【土壤样本中菲利普孢囊线虫TaqMan实时荧光PCR快速检测及定量分析】
菲利普孢囊线虫（Heterodera filipjevi）是全球小麦生产上的一种重要病原物，早期快速准确的检测对于小麦孢囊线虫病的防控至关重要。
中国农科院植保所彭德良/彭焕研究团队基于TaqMan探针法的实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR with TaqMan probes, TaqMan-qPCR）技术建立了一种直接从田间土壤中快速检测和定量分析菲利普孢囊线虫的方法。
根据 H. filipjevi的RAPD-SCAR 序列（KC529338）设计TaqMan-qPCR特异性的引物和探针，利用已鉴定的27个线虫群体的DNA进行引物特异性检测；利用单条 J2 DNA稀释液（4-0，4-1，4-2，4-3，4-4，4-5，4-6 和 4-7）和单个雌虫DNA稀释液（10-0，10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6和10-7），以及基因组 DNA 的稀释液（100 μg.μL-1，10 μg.μL-1，1 μg.μL-1，0.1 μg.μL-1，0.01 μg.μL-1，0.001 μg.μL-1，100 pg.μL-1 和 10 pg.μL-1）对引物的灵敏度进行检测。通过人工将不同数量（0.1, 1, 10, 100和1000条）的菲利普孢囊线虫添加到灭菌土中，建立了线虫数量的对数与CT值的标准曲线和回归方程，对32份田间土壤样品中H. filipjevi数量进行了评估，并对实时荧光定量PCR检测方法与传统定量方法进行了相关性分析。
本研究建立的菲利普孢囊线虫TaqMan-qPCR检测技术具有极高的特异性和灵敏度，能够从13 种27 个线虫种群中特异的检测出菲利普孢囊线虫，检测阈值低至4-3个单条J2 DNA、10-3个单条雌虫DNA和0.01μg. μL-1基因组DNA。田间土壤样品检测发现，实时荧光定量PCR定量检测方法与传统定量检测法呈现出较好的线性关系（R²= 0.8259）。
本研究建立的TaqMan-qPCR检测菲利普孢囊线虫技术特异性强、灵敏度高，能广泛适用于田间土壤开展菲利普孢囊线虫快速检测和定量分析。
#植保##植病##菲利普孢囊线虫##植物线虫##小麦##小麦孢囊线虫病##线虫检测##科研[超话]#
菲利普孢囊线虫（Heterodera filipjevi）是全球小麦生产上的一种重要病原物，早期快速准确的检测对于小麦孢囊线虫病的防控至关重要。
中国农科院植保所彭德良/彭焕研究团队基于TaqMan探针法的实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR with TaqMan probes, TaqMan-qPCR）技术建立了一种直接从田间土壤中快速检测和定量分析菲利普孢囊线虫的方法。
根据 H. filipjevi的RAPD-SCAR 序列（KC529338）设计TaqMan-qPCR特异性的引物和探针，利用已鉴定的27个线虫群体的DNA进行引物特异性检测；利用单条 J2 DNA稀释液（4-0，4-1，4-2，4-3，4-4，4-5，4-6 和 4-7）和单个雌虫DNA稀释液（10-0，10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6和10-7），以及基因组 DNA 的稀释液（100 μg.μL-1，10 μg.μL-1，1 μg.μL-1，0.1 μg.μL-1，0.01 μg.μL-1，0.001 μg.μL-1，100 pg.μL-1 和 10 pg.μL-1）对引物的灵敏度进行检测。通过人工将不同数量（0.1, 1, 10, 100和1000条）的菲利普孢囊线虫添加到灭菌土中，建立了线虫数量的对数与CT值的标准曲线和回归方程，对32份田间土壤样品中H. filipjevi数量进行了评估，并对实时荧光定量PCR检测方法与传统定量方法进行了相关性分析。
