今天阳光很好，上文体学课的时候一直被窗外摇曳的芦苇吸引，课上遇到一首有趣的小诗（p3），以及每次读都被惊艳的歌德的Nähe des Geliebten（因为忘记拍照[悲伤]，故把原文附上，之前上课翻译的时候就好喜欢啊）
Ich denke dein, wenn mir der Sonne Schimmer
Vom Meere strahlt;
Ich denke dein, wenn sich des Mondes Flimmer
In Quellen mahlt.
Ich sehe dich, wenn auf dem fernen Wege
Der Staub sich hebt;
In tiefer Nacht, wenn auf dem schmalen Stege
Der Wandrer bebt.
Ich höre dich, wenn dort mit dumpfem Rauschen
Die Welle steigt.
Im stillen Haine da geh ich oft zu lauschen,
Wenn alles schweigt.
Ich bin bei dir, du seyst auch noch so ferne,
Du bist mir nah!
Die Sonne sinkt, bald leuchten mir die Sterne.
O wärst du da!
Ich denke dein, wenn mir der Sonne Schimmer
Vom Meere strahlt;
Ich denke dein, wenn sich des Mondes Flimmer
In Quellen mahlt.
Ich sehe dich, wenn auf dem fernen Wege
Der Staub sich hebt;
In tiefer Nacht, wenn auf dem schmalen Stege
Der Wandrer bebt.
Ich höre dich, wenn dort mit dumpfem Rauschen
Die Welle steigt.
Im stillen Haine da geh ich oft zu lauschen,
Wenn alles schweigt.
Ich bin bei dir, du seyst auch noch so ferne,
Du bist mir nah!
Die Sonne sinkt, bald leuchten mir die Sterne.
O wärst du da!
中华人民共和国国家标准
GB 1886.355-2022 食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷
（转载自：https://t.cn/A6l2QP2F）
前言
本标准代替GB 8270-2014《食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷》。
本标准与GB 8270-2014相比，主要变化如下：
——修改了标准范围；
——修改了分子式、结构式和相对分子质量等相关内容；
——修改了甜菊糖苷含量(以干基计)的指标要求和检验方法；
——修改了“灼烧残渣”指标名称为“灰分”；
——修改了“总砷(以As计)”指标名称为“砷(As)”；
——增加了铅(Pb)、砷(As)的检验方法；
——将鉴别试验中pH的要求放入理化指标。
1范围
本标准适用于以甜叶菊(Stevia Rebaudiana Bertoni)叶为原料，经提取、精制而得的食品添加剂甜菊糖苷。已知糖苷包括甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷及甜菊双糖苷。
2分子式、结构式和相对分子质量
2.1 13种糖苷的分子式
甜菊苷：C38H60O18
瑞鲍迪苷A：C44H70O23
瑞鲍迪苷B：C38 H60O18
瑞鲍迪苷C：C44H70O22
瑞鲍迪苷D：C50H80O28
瑞鲍迪苷E：C44H70O23
瑞鲍迪苷F：C43H68O22
瑞鲍迪苷M：C56H90O33
瑞鲍迪苷N：C56H90O32
瑞鲍迪苷O：C62H100O37
杜克苷A：C38H60O17
甜茶苷：C32H50O13
甜菊双糖苷：C32H50O13
2.2 13种糖苷的结构式
image.png
13种糖苷的化合物名称、R1位取代基和R2位取代基见表1。甜菊醇(R1=R2=H)为甜菊糖苷配基。
image.png
2.3 13种糖苷的相对分子质量
甜菊苷：804.87(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷A：967.01(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷B：804.87(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷C：951.01(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷D：1 129.15(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷E：967.01(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷F：936. 99(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷M：1 291.29(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷N：1 275.29(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷O：1 437.44(按2018年国际相对原子质量)
