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#TAN组合[超话]#
【新闻】20240223 新专主打
很遗憾是在这种情况下得知这次回归主打的歌名[苦涩]
已故新沙洞老虎今天（23日）被发现时已经死亡遗作是TAN最后一张专辑的主打歌'HYPERTONIC'。
据悉,遗憾去世的制作人新沙洞老虎的遗作是组合TAN的新曲。
23日，据MK体育的采访，新沙洞老虎的遗作是TAN的最后一张专辑的主打歌《HYPERTONIC》。 TAN为了3月的回归,在结束春节连休主打歌录音的状态下接到了噩耗。
新沙洞老虎（本名李浩阳）于23日下午去世，享年41岁。 被发现死亡的故人在熟人在工作室发现晕倒的他后拨打119报警,但最终死亡。
新沙洞老虎推出了T-ara的《Roly Poly》、Apink的《No No No》、EXID的《上下》、MOMOLAND的《Boom Boom》等众多热门歌曲，成为了有名的制作人。
最近担任了TR Entertainment总制作人，2021年担任了女子组合TRI.BE总制作人(这两句翻译得怪怪的)，TRI.BE在20日发行了他制作的第四张单曲《Diamond》。
另外，TAN是通过MBC男子组合选秀节目《极限出道野生豆》组成的，2022年3月出道的ThinkEntertainment所属7人男子组合，即将推出最后一张专辑。
[金娜英 MK体育记者]
守护塔：关于“最后一张专辑”正确理解以官方立场为准哈，新闻纯搬运，翻译没错。
【新闻】20240223 新专主打
很遗憾是在这种情况下得知这次回归主打的歌名[苦涩]
已故新沙洞老虎今天（23日）被发现时已经死亡遗作是TAN最后一张专辑的主打歌'HYPERTONIC'。
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23日，据MK体育的采访，新沙洞老虎的遗作是TAN的最后一张专辑的主打歌《HYPERTONIC》。 TAN为了3月的回归,在结束春节连休主打歌录音的状态下接到了噩耗。
新沙洞老虎（本名李浩阳）于23日下午去世，享年41岁。 被发现死亡的故人在熟人在工作室发现晕倒的他后拨打119报警,但最终死亡。
新沙洞老虎推出了T-ara的《Roly Poly》、Apink的《No No No》、EXID的《上下》、MOMOLAND的《Boom Boom》等众多热门歌曲，成为了有名的制作人。
最近担任了TR Entertainment总制作人，2021年担任了女子组合TRI.BE总制作人(这两句翻译得怪怪的)，TRI.BE在20日发行了他制作的第四张单曲《Diamond》。
另外，TAN是通过MBC男子组合选秀节目《极限出道野生豆》组成的，2022年3月出道的ThinkEntertainment所属7人男子组合，即将推出最后一张专辑。
[金娜英 MK体育记者]
守护塔：关于“最后一张专辑”正确理解以官方立场为准哈，新闻纯搬运，翻译没错。
#AME资讯# https://t.cn/A6YN3H9q
MiR-29c-3p和MiR-223-3p通过靶向ANGPTL4调控口腔鳞状细胞癌的增殖和耐药性
背景：本研究旨在确定血管生成素样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）中的表达和功能，并探究miR-29C-3p和miR-223-3p是否可以通过靶向ANGPTL4调控OSCC的增殖和顺铂耐药性。
方法：首先在生物信息学数据库中预测肿瘤中ANGPTL4和microRNAs（miRNAs）的表达，随后通过Western blot和qPCR检测组织和细胞中ANGPTL4和miRNA的蛋白质、mRNA表达水平。通过平板克隆形成、CCK-8实验和IC50确定细胞的增殖和药物敏感性，并使用双荧光素酶报告实验来确定miRNA对ANGPTL4的调控。
结果：ANGPTL4在OSCC组织中较正常组织表达高。敲除ANGPTL4后，OSCC细胞增殖减少，对顺铂的敏感性增加。双荧光素酶报告实验显示，当过表达miR-29c-3p和miR-223-3p后，野生型（wild-type, WT）组的荧光强度减少，而突变型（mutant, MUT）组的荧光强度几乎没有变化。上述结果证明了miRNA的过表达降低了ANGPTL4的蛋白水平，从而影响OSCC细胞增殖和耐药性。
结论：miR-29c-3p和miR-223-3p可以通过靶向ANGPTL4来调控OSCC的细胞增殖和顺铂耐药性。
关键词：口腔鳞状细胞癌（OSCC）；微小RNA（microRNA, miRNA）；血管生成素样蛋白4（ANGPTL4）；增殖；顺铂耐药性。
·前言
口腔癌（Oral cancer）是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，占全球所有恶性肿瘤的1%～2%[1]。因为口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinom, OSCC）易于转移且预后不良，5年总生存率仅为55%[2]。顺铂（Cisplatin）是OSCC术后化疗的一线药物[3]，但OSCC对顺铂化疗的耐药性日益严重[4]。如何有效提高术后化疗的药物敏感性，是OSCC研究中的一个热点和难题。