本研究建立的菲利普孢囊线虫TaqMan-qPCR检测技术具有极高的特异性和灵敏度，能够从13 种27 个线虫种群中特异的检测出菲利普孢囊线虫，检测阈值低至4-3个单条J2 DNA、10-3个单条雌虫DNA和0.01μg. μL-1基因组DNA。田间土壤样品检测发现，实时荧光定量PCR定量检测方法与传统定量检测法呈现出较好的线性关系（R²= 0.8259）。
本研究建立的TaqMan-qPCR检测菲利普孢囊线虫技术特异性强、灵敏度高，能广泛适用于田间土壤开展菲利普孢囊线虫快速检测和定量分析。
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铁线虫
快递的鱼
经历了长途跋涉
来我家里修养生息
同时也带着欢乐而来
其中最漂亮的“黄胖”
身上有个美人痣
她来的时候
会翩翩起舞
人世间
新冠肆虐
鱼世界
寄生横流
小主人发现她漂在水面时
黄胖已离开了这个世界
在花盆里进行告别
却发现她的胖肚已成为铁线虫的家
鱼儿离不开水
这是水之道
铁线虫离不开寄居体
这是寄生之道
万物存
皆有道
道生万物
病毒寄生在阳里
阳人都居在小阳间里
呼唤转阴
阴阳易位
阴与阳寻找新的平衡
把纽曲的铁线虫
用外力拉平
你可以发现他真得能成为一条铁钱
换个思维
那个纽曲的虫体
将走在一条直线上
从左手通过铁线可到达右手
寄生之道被拉直之后
所有的寄生虫
将穷途末路
XXB系列从国外的列车运来
变异成新的寄生虫
肺将被染白
谁来为健康买单
尊重平衡
万物有灵
万物皆有道
别让外力拉直躺平
把健康寄居在各种药里
把各种药寄居在胃里
肺有了希望
温度寄居在温度计里
发烧寄居在冰块里
肺不在嗑
一切回归正常
快递的鱼
经历了长途跋涉
来我家里修养生息
同时也带着欢乐而来
其中最漂亮的“黄胖”
身上有个美人痣
她来的时候
会翩翩起舞
人世间
新冠肆虐
鱼世界
寄生横流
小主人发现她漂在水面时
黄胖已离开了这个世界
在花盆里进行告别
却发现她的胖肚已成为铁线虫的家
鱼儿离不开水
这是水之道
铁线虫离不开寄居体
这是寄生之道
万物存
皆有道
道生万物
病毒寄生在阳里
阳人都居在小阳间里
呼唤转阴
阴阳易位
阴与阳寻找新的平衡
把纽曲的铁线虫
用外力拉平
你可以发现他真得能成为一条铁钱
换个思维
那个纽曲的虫体
将走在一条直线上
从左手通过铁线可到达右手
寄生之道被拉直之后
所有的寄生虫
将穷途末路
XXB系列从国外的列车运来
变异成新的寄生虫
肺将被染白
谁来为健康买单
尊重平衡
万物有灵
万物皆有道
别让外力拉直躺平
把健康寄居在各种药里
把各种药寄居在胃里
肺有了希望
温度寄居在温度计里
发烧寄居在冰块里
肺不在嗑
一切回归正常
巴掌大的蜗牛连水泥都啃
每当发生物种入侵，我国食客总会戏言： 怕什么？把它吃到灭绝。但对于看着可爱、吃着也美味的入侵生物——非洲大蜗牛，如果你也蠢蠢欲动想品鉴一番，不妨看过本文再做决定。
不知道你是否听说过这样一则故事，一男子听说生吃蜗牛很补，便在自家花园里，用蔬菜精心喂养了几只大蜗牛，准备供全家人享用。然而，美味珍馐的代价让人难以承受。很快，他们一家就出现发烧、剧烈头痛、呕吐等症状。最终夫妻双方、长子和男子的母亲不治身亡，次子卧床逾十年后过世。