杜克苷A：788.87(按2018年国际相对原子质量)
甜茶苷：642.73(按2018年国际相对原子质量)
甜菊双糖苷：642.73(按2018年国际相对原子质量)
3技术要求
3.1 感官要求
感官要求应符合表2的规定。
image.png
3.2理化指标
理化指标应符合表3的规定。
image.png
附录A
检验方法
A.1 一般规定
本标准所用试剂和水在未注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品在未注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.2 鉴别试验
A.2.1甜菊糖苷色谱试验
在甜菊糖苷含量试验中，试样溶液色谱图中13种糖苷的色谱峰应与混合标准品溶液相对应。
A.3 甜菊糖苷含量(以干基计)的测定
A.3.1试剂和材料
A.3.1.1乙腈：色谱纯。
A.3.1.2磷酸二氢钠：色谱纯。
A.3.1.3 磷酸：色谱纯。
A.3.1.4水：GB/T 6682规定的一级水。
A.3.1.5乙腈水溶液：乙腈和水的体积比为30： 70。
A.3.1.6磷酸钠缓冲液(pH 2.6)：称取1.20 g磷酸二氢钠(NaH2PO4)，溶于800 mL水中，用磷酸调节pH至2.6。
A.3.1.7 瑞鲍迪苷A标准品：瑞鲍迪苷A含量(质量分数，以干基计)≥99.0%。
A.3.1.8瑞鲍迪苷 D标准品：瑞鲍迪苷D含量(质量分数，以干基计)≥95.0%。
A.3.1.9其他11种糖苷标准品：甜菊苷、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷，或使用13种糖苷混合标准品。
A.3.2仪器和设备
高效液相色谱仪：配备紫外检测器，或其他等效的检测器。
A.3.3 参考色谱条件
A.3.3.1色谱柱：C18反相色谱柱，250 mm×4.6 mm，粒径5 μm；或其他等效的色谱柱。
A.3.3.2流动相梯度洗脱条件(比例可根据实际情况调节)：见表A.1。
image.png
A.3.3.3流动相流速：0.8 mL/min。
A.3.3.4 检测波长：210 nm。
A.3.3.5 进样量：2 μL~10 μL。
A.3.3.6柱温：40℃。
A.3.4 分析步骤
A.3.4.1混合标准品溶液的制备
分别称取适量瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷D、甜菊苷瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷标准品(或13种糖苷混合标准品)，置于同一个容量瓶中，用乙腈水溶液完全溶解后定容，得到混合标准品溶液。混合标准品溶液用于确定13种糖苷的相对保留时间。
A.3.4.2标准溶液的制备
分别称取5.0 mg、10.0 mg、20.0 mg、25.0 mg的瑞鲍迪苷A标准品和2.5 mg、5.0 mg、10.0 mg、12.5mg的瑞鲍迪苷D标准品，精确至0.1mg，分别置于25mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，分别得到浓度为200 mg/L、400 mg/L、800 mg/L、1 000 mg/L的瑞鲍迪苷A标准溶液和100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L、500 mg/L的瑞鲍迪苷D标准溶液。
A.3.4.3试样溶液的制备
称取25.0 mg±5.0 mg试样(干基)，精确至0.1 mg，置于50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到试样溶液。
A.3.5 测定
A.3.5.1标准曲线的绘制
在A.3.3参考色谱条件下，分别对200 mg/L、400 mg/L、800 mg/L、1 000 mg/L的瑞鲍迪苷A标准溶液和100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L、500 mg/L的瑞鲍迪苷D标准溶液进行色谱分析，记录各浓度标准溶液对应的峰面积值。以标准溶液色谱图中瑞鲍迪苷A或瑞鲍迪苷D的峰面积值为Y轴，以对应溶液浓度(mg/L)为X轴，绘制标准曲线，分别得到瑞鲍迪苷A标准曲线和瑞鲍迪苷D标准曲线(强制过原点)，从标准曲线上分别获得瑞鲍迪苷A线性函数斜率(Ka)和瑞鲍迪苷D线性函数斜率(Kd)。
A.3.5.2含量测定
在A.3.3参考色谱条件下，分别对混合标准品溶液和试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图(见附录B)相比较，以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰。记录试样溶液色谱图中瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷D、甜菊苷、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷的峰面积。
