）的具塞玻璃试管中，盖上塞子，剧烈振荡约1 min，在室温下静止2 h以上或使用离心机离心，使得乙腈相和水相充分分层（若有乳化现象，加少量蒸馏水振摇后继续分层）。
用移液管准确吸取10.00mL乙腈提取液至50mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪上（水浴温度40℃）浓缩至近干，加入3. 0 mL正己烷（4.3）待净化。
7.2净化
依次用3 mL丙酮-正己烷混合溶液（4.7）和4 mL正己烷（4.3）预淋弗罗里硅土柱，弃去流出液。当正己烷液面到达柱吸附层表面时，立即倒入7.1中得到的溶液，用15mL丙酮-正己烷混合溶液（4.8）分三次冲洗烧杯后淋洗弗罗里硅土柱（4.14），用100 mL烧杯接收洗脱液。将盛有洗脱液的烧杯置于氮吹仪上，在水浴温度40℃条件下，氮吹蒸发至完全干燥，用4.00 mL甲醇（4.1）溶解蒸残物，用微孔滤膜（4.13）过滤至2mL样品瓶中，待测。
7.3色谱参考条件
7.3.1色谱柱：C18不锈钢柱，柱长250 mm，内径4. 6 mm，粒径5μm，或相当者。
7. 3.2 流动相：A：水，B：乙腈，按表1进行梯度洗脱。
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7.3.3柱温：30℃。
7.3. 4流 速：1.0 mL/ min。
7.3.5检测波长：250 nm。
7.3.6进样量：10μL。
7.4 测定
分别吸取10μL标准溶液和待测液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以待测液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。
7.5空白实验
除不称取试样外，采用与试样完全相同的测定步骤进行平行操作。
8结果计算
试料中敌菌灵含量用质量分数ω计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按下列公式计算：
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式中：
ρS——标准溶液质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
VS——标准溶液进样体积，单位为微升（μL）；
V0——试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
VX——待测液进样体积， 单位为微升（μL）；
AS——标准溶液的峰面积；
AX——待测液的峰面积；
m——试料质量， 单位为克（g）；
F——提取液体积/分取体积；
计算结果保留两位有效数字。
9精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%。在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的30%。
10色谱图
敌菌灵标准溶液色谱图见图1。
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NY/T 3144-2017 饲料原料血液制品中18种β-受体激动剂的测定 液相色谱-串联质谱法
（转载自：https://t.cn/A6CqvVBl）
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由农业部畜牧业司提出。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC 76）归口。
本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心（北京）]。
本标准主要起草人：索德成、王培龙、李阳、王瑞国、苏晓鸥、樊霞、周炜、冯三令、李宏。
1范围
本标准规定了饲料原料血液制品中18种β受体激动剂测定的液相色谱-串联质谱法。
本标准适用于血球蛋白粉、水解血粉、血球蛋白粉、血粉、发酵血粉中克仑特罗（Clenbuterol）、沙丁胺醇（Salbutamol）、莱克多巴胺（Ractopamine）、齐帕特罗（Zilpaterol）、氯丙那林（Clorprenaline）、特布他林（Terbutaline）、西马特罗（Cimaterol）、西布特罗（Cimbuterol）、马布特罗（Mabuterol）、溴布特罗（Brombuterol）、班布特罗（Bambuterol）、克仑普罗（Clenproperol）、妥布特罗（Tulobuterol）、利托君（Ritodrine）、沙美特罗（Salmeterol）、克仑塞罗福莫特罗（Formoterol）、苯乙醇胺A（Phenylethanolamine A）18种β-受体激动剂的测定。
本标准方法检出限为1μg/kg，定量限为5μg/ kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的用文件.其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14699.1 饲料采样
GB/T 20195动物饲料 试样的制备
3原理