近期研究表明血管生成样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）可能参与OSCC的发生，并与OSCC的转移相关[5]，同时ANGPTL4也可能是舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinoma ，TSCC）的重要标志物以及防止TSCC发展和转移的重要治疗靶点[6]。
本课题组前期研究表明，ANGPTL4的下调可以抑制TSCC的迁移和增殖，且ANGPTL4的高表达与TSCC的T分期、淋巴结转移、血管生成和较差的总生存期相关[7]。ANGPTL4基因位于19p131染色体上，包含7个外显子和6个内含子。目前认为，ANGPTL4家族的主要功能是参与物质和能量代谢的调节，但近期许多研究已证实，ANGPTL4在肿瘤进展中也起着重要的调控作用。此外，仍有研究表明ANGPTL4在肝癌和其他癌症中发挥抑癌作用[8]。ANGPTL4可能作为抑癌基因和致癌基因发挥双重功能，但其调节机制仍不清楚。因此，ANGPTL4在OSCC中的作用值得进一步探索。
微小RNA（MicroRNAs, miRNAs）是长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们参与调节转录后基因表达。许多研究已经证明，miRNA的异常表达可以参与头颈鳞状细胞癌（head and neck squamous carcinoma, HNSC）及其他癌症的发生、发展[9]。miRNA可以调节目标基因的表达水平，诱导mRNA降解或抑制蛋白翻译。在本研究中，探索了ANGPTL4在OSCC中的表达水平及其变化的影响，验证miRNA对ANGPTL4的靶向调控，并确定miRNA对ANGPTL4的靶向调控是否对OSCC的增殖和耐药性存在影响。本研究将对OSCC的诊断、治疗以及预后预测提供一定的参考作用。按照MDAR报告清单呈现以下文章。（可在https://t.cn/A6YN3H95获取）
·方法
组织收集
本研究符合赫尔辛基宣言（Declaration of Helsinki, 2013年修订版）。该研究已得到中山大学孙逸仙纪念医院伦理委员会的批准（No. SYSEC-KY-KS-2021-028）。从中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科获取了36对来自口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者的肿瘤组织（tumor tissues , T）和癌旁组织（paracancerous tissues, P）。所有患者均为原发OSCC，未接受过术前放疗或化疗。所有样本均存储在-80℃下备用。所有患者均已签署知情同意书。使用了癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas, TCGA）数据库来分析头颈鳞状细胞癌（HNSC）和正常组织中ANGPTL4的表达。
细胞培养和处理
购买了来自中国科学院（上海，中国）的HOK、SCC9、UM1、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞系，并使用上述细胞开展实验。所有细胞系均培养于含10％胎牛血清（FBS）（Thermo Fisher，美国）和1％青霉素-链霉素溶液（Thermo Fisher，美国）的DMEM（Thermo Fisher，美国）或DMEM-F12（Thermo Fisher，美国）所配完全培养基，温度37℃，含有5％CO2的细胞培养箱中。其中HOK、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞培养使用DMEM，SCC9和UM1细胞培养使用F12/DMEM。
RNA提取和定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）
总RNA使用TRIzol试剂（TaKaRa，日本）提取，按照制造商说明，使用ABI 9700实时PCR仪（ABI，美国）反转录为cDNA。MicroRNA反转录引物按照茎环法[10]设计。1 µL的cDNA与TB Green® Premix Ex Taq™ II (#RR820B, TaKaRa, Japan）按照制造商的说明，在20 µL反应体积下混合。在Light Cycler 480 II实时PCR系统（Roche，瑞士）中测定mRNA的相对表达，使用统计软件进行统计分析。反应条件如下：94℃ 2 min，94℃ 20秒，58℃ 20秒，72℃ 20秒，共40循环，所有反应均重复3次。根据GAPDH和U6的表达进行标准化后，使用2−ΔΔCt方法计算ANGPTL4和microRNA的相对表达水平。如表S1所示，所有PCR引物均从IGEBIO（广州，中国）购买。
Western blot检测