A.3.6 结果计算
8种糖苷含量(以干基计)的质量分数w；按式(A.1)计算。
image.png
式中：
i——s、a、b、c、f、da、ru、sb，分别对应甜菊苷瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷；
fi——i组分与瑞鲍迪苷A的式量比值：1.00(瑞鲍迪苷A)、0.83(甜菊苷)、0.83(瑞鲍迪苷B)、
0.98(瑞鲍迪苷C)、0.97(瑞鲍迪苷F)、0.82(杜克苷A)、0.66(甜茶苷)、0.66(甜菊双糖苷)；
Ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积值；
Ka—— A.3.5.1 中瑞鲍迪苷A线性函数斜率；
c——试样溶液的浓度，单位为毫克每升(mg/L)。
5种糖苷含量(以干基计)的质量分数ωi按式(A.2)计算。
image.png
式中：
i——d、e、m、n、o，分别对应瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O；
fi——i组分与瑞鲍迪苷D的式量比值：1.00(瑞鲍迪苷D)、0.86(瑞鲍迪苷E)、1.14(瑞鲍迪苷
M)、1.13(瑞鲍迪苷N)、1.27(瑞鲍迪苷O)；
Ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积值；
Kd——A.3.5.1 中瑞鲍迪苷D线性函数斜率；
c——试样溶液的浓度，单位为毫克每升(mg/L)。
由式(A.1)和式(A.2)计算得到13种组分的含量ωs、ωa、ωb、ωc、ωf、ωda、ωru、ωsb、ωd、ωe、ωm、ωn和ω0，取各组分含量之和即为试样中甜菊糖苷含量。
A.4 pH的测定
A.4.1仪器和设备
酸度计。
A.4.2试剂和材料
称取1 g试样，溶于100 mL除去二氧化碳的水中，用酸度计测定试样溶液的pH。
A.5 甲醇和乙醇的测定
A.5.1试剂和材料
A.5.1.1 甲醇：色谱纯。
A.5.1.2乙醇：色谱纯。
A.5.1.3水：GB/T 6682规定的一级水。
A.5.2仪器和设备
气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器(FID)和顶空进样器。
A.5.3参考色谱条件
A.5.3.1色谱柱：键合聚乙二醇熔融石英毛细管柱(柱长为30 m，柱内径为0.25 mm，膜厚度为0.25 μm)，或其他等效的色谱柱。
A.5.3.2载气：氮气( 纯度≥99.99%)。
A.5.3.3载气流量：5.0 mL/ min。
A.5.3.4 柱温：40℃保持5 min，以10℃/min升温至120℃，保持2 min，最后以16℃/min升温至
200℃，保持5 min。
A.5.3.5进样口温度：200℃。
A.5.3.6检测器温度：250℃。
A.5.3.7进样体积：1 mL。
A.5.3.8分流比：1 ： 50。
A.5.4参考顶空条件
A.5.4.1顶空瓶温度：80℃。
A.5.4.2顶空瓶平衡时间：30 min。
A.5.5分析步骤
A.5.5.1空白溶液的制备
移取2 mL水，置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
A.5.5.2标准溶液的制备
A.5.5.2.1甲 醇标准溶液的制备
称取0.1 g甲醇，精确至0.001 g，用水稀释后转移至一个1 000 mL的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得100 mg/L的甲醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为2.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L和50 mg/L的甲醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2 mL，分别置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
A.5.5.2.2乙醇标准 溶液的制备
称取0.1 g乙醇，精确至0.001 g，用水稀释后转移至一个100 mL的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得1 000 mg/L的乙醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、500 mg/L和750 mg/L的乙醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2 mL，分别置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
A.5.5.3试样溶液的制备
称取1.0g试样，精确至0.001 g，用水溶解后转移至-个10 mL的容量瓶中，在室温下超声处理约3 min，加水稀释至刻度，摇匀。移取该溶液2 mL置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