饲料原料血液制晶经酶解处理后，用混合型阳离子固相萃取小程净化、吹干，稀释液溶解，液相色谱-串联质谱仪检测，基贸添加校正、外标法定量。
4试剂
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯试剂，实验室用水符合GB/T 6682中一级水的规定。
4.1 甲醇：色谱纯。
4.2 甲酸：色谱级。
4.3乙酸铵提取液（pH=5. 2）：取乙酸铵15.4 g，用1000 mL水溶解，用乙酸调pH至5.2。
4.4样品稀释溶液：取甲酸0. 1 mL，乙腈10mL，加水90mL，混匀。
4.5氨水甲醇溶液：取5mL氨水与95mL甲醇混合。
4.6高氯酸溶液：取30mL高氯酸与70mL水混合。
4.7克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西马特罗、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗、克仑普罗、妥布特罗、利托君、沙美特罗、克仑塞罗、福莫特罗和苯乙醇胺A对照品：纯度≥98%。
4.8β-受体激动剂标准储备液：分别精密称取各种β-受体激动剂对照品至棕色容量瓶中，用甲醇配成浓度为1 mg/mL的标准储备液，2℃~8℃冷藏保存，有效期12个月。
4.9β-受体激动剂标准工作液：分别精密吸取各种β-受体激动剂储备液（4.8），用样品稀释溶液稀释成浓度为1μg/ mL的标准工作液。2℃~8℃冷藏保存，有效期3个月。
4.10β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶：β-盐酸葡萄糖醛苷酶≥85000u/mL。
4.11氮气：纯度 99. 9%。
4. 12 固相萃取小柱：混合型阳离子交换柱（3 mL， 60 mg），或其他性能相当的小柱。
4.13滤膜：0.22μm，有机材质。
5仪器和设备
5.1液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾电离源。
5.2氮吹仪。
5.3离心机：转速不低于8 000 r/ min。
5.4粉碎机。
5.5涡旋振荡器。
5.6恒温水浴振荡摇床。
5.7固相萃取装置。
5.8 天平：感量0.01 g；感量0. 00001 g。
6采样和试样的制备
按GB/T 14699.1的规定抽取有代表性的样品，用四分法缩减取样，按照GB/T 20195 的规定制备样品，粉碎过0.45mm孔径筛，混合均匀，装入磨口瓶中备用。
7分析步骤
7.1 提取
称取2g（精确至0.01g）样品于50mL离心管中，准确加入20mL乙酸铵提取液（4.3）和50μL β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶，37℃水解过夜（应大于16h），然后于8000r/min离心5min，将10mL上清液转移至另一离心管中，加入1.0mL高氯酸溶液，涡旋混合30s，然后于8000r/min离心5min，上清液备用。
7.2 净化
固相萃取小柱依次用3 mL甲醇、3 mL水活化。取适量或全部上清液过柱，用3 mL水和3 mL甲醇淋洗，抽干，用氨水甲醇溶液3mL洗脱，收集洗脱液，用氮吹仪在50℃条件下吹干或用旋转蒸发仪蒸干，用1. 0mL样品稀释液（4.4）溶解，过0.22μm滤膜。如果检测含量超出线性范围（1μg/L~100μg/L），应适当减少称样量重新处理或减少过固相萃取小柱的溶液量，将上机溶液所含药物的浓度稀释至线性范围内上样。
7. 3空白基质曲线的制备
选取待测样品类型相同的空白血粉样品，称取6份或2份双平行，每份2g（精确至0.01g），于50mL离心管中，按7.1和7.2步骤处理，在净化、吹干后的残渣中，分别添加适量的混合标准工作溶液，配制成不同浓度（1μg/L~100μg/L）的基质添加标准曲线或双平行单点标准溶液，供液相色谱串联质谱测定，进行定量。
7.4参考液相色谱条件
色谱柱：C18柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径1.7μm（或其他效果等同的C18柱）。
柱温：30℃。
进样量：10μL。
流动相及参考梯度洗脱程序见表1。
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7.5参考质谱条件
离子源：电喷雾离子源。
扫描方式：正离子模式。
检测方式：多反应监测。
脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求。
毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值应优化至最佳灵敏度。
定性离子对、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见表2。
image.png
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7.6 定性测定
每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合标准溶液中对应的保留时间货验在±0.5之内，且样品谱图中务组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。