这样一则堪称“灭门惨案”的事故，或许曾让许多人认识了看起来可爱敦厚的非洲大蜗牛——它们正是这个故事里“被精心喂养的大蜗牛”。它们总是背着棕褐色蜗牛壳，上面带有淡黄色条纹。这种巨型蜗牛可以长到20cm， 是世界上最大的蜗牛，同时也是最具威胁的入侵生物之一。
非洲大蜗牛的破坏性极强，它们能以500多种植物为食，包括水果、蔬菜等农作物以及观赏植物。但除去对农业与自然植被的危害， 更重要的是，它还会威胁人类的生命。
“无意”的伤害
非洲大蜗牛的体内、粪便，甚至体表黏液都携带着大量病菌与寄生虫。而造成开头灭门故事的幕后真凶，正是非洲大蜗牛体内最常见的寄生虫——广州管圆线虫。
人和动物，在接触蜗牛黏液、生食（或未煮熟就食用）感染寄生虫的蜗牛或被蜗牛黏液污染的蔬菜后，都有可能感染广州管圆线虫。 一旦它进入人体内，便可能经中枢神经系统入侵大脑，导致发烧头痛、颈部僵硬、恶心呕吐等症状，严重者甚至会死亡。其实，广州管圆线虫最重要的寄主并非蜗牛，它们主要寄生在老鼠肺部血管中，在鼠肺部产卵后，会发育成第一期幼虫，并随粪便排出体外。幼虫被蛞蝓、蜗牛、淡水螺等软体动物吞食后，会在这些中间宿主体内发育成第三期幼虫。鼠类又会捕食这些软体动物，让寄生虫重新回到它们繁殖的地方。
可以说，广州管圆线虫在最终宿主和中间宿主间流畅往返，人类只是误入此循环的非正常宿主，因为广州管圆线虫通常无法在人体内发育为成虫。然而这些年来，感染广州管圆线虫的病例屡见不鲜。一是因为它在螺类中感染率极高；二是非洲大蜗牛生存能力、繁殖能力都很强，在我国南方“人口”基数大。当然，最根本的原因还是人类主动以不安全的方式食用它们。
“有意”的破坏
如果说，非洲大蜗牛作为病菌和寄生虫的 “搬运工”，对人类的伤害还可看作无意，那么它对环境的破坏则是“有意为之”。非洲大蜗牛的胃口非常好，其食谱不仅囊括了众多对人类有经济价值的作物，比如花椰菜、木瓜、 香蕉等，甚至还包括地衣、真菌以及其他蜗牛 （通常是其他蜗牛的尸体）。
仔细观察蜗牛进食的过程，你会发现它们行动虽然缓慢，但吃起东西绝对是标准的“干饭蜗”。在饱受非洲大蜗牛侵扰的地区，居民在花园里种植的蔬菜，有时一夜间就能被啃食一空。
令人惊奇的是，蜗牛其实是世界上牙齿最多的生物，在它针尖一般大小的嘴里，有两万多颗牙齿密集排布在带状的舌头上，因此它们的舌头被称为齿舌。其实，蜗牛并不能“啃食”，只能用“研磨器”一般的舌齿将食物剐蹭下来。
即使这样，非洲大蜗牛的进食能力也让人震惊。我们常开玩笑说“这个月要吃土了”。 现实是，非洲大蜗牛不但可以吃土，甚至还能舔食并消化水泥。因为它们需要不断地补充钙，来维持背上那巨大坚硬的蜗牛壳生长，所以通常需要消耗大量植物来摄取钙。一旦植物无法满足需求时，它们就会以砂石、水泥为食，有时甚至能破坏人类的建筑房体，造成巨大的经济损失。
生存与繁殖
然而，对环境的破坏只是入侵物种的自我修养之一，在入侵地区，强大的生存能力也是必要条件。
从命名就能看出，非洲大蜗牛的自然栖息地原本在温暖湿润的非洲。但如果环境过于干燥或寒冷，它们可以将软体部分钻入土壤中休眠，来减缓新陈代谢，休眠期可长达5~9个月。有时它们还会分泌乳白色的黏液膜来封闭壳口，为自己“关上门”。再结合它们不挑食的属性，被带到温暖地区的非洲大蜗牛，可谓如鱼得水。
此外，非洲大蜗牛通常长到6个月时就已具备繁殖功能，它是雌雄同体、异体繁殖的物种。这意味着，每只蜗牛不用去寻觅特定性别的“另一半”，只要任意两只性成熟的蜗牛相遇，就能够繁衍后代。研究显示，理想情况下一只非洲大蜗牛一生能产下数千枚卵，后代存活率接近90%，其强大的繁殖能力可见一斑。