A.5.6 测定
在参考操作条件A.5.3和A.5.4下，分别对空白溶液、标准系列溶液和试样溶液进行测定，记录甲醇或乙醇的峰面积值。以标准系列溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值为Y轴，以对应溶剂浓度(mg/L)为X轴，绘制标准曲线，得到甲醇标准曲线或乙醇标准曲线。根据试样溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值，从标准曲线求得试样溶液中甲醇或乙醇的浓度(mg/L)。
A.5.7结果计算
试样中甲醇或乙醇的含量w，单位为毫克每千克(mg/kg) ，按式(A.3)计算。
image.png
式中：
c——从标准曲线求得的试样溶液中甲醇或乙醇的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V——试样溶液的体积，单位为毫升(mL)；
m——试样的质量，单位为克(g)。
GB 1886.355-2022 食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷
（转载自：https://t.cn/A6l2QP2F）
前言
本标准代替GB 8270-2014《食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷》。
本标准与GB 8270-2014相比，主要变化如下：
——修改了标准范围；
——修改了分子式、结构式和相对分子质量等相关内容；
——修改了甜菊糖苷含量(以干基计)的指标要求和检验方法；
——修改了“灼烧残渣”指标名称为“灰分”；
——修改了“总砷(以As计)”指标名称为“砷(As)”；
——增加了铅(Pb)、砷(As)的检验方法；
——将鉴别试验中pH的要求放入理化指标。
1范围
本标准适用于以甜叶菊(Stevia Rebaudiana Bertoni)叶为原料，经提取、精制而得的食品添加剂甜菊糖苷。已知糖苷包括甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷及甜菊双糖苷。
2分子式、结构式和相对分子质量
2.1 13种糖苷的分子式
甜菊苷：C38H60O18
瑞鲍迪苷A：C44H70O23
瑞鲍迪苷B：C38 H60O18
瑞鲍迪苷C：C44H70O22
瑞鲍迪苷D：C50H80O28
瑞鲍迪苷E：C44H70O23
瑞鲍迪苷F：C43H68O22
瑞鲍迪苷M：C56H90O33
瑞鲍迪苷N：C56H90O32
瑞鲍迪苷O：C62H100O37
杜克苷A：C38H60O17
甜茶苷：C32H50O13
甜菊双糖苷：C32H50O13
2.2 13种糖苷的结构式
image.png
13种糖苷的化合物名称、R1位取代基和R2位取代基见表1。甜菊醇(R1=R2=H)为甜菊糖苷配基。
image.png
2.3 13种糖苷的相对分子质量
甜菊苷：804.87(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷A：967.01(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷B：804.87(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷C：951.01(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷D：1 129.15(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷E：967.01(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷F：936. 99(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷M：1 291.29(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷N：1 275.29(按2018年国际相对原子质量)
瑞鲍迪苷O：1 437.44(按2018年国际相对原子质量)
杜克苷A：788.87(按2018年国际相对原子质量)
甜茶苷：642.73(按2018年国际相对原子质量)
甜菊双糖苷：642.73(按2018年国际相对原子质量)
3技术要求
3.1 感官要求
感官要求应符合表2的规定。
image.png
3.2理化指标
理化指标应符合表3的规定。
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附录A
检验方法
A.1 一般规定
本标准所用试剂和水在未注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品在未注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.2 鉴别试验
A.2.1甜菊糖苷色谱试验
在甜菊糖苷含量试验中，试样溶液色谱图中13种糖苷的色谱峰应与混合标准品溶液相对应。
A.3 甜菊糖苷含量(以干基计)的测定
A.3.1试剂和材料
A.3.1.1乙腈：色谱纯。
A.3.1.2磷酸二氢钠：色谱纯。