相对离子分度
＞50
20-50（含）
10-20（含）
≤10
允许的最大偏差
±20
±25
±30
±50
7.7 定量测定
在仪器最佳工作条件下，取试样溶液和基质标准溶液分别进样，以标准溶液中欧测组分峰面积为纵坐标，被测组分浓度为横坐标，用标准系列进行单点或多点校准。采用基质添加校正、外标法对样品进行定量。样品溶液中得测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。上述色谱和质谱条件下，18种β-受体激动剂标准溶液的液相色谱-串联质谱离子流色增图参见附录A。
8计算
试样中待测激动剂的质量分数X，以毫克每干克（mg/kg）表示，测定结果时由计算机外标法自动计算，也可按式（1）计算。
image.png
式中：
Pi——试样溶液中待测激动剂的峰面积，
V1——试样提取液体积，单位为毫升（mL）；
ci——待测激动剂标准溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/ mL）；
V3——上机前定容体积，单位为毫升（mL）；
Pst——标准溶 液峰面积平均值；
m——试样质量，单位为克（g）；
V2——净化时分取溶液的体积，单位为毫升（mL）。
测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。
9重复性
在重复性条件下，获得的2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于这2个值算术平均值的20%。
（转载自：https://t.cn/A6CqvVBl）
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由农业部畜牧业司提出。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC 76）归口。
本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心（北京）]。
本标准主要起草人：索德成、王培龙、李阳、王瑞国、苏晓鸥、樊霞、周炜、冯三令、李宏。
1范围
本标准规定了饲料原料血液制品中18种β受体激动剂测定的液相色谱-串联质谱法。
本标准适用于血球蛋白粉、水解血粉、血球蛋白粉、血粉、发酵血粉中克仑特罗（Clenbuterol）、沙丁胺醇（Salbutamol）、莱克多巴胺（Ractopamine）、齐帕特罗（Zilpaterol）、氯丙那林（Clorprenaline）、特布他林（Terbutaline）、西马特罗（Cimaterol）、西布特罗（Cimbuterol）、马布特罗（Mabuterol）、溴布特罗（Brombuterol）、班布特罗（Bambuterol）、克仑普罗（Clenproperol）、妥布特罗（Tulobuterol）、利托君（Ritodrine）、沙美特罗（Salmeterol）、克仑塞罗福莫特罗（Formoterol）、苯乙醇胺A（Phenylethanolamine A）18种β-受体激动剂的测定。
本标准方法检出限为1μg/kg，定量限为5μg/ kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的用文件.其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14699.1 饲料采样
GB/T 20195动物饲料 试样的制备
3原理
饲料原料血液制晶经酶解处理后，用混合型阳离子固相萃取小程净化、吹干，稀释液溶解，液相色谱-串联质谱仪检测，基贸添加校正、外标法定量。
4试剂
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯试剂，实验室用水符合GB/T 6682中一级水的规定。
4.1 甲醇：色谱纯。
4.2 甲酸：色谱级。
4.3乙酸铵提取液（pH=5. 2）：取乙酸铵15.4 g，用1000 mL水溶解，用乙酸调pH至5.2。
4.4样品稀释溶液：取甲酸0. 1 mL，乙腈10mL，加水90mL，混匀。
4.5氨水甲醇溶液：取5mL氨水与95mL甲醇混合。
4.6高氯酸溶液：取30mL高氯酸与70mL水混合。
4.7克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西马特罗、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗、克仑普罗、妥布特罗、利托君、沙美特罗、克仑塞罗、福莫特罗和苯乙醇胺A对照品：纯度≥98%。
4.8β-受体激动剂标准储备液：分别精密称取各种β-受体激动剂对照品至棕色容量瓶中，用甲醇配成浓度为1 mg/mL的标准储备液，2℃~8℃冷藏保存，有效期12个月。
4.9β-受体激动剂标准工作液：分别精密吸取各种β-受体激动剂储备液（4.8），用样品稀释溶液稀释成浓度为1μg/ mL的标准工作液。2℃~8℃冷藏保存，有效期3个月。
4.10β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶：β-盐酸葡萄糖醛苷酶≥85000u/mL。
4.11氮气：纯度 99. 9%。