入侵与灭杀
由于偏爱温暖的气候，非洲大蜗牛通常分布在南北回归线间，在我国主要侵扰着华南地区，在美国则是佛罗里达州备受困扰。20世纪 60年代，几只非洲大蜗牛被带入佛罗里达州， 从此开启了称霸之路。
据佛罗里达州农业和消费者服务部介绍， 佛州在1969年首次发现这种害虫后，花费近 100万美元捕杀了一万七千多只蜗牛，终于在 1975年宣布根除了这种入侵生物。然而，2011 年，佛罗里达州又发现了非洲大蜗牛，由此开启了长达十年的灭杀，这次耗资约2300万美元，灭杀了数十万只蜗牛，又在2021年终于宣布灭杀成功。不幸的是，2022年6月，佛罗里达州再次发现了非洲大蜗牛，被迫开启了第三次“灭蜗战争”。
可以说，佛罗里达州与非洲大蜗牛的战斗经验极为丰富。佛罗里达州农业和消费者服务部在第二次灭杀行动中，呼吁看见非洲大蜗牛的居民主动电话报告，成功追踪并消灭了大量蜗牛。他们也会喷洒针对蜗牛、蛞蝓的杀虫剂——四聚乙醛，来实现定点灭杀。他们甚至训练了可以嗅出非洲大蜗牛的拉布拉多犬，可以在蜗牛最活跃的夜间追踪它们。此外，虽然蜗牛自身的移动速度很慢，但它们能利用黏液附着在移动的车辆、垃圾等处，四处移动扩散。因此，很关键的一点就是设立隔离区，严格检查可能将蜗牛带出隔离区的土壤、机器等。
为彻底根除非洲大蜗牛，人类可谓费尽心机，但非洲大蜗牛并不清楚自己对人类造成的伤害。事实上，除了交配过程，它们一生都是孤独的，既不会与同伴交流，也不会与后代建立任何联系。倾尽一生，它们不是在移动，便是在进食或休息中。
每当发生物种入侵，我国食客总会戏言： 怕什么？把它吃到灭绝。但对于看着可爱、吃着也美味的入侵生物——非洲大蜗牛，如果你也蠢蠢欲动想品鉴一番，不妨看过本文再做决定。
不知道你是否听说过这样一则故事，一男子听说生吃蜗牛很补，便在自家花园里，用蔬菜精心喂养了几只大蜗牛，准备供全家人享用。然而，美味珍馐的代价让人难以承受。很快，他们一家就出现发烧、剧烈头痛、呕吐等症状。最终夫妻双方、长子和男子的母亲不治身亡，次子卧床逾十年后过世。
这样一则堪称“灭门惨案”的事故，或许曾让许多人认识了看起来可爱敦厚的非洲大蜗牛——它们正是这个故事里“被精心喂养的大蜗牛”。它们总是背着棕褐色蜗牛壳，上面带有淡黄色条纹。这种巨型蜗牛可以长到20cm， 是世界上最大的蜗牛，同时也是最具威胁的入侵生物之一。
非洲大蜗牛的破坏性极强，它们能以500多种植物为食，包括水果、蔬菜等农作物以及观赏植物。但除去对农业与自然植被的危害， 更重要的是，它还会威胁人类的生命。
“无意”的伤害
非洲大蜗牛的体内、粪便，甚至体表黏液都携带着大量病菌与寄生虫。而造成开头灭门故事的幕后真凶，正是非洲大蜗牛体内最常见的寄生虫——广州管圆线虫。
人和动物，在接触蜗牛黏液、生食（或未煮熟就食用）感染寄生虫的蜗牛或被蜗牛黏液污染的蔬菜后，都有可能感染广州管圆线虫。 一旦它进入人体内，便可能经中枢神经系统入侵大脑，导致发烧头痛、颈部僵硬、恶心呕吐等症状，严重者甚至会死亡。其实，广州管圆线虫最重要的寄主并非蜗牛，它们主要寄生在老鼠肺部血管中，在鼠肺部产卵后，会发育成第一期幼虫，并随粪便排出体外。幼虫被蛞蝓、蜗牛、淡水螺等软体动物吞食后，会在这些中间宿主体内发育成第三期幼虫。鼠类又会捕食这些软体动物，让寄生虫重新回到它们繁殖的地方。
可以说，广州管圆线虫在最终宿主和中间宿主间流畅往返，人类只是误入此循环的非正常宿主，因为广州管圆线虫通常无法在人体内发育为成虫。然而这些年来，感染广州管圆线虫的病例屡见不鲜。一是因为它在螺类中感染率极高；二是非洲大蜗牛生存能力、繁殖能力都很强，在我国南方“人口”基数大。当然，最根本的原因还是人类主动以不安全的方式食用它们。