为提取蛋白，将细胞用预冷PBS洗涤2次，刮取收集细胞，然后在含有1%蛋白酶抑制剂（#CW2200S，CWBIO，中国）的裂解缓冲液（#01408，Beyotime，中国）中裂解。离心后，收集上清液，使用BCA蛋白定量试剂盒（#CW0014S，CWBIO，中国）确定蛋白浓度。稀释并混合上样缓冲液（#CW0027S，CWBIO，中国），并在95℃加热5 min使蛋白变性。按照Beyotime聚丙烯酰胺凝胶试剂盒的说明准备SDS-PAGE凝胶。电泳后（90 V，1.3 h），将蛋白转移到PVDF膜（#P0021S，Beyotime，中国）（250 mA，70 min）。将PVDF膜在含有5％脱脂牛奶和0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中孵育1 h，以封闭蛋白。将一抗ANGPTL4 (#18374-1-AP, Proteintech, USA）和GAPDH (60004-1-Ig, Proteintech, USA）在含有0.1％ Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白抗体稀释液中溶解，稀释比例为1:1000，然后在4℃摇床中孵育16 h（过夜孵育）。将膜在含有0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中洗涤。然后在含有0.1％Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白中，以1:1,000的稀释比例孵育二抗，包括山羊抗小鼠IgG-HRP (#sc-2005, Santa Cruz Biotechnology, USA）和山羊抗兔IgG-HRP (#sc-2004, Santa Cruz Biotechnology, USA)1 h。根据标准流程进行显色，拍照和凝胶图像分析。
更多方法请点击微信链接查看！
MiR-29c-3p和MiR-223-3p通过靶向ANGPTL4调控口腔鳞状细胞癌的增殖和耐药性
背景：本研究旨在确定血管生成素样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）中的表达和功能，并探究miR-29C-3p和miR-223-3p是否可以通过靶向ANGPTL4调控OSCC的增殖和顺铂耐药性。
方法：首先在生物信息学数据库中预测肿瘤中ANGPTL4和microRNAs（miRNAs）的表达，随后通过Western blot和qPCR检测组织和细胞中ANGPTL4和miRNA的蛋白质、mRNA表达水平。通过平板克隆形成、CCK-8实验和IC50确定细胞的增殖和药物敏感性，并使用双荧光素酶报告实验来确定miRNA对ANGPTL4的调控。
结果：ANGPTL4在OSCC组织中较正常组织表达高。敲除ANGPTL4后，OSCC细胞增殖减少，对顺铂的敏感性增加。双荧光素酶报告实验显示，当过表达miR-29c-3p和miR-223-3p后，野生型（wild-type, WT）组的荧光强度减少，而突变型（mutant, MUT）组的荧光强度几乎没有变化。上述结果证明了miRNA的过表达降低了ANGPTL4的蛋白水平，从而影响OSCC细胞增殖和耐药性。
结论：miR-29c-3p和miR-223-3p可以通过靶向ANGPTL4来调控OSCC的细胞增殖和顺铂耐药性。
关键词：口腔鳞状细胞癌（OSCC）；微小RNA（microRNA, miRNA）；血管生成素样蛋白4（ANGPTL4）；增殖；顺铂耐药性。
·前言
口腔癌（Oral cancer）是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，占全球所有恶性肿瘤的1%～2%[1]。因为口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinom, OSCC）易于转移且预后不良，5年总生存率仅为55%[2]。顺铂（Cisplatin）是OSCC术后化疗的一线药物[3]，但OSCC对顺铂化疗的耐药性日益严重[4]。如何有效提高术后化疗的药物敏感性，是OSCC研究中的一个热点和难题。
近期研究表明血管生成样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）可能参与OSCC的发生，并与OSCC的转移相关[5]，同时ANGPTL4也可能是舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinoma ，TSCC）的重要标志物以及防止TSCC发展和转移的重要治疗靶点[6]。
本课题组前期研究表明，ANGPTL4的下调可以抑制TSCC的迁移和增殖，且ANGPTL4的高表达与TSCC的T分期、淋巴结转移、血管生成和较差的总生存期相关[7]。ANGPTL4基因位于19p131染色体上，包含7个外显子和6个内含子。目前认为，ANGPTL4家族的主要功能是参与物质和能量代谢的调节，但近期许多研究已证实，ANGPTL4在肿瘤进展中也起着重要的调控作用。此外，仍有研究表明ANGPTL4在肝癌和其他癌症中发挥抑癌作用[8]。ANGPTL4可能作为抑癌基因和致癌基因发挥双重功能，但其调节机制仍不清楚。因此，ANGPTL4在OSCC中的作用值得进一步探索。