4. 12 固相萃取小柱：混合型阳离子交换柱（3 mL， 60 mg），或其他性能相当的小柱。
4.13滤膜：0.22μm，有机材质。
5仪器和设备
5.1液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾电离源。
5.2氮吹仪。
5.3离心机：转速不低于8 000 r/ min。
5.4粉碎机。
5.5涡旋振荡器。
5.6恒温水浴振荡摇床。
5.7固相萃取装置。
5.8 天平：感量0.01 g；感量0. 00001 g。
6采样和试样的制备
按GB/T 14699.1的规定抽取有代表性的样品，用四分法缩减取样，按照GB/T 20195 的规定制备样品，粉碎过0.45mm孔径筛，混合均匀，装入磨口瓶中备用。
7分析步骤
7.1 提取
称取2g（精确至0.01g）样品于50mL离心管中，准确加入20mL乙酸铵提取液（4.3）和50μL β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶，37℃水解过夜（应大于16h），然后于8000r/min离心5min，将10mL上清液转移至另一离心管中，加入1.0mL高氯酸溶液，涡旋混合30s，然后于8000r/min离心5min，上清液备用。
7.2 净化
固相萃取小柱依次用3 mL甲醇、3 mL水活化。取适量或全部上清液过柱，用3 mL水和3 mL甲醇淋洗，抽干，用氨水甲醇溶液3mL洗脱，收集洗脱液，用氮吹仪在50℃条件下吹干或用旋转蒸发仪蒸干，用1. 0mL样品稀释液（4.4）溶解，过0.22μm滤膜。如果检测含量超出线性范围（1μg/L~100μg/L），应适当减少称样量重新处理或减少过固相萃取小柱的溶液量，将上机溶液所含药物的浓度稀释至线性范围内上样。
7. 3空白基质曲线的制备
选取待测样品类型相同的空白血粉样品，称取6份或2份双平行，每份2g（精确至0.01g），于50mL离心管中，按7.1和7.2步骤处理，在净化、吹干后的残渣中，分别添加适量的混合标准工作溶液，配制成不同浓度（1μg/L~100μg/L）的基质添加标准曲线或双平行单点标准溶液，供液相色谱串联质谱测定，进行定量。
7.4参考液相色谱条件
色谱柱：C18柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径1.7μm（或其他效果等同的C18柱）。
柱温：30℃。
进样量：10μL。
流动相及参考梯度洗脱程序见表1。
image.png
7.5参考质谱条件
离子源：电喷雾离子源。
扫描方式：正离子模式。
检测方式：多反应监测。
脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求。
毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值应优化至最佳灵敏度。
定性离子对、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见表2。
image.png
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7.6 定性测定
每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合标准溶液中对应的保留时间货验在±0.5之内，且样品谱图中务组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。
相对离子分度
＞50
20-50（含）
10-20（含）
≤10
允许的最大偏差
±20
±25
±30
±50
7.7 定量测定
在仪器最佳工作条件下，取试样溶液和基质标准溶液分别进样，以标准溶液中欧测组分峰面积为纵坐标，被测组分浓度为横坐标，用标准系列进行单点或多点校准。采用基质添加校正、外标法对样品进行定量。样品溶液中得测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。上述色谱和质谱条件下，18种β-受体激动剂标准溶液的液相色谱-串联质谱离子流色增图参见附录A。
8计算
试样中待测激动剂的质量分数X，以毫克每干克（mg/kg）表示，测定结果时由计算机外标法自动计算，也可按式（1）计算。
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式中：
Pi——试样溶液中待测激动剂的峰面积，
V1——试样提取液体积，单位为毫升（mL）；
ci——待测激动剂标准溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/ mL）；
V3——上机前定容体积，单位为毫升（mL）；
Pst——标准溶 液峰面积平均值；
m——试样质量，单位为克（g）；
V2——净化时分取溶液的体积，单位为毫升（mL）。
测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。
9重复性
在重复性条件下，获得的2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于这2个值算术平均值的20%。
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