“有意”的破坏
如果说，非洲大蜗牛作为病菌和寄生虫的 “搬运工”，对人类的伤害还可看作无意，那么它对环境的破坏则是“有意为之”。非洲大蜗牛的胃口非常好，其食谱不仅囊括了众多对人类有经济价值的作物，比如花椰菜、木瓜、 香蕉等，甚至还包括地衣、真菌以及其他蜗牛 （通常是其他蜗牛的尸体）。
仔细观察蜗牛进食的过程，你会发现它们行动虽然缓慢，但吃起东西绝对是标准的“干饭蜗”。在饱受非洲大蜗牛侵扰的地区，居民在花园里种植的蔬菜，有时一夜间就能被啃食一空。
令人惊奇的是，蜗牛其实是世界上牙齿最多的生物，在它针尖一般大小的嘴里，有两万多颗牙齿密集排布在带状的舌头上，因此它们的舌头被称为齿舌。其实，蜗牛并不能“啃食”，只能用“研磨器”一般的舌齿将食物剐蹭下来。
即使这样，非洲大蜗牛的进食能力也让人震惊。我们常开玩笑说“这个月要吃土了”。 现实是，非洲大蜗牛不但可以吃土，甚至还能舔食并消化水泥。因为它们需要不断地补充钙，来维持背上那巨大坚硬的蜗牛壳生长，所以通常需要消耗大量植物来摄取钙。一旦植物无法满足需求时，它们就会以砂石、水泥为食，有时甚至能破坏人类的建筑房体，造成巨大的经济损失。
生存与繁殖
然而，对环境的破坏只是入侵物种的自我修养之一，在入侵地区，强大的生存能力也是必要条件。
从命名就能看出，非洲大蜗牛的自然栖息地原本在温暖湿润的非洲。但如果环境过于干燥或寒冷，它们可以将软体部分钻入土壤中休眠，来减缓新陈代谢，休眠期可长达5~9个月。有时它们还会分泌乳白色的黏液膜来封闭壳口，为自己“关上门”。再结合它们不挑食的属性，被带到温暖地区的非洲大蜗牛，可谓如鱼得水。
此外，非洲大蜗牛通常长到6个月时就已具备繁殖功能，它是雌雄同体、异体繁殖的物种。这意味着，每只蜗牛不用去寻觅特定性别的“另一半”，只要任意两只性成熟的蜗牛相遇，就能够繁衍后代。研究显示，理想情况下一只非洲大蜗牛一生能产下数千枚卵，后代存活率接近90%，其强大的繁殖能力可见一斑。
入侵与灭杀
由于偏爱温暖的气候，非洲大蜗牛通常分布在南北回归线间，在我国主要侵扰着华南地区，在美国则是佛罗里达州备受困扰。20世纪 60年代，几只非洲大蜗牛被带入佛罗里达州， 从此开启了称霸之路。
据佛罗里达州农业和消费者服务部介绍， 佛州在1969年首次发现这种害虫后，花费近 100万美元捕杀了一万七千多只蜗牛，终于在 1975年宣布根除了这种入侵生物。然而，2011 年，佛罗里达州又发现了非洲大蜗牛，由此开启了长达十年的灭杀，这次耗资约2300万美元，灭杀了数十万只蜗牛，又在2021年终于宣布灭杀成功。不幸的是，2022年6月，佛罗里达州再次发现了非洲大蜗牛，被迫开启了第三次“灭蜗战争”。
可以说，佛罗里达州与非洲大蜗牛的战斗经验极为丰富。佛罗里达州农业和消费者服务部在第二次灭杀行动中，呼吁看见非洲大蜗牛的居民主动电话报告，成功追踪并消灭了大量蜗牛。他们也会喷洒针对蜗牛、蛞蝓的杀虫剂——四聚乙醛，来实现定点灭杀。他们甚至训练了可以嗅出非洲大蜗牛的拉布拉多犬，可以在蜗牛最活跃的夜间追踪它们。此外，虽然蜗牛自身的移动速度很慢，但它们能利用黏液附着在移动的车辆、垃圾等处，四处移动扩散。因此，很关键的一点就是设立隔离区，严格检查可能将蜗牛带出隔离区的土壤、机器等。
为彻底根除非洲大蜗牛，人类可谓费尽心机，但非洲大蜗牛并不清楚自己对人类造成的伤害。事实上，除了交配过程，它们一生都是孤独的，既不会与同伴交流，也不会与后代建立任何联系。倾尽一生，它们不是在移动，便是在进食或休息中。
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