微小RNA（MicroRNAs, miRNAs）是长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们参与调节转录后基因表达。许多研究已经证明，miRNA的异常表达可以参与头颈鳞状细胞癌（head and neck squamous carcinoma, HNSC）及其他癌症的发生、发展[9]。miRNA可以调节目标基因的表达水平，诱导mRNA降解或抑制蛋白翻译。在本研究中，探索了ANGPTL4在OSCC中的表达水平及其变化的影响，验证miRNA对ANGPTL4的靶向调控，并确定miRNA对ANGPTL4的靶向调控是否对OSCC的增殖和耐药性存在影响。本研究将对OSCC的诊断、治疗以及预后预测提供一定的参考作用。按照MDAR报告清单呈现以下文章。（可在https://t.cn/A6YN3H95获取）
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组织收集
本研究符合赫尔辛基宣言（Declaration of Helsinki, 2013年修订版）。该研究已得到中山大学孙逸仙纪念医院伦理委员会的批准（No. SYSEC-KY-KS-2021-028）。从中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科获取了36对来自口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者的肿瘤组织（tumor tissues , T）和癌旁组织（paracancerous tissues, P）。所有患者均为原发OSCC，未接受过术前放疗或化疗。所有样本均存储在-80℃下备用。所有患者均已签署知情同意书。使用了癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas, TCGA）数据库来分析头颈鳞状细胞癌（HNSC）和正常组织中ANGPTL4的表达。
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总RNA使用TRIzol试剂（TaKaRa，日本）提取，按照制造商说明，使用ABI 9700实时PCR仪（ABI，美国）反转录为cDNA。MicroRNA反转录引物按照茎环法[10]设计。1 µL的cDNA与TB Green® Premix Ex Taq™ II (#RR820B, TaKaRa, Japan）按照制造商的说明，在20 µL反应体积下混合。在Light Cycler 480 II实时PCR系统（Roche，瑞士）中测定mRNA的相对表达，使用统计软件进行统计分析。反应条件如下：94℃ 2 min，94℃ 20秒，58℃ 20秒，72℃ 20秒，共40循环，所有反应均重复3次。根据GAPDH和U6的表达进行标准化后，使用2−ΔΔCt方法计算ANGPTL4和microRNA的相对表达水平。如表S1所示，所有PCR引物均从IGEBIO（广州，中国）购买。
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为提取蛋白，将细胞用预冷PBS洗涤2次，刮取收集细胞，然后在含有1%蛋白酶抑制剂（#CW2200S，CWBIO，中国）的裂解缓冲液（#01408，Beyotime，中国）中裂解。离心后，收集上清液，使用BCA蛋白定量试剂盒（#CW0014S，CWBIO，中国）确定蛋白浓度。稀释并混合上样缓冲液（#CW0027S，CWBIO，中国），并在95℃加热5 min使蛋白变性。按照Beyotime聚丙烯酰胺凝胶试剂盒的说明准备SDS-PAGE凝胶。电泳后（90 V，1.3 h），将蛋白转移到PVDF膜（#P0021S，Beyotime，中国）（250 mA，70 min）。将PVDF膜在含有5％脱脂牛奶和0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中孵育1 h，以封闭蛋白。将一抗ANGPTL4 (#18374-1-AP, Proteintech, USA）和GAPDH (60004-1-Ig, Proteintech, USA）在含有0.1％ Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白抗体稀释液中溶解，稀释比例为1:1000，然后在4℃摇床中孵育16 h（过夜孵育）。将膜在含有0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中洗涤。然后在含有0.1％Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白中，以1:1,000的稀释比例孵育二抗，包括山羊抗小鼠IgG-HRP (#sc-2005, Santa Cruz Biotechnology, USA）和山羊抗兔IgG-HRP (#sc-2004, Santa Cruz Biotechnology, USA)1 h。根据标准流程进行显色，拍照和凝胶图像分析。
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