【维真生物】基因敲除｜TALEN & CRISPR/Cas9系统
TALEN
Transcription Activator-like Effector Nucleases (TALENs) 转录激活样效应因子核酸酶是具有序列特异性的限制性内切酶，通过融合类转录激活因子效应物（TALE）的DNA结合结构域实现DNA双链的断裂，借助宿主细胞DNA修复机制，通过同源重组或非同源性末端连接 (NHEJ)进行DNA修复，从而产生Indel基因编辑效果。
TALE(TAL effectors，类激活因子效应物)是植物病原菌黄单胞菌(Xanthomonas)自然分泌的蛋白，能够识别特异性DNA碱基对。

CRISPR/Cas9
根据Cas蛋白质和参与序列的不同，将目前发现的CRISPR/Cas系统分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。其中，Ⅰ型和Ⅲ型需要多种Cas蛋白共同发挥作用，而Ⅱ型由Cas9单独参与，是研究较为深入的一种类型。
在pre-crRNA转录的同时，与其重复序列互补的反式激活crRNA（trans-activating crRNA，tracrRNA）也转录出来。Cas9首先与crRNA和tracrRNA结合形成复合物，此复合物通过与PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-蛋白-DNA复合结构，进而在与crRNA配对的序列靶点剪切双链DNA。
通过人工设计这两种RNA，可以改造形成具有引导作用的sgRNA（single guide RNA），通过将表达sgRNA的元件与表达Cas9的元件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，便能够对目的基因进行操作，以引导Cas9对DNA的定点切割。

TALEN & CRISPR Cas9的区别【见下图】

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2023年7月15日，农历五月二十八，星期六。头伏第五天，上午阴晴，下午才看见太阳，然后又是热辣的一天。五月中旬了，今天学完了《简单英语对话句子》最后一节(51) Flowers 花，这节印象最深的是tall 和 fall, 由tall 想到high, tall 和high 都有“高”的意思，有生命的如人，动物，树木等表示高时用tall。不与地面接触的人和物高时要用high。表示抽象意义的高时一般只用high。指建筑物、山的高时要tall或high 都可以，不过high的高的程度比tall更甚。再一个是fall有“秋天”之意，因此想到autumn 秋天，fall和autumn都是表示“秋天”的意思，英国人一般用autumn, 而美国人则常用fall, autumn更正式，适用于正式场合和书面表达，而fall则更口语化，适用于日常交流。这天脑子里除了想到这些，还有看微博热搜说的那些事，很是感慨树倒压中人的那个，真是人生无常，上次在半岛公园就遭遇过莫名树倒，幸好没什么事，现在的人责任心没有以前好，都在存侥幸心理，工作经常做不到位，像我楼旁那些违建房，院内的那个违建房当仓库放化肥，举报投诉没人理！然后围墙外面居民楼旁那两个，一个存放大量煤气罐卖煤气，一个修摩托什么的整天不是垃圾车就是城管车来，周末晚上还摆桌吃喝猜码超过零点，严重影响附近居民的正常生活！这天周末，晚上出去逛，很热闹，但我总是走马观花，热闹是别人的。逛回来，女儿说最后一个月的失业金收到了，工资也收到了，转眼，还完钱，无债一身轻，但手头又所剩无几了，我真不明白，现在的年轻人都过的什么生活？超前消费，先斩后奏，你想我每个月两千多养老金是怎么过的？真是操不完的心！我的自拍三角架上次被一个小女孩不注意碰倒摔坏了，害得我又要花钱叫女儿帮我重新网购一个，不然我没有三角架自拍了，生活要充满期待和感恩，老天保佑我们健康快乐平安！晚安！

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书名:《陆厅南林未伊》又名《林未伊陆厅南》
主角：陆厅南林未伊
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一大早，纪芙蓉和姜延就把屋子里里外外又清扫了一遍才收拾东西准备离开。
关上大门时，姜延还是问了句：“你真不打算去跟陆司令说一声？”
纪芙蓉耸耸肩：“不用了，我早跟他说过今天就走。”
姜延沉默，似乎还在担忧着什么。
见状，纪芙蓉主动牵起他的手：“走吧，咱们早点回去，把结婚报告打了。”
听了这话，姜延脸上才漾出一抹笑：“好。”
两人一路往部队大门走，以往训练场总是传来热血沸腾的口号，可今天似乎冷清了很多。
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先帝创业未半而中道崩殂，今天下三分，益州疲弊，此诚危急存亡之秋也。然侍卫之臣不懈于内，忠志之士忘身于外者，盖追先帝之殊遇，欲报之于陛下也。诚宜开张圣听，以光先帝遗德，恢弘志士之气，不宜妄自菲薄，引喻失义，以塞忠谏之路也。
　宫中府中，俱为一体；陟罚臧否，不宜异同。若有作奸犯科及为忠善者，宜付有司论其刑赏，以昭陛下平明之理，不宜偏私，使内外异法也。
　　侍中、侍郎郭攸之、费祎、董允等，此皆良实，志虑忠纯，是以先帝简拔以遗陛下。愚以为宫中之事，事无大小，悉以咨之，然后施行，必能裨补阙漏，有所广益。
　　将军向宠，性行淑均，晓畅军事，试用于昔日，先帝称之曰能，是以众议举宠为督。愚以为营中之事，悉以咨之，必能使行阵和睦，优劣得所。
　　亲贤臣，远小人，此先汉所以兴隆也；亲小人，远贤臣，此后汉所以倾颓也。先帝在时，每与臣论此事，未尝不叹息痛恨于桓、灵也。侍中、尚书、长史、参军，此悉贞良死节之臣，愿陛下亲之信之，则汉室之隆，可计日而待也。
　　臣本布衣，躬耕于南阳，苟全性命于乱世，不求闻达于诸侯。先帝不以臣卑鄙，猥自枉屈，三顾臣于草庐之中，咨臣以当世之事，由是感激，遂许先帝以驱驰。后值倾覆，受任于败军之际，奉命于危难之间，尔来二十有一年矣。
　　先帝知臣谨慎，故临崩寄臣以大事也。受命以来，夙夜忧叹，恐托付不效，以伤先帝之明；故五月渡泸，深入不毛。今南方已定，兵甲已足，当奖率三军，北定中原，庶竭驽钝，攘除奸凶，兴复汉室，还于旧都。此臣所以报先帝而忠陛下之职分也。至于斟酌损益，进尽忠言，则攸之、祎、允之任也。
　　愿陛下托臣以讨贼兴复之效，不效，则治臣之罪，以告先帝之灵。若无兴德之言，则责攸之、祎、允等之慢，以彰其咎；陛下亦宜自谋，以咨诹善道，察纳雅言，深追先帝遗诏。臣不胜受恩感激。今当远离，临表涕零，不知所言