A.3.1.3 磷酸：色谱纯。
A.3.1.4水：GB/T 6682规定的一级水。
A.3.1.5乙腈水溶液：乙腈和水的体积比为30： 70。
A.3.1.6磷酸钠缓冲液(pH 2.6)：称取1.20 g磷酸二氢钠(NaH2PO4)，溶于800 mL水中，用磷酸调节pH至2.6。
A.3.1.7 瑞鲍迪苷A标准品：瑞鲍迪苷A含量(质量分数，以干基计)≥99.0%。
A.3.1.8瑞鲍迪苷 D标准品：瑞鲍迪苷D含量(质量分数，以干基计)≥95.0%。
A.3.1.9其他11种糖苷标准品：甜菊苷、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷，或使用13种糖苷混合标准品。
A.3.2仪器和设备
高效液相色谱仪：配备紫外检测器，或其他等效的检测器。
A.3.3 参考色谱条件
A.3.3.1色谱柱：C18反相色谱柱，250 mm×4.6 mm，粒径5 μm；或其他等效的色谱柱。
A.3.3.2流动相梯度洗脱条件(比例可根据实际情况调节)：见表A.1。
image.png
A.3.3.3流动相流速：0.8 mL/min。
A.3.3.4 检测波长：210 nm。
A.3.3.5 进样量：2 μL~10 μL。
A.3.3.6柱温：40℃。
A.3.4 分析步骤
A.3.4.1混合标准品溶液的制备
分别称取适量瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷D、甜菊苷瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷标准品(或13种糖苷混合标准品)，置于同一个容量瓶中，用乙腈水溶液完全溶解后定容，得到混合标准品溶液。混合标准品溶液用于确定13种糖苷的相对保留时间。
A.3.4.2标准溶液的制备
分别称取5.0 mg、10.0 mg、20.0 mg、25.0 mg的瑞鲍迪苷A标准品和2.5 mg、5.0 mg、10.0 mg、12.5mg的瑞鲍迪苷D标准品，精确至0.1mg，分别置于25mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，分别得到浓度为200 mg/L、400 mg/L、800 mg/L、1 000 mg/L的瑞鲍迪苷A标准溶液和100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L、500 mg/L的瑞鲍迪苷D标准溶液。
A.3.4.3试样溶液的制备
称取25.0 mg±5.0 mg试样(干基)，精确至0.1 mg，置于50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到试样溶液。
A.3.5 测定
A.3.5.1标准曲线的绘制
在A.3.3参考色谱条件下，分别对200 mg/L、400 mg/L、800 mg/L、1 000 mg/L的瑞鲍迪苷A标准溶液和100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L、500 mg/L的瑞鲍迪苷D标准溶液进行色谱分析，记录各浓度标准溶液对应的峰面积值。以标准溶液色谱图中瑞鲍迪苷A或瑞鲍迪苷D的峰面积值为Y轴，以对应溶液浓度(mg/L)为X轴，绘制标准曲线，分别得到瑞鲍迪苷A标准曲线和瑞鲍迪苷D标准曲线(强制过原点)，从标准曲线上分别获得瑞鲍迪苷A线性函数斜率(Ka)和瑞鲍迪苷D线性函数斜率(Kd)。
A.3.5.2含量测定
在A.3.3参考色谱条件下，分别对混合标准品溶液和试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图(见附录B)相比较，以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰。记录试样溶液色谱图中瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷D、甜菊苷、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷的峰面积。
A.3.6 结果计算
8种糖苷含量(以干基计)的质量分数w；按式(A.1)计算。
image.png
式中：
i——s、a、b、c、f、da、ru、sb，分别对应甜菊苷瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷；
fi——i组分与瑞鲍迪苷A的式量比值：1.00(瑞鲍迪苷A)、0.83(甜菊苷)、0.83(瑞鲍迪苷B)、
0.98(瑞鲍迪苷C)、0.97(瑞鲍迪苷F)、0.82(杜克苷A)、0.66(甜茶苷)、0.66(甜菊双糖苷)；
Ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积值；
Ka—— A.3.5.1 中瑞鲍迪苷A线性函数斜率；
c——试样溶液的浓度，单位为毫克每升(mg/L)。
5种糖苷含量(以干基计)的质量分数ωi按式(A.2)计算。
image.png
式中：
i——d、e、m、n、o，分别对应瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷E、瑞鲍迪苷M、瑞鲍迪苷N、瑞鲍迪苷O；
fi——i组分与瑞鲍迪苷D的式量比值：1.00(瑞鲍迪苷D)、0.86(瑞鲍迪苷E)、1.14(瑞鲍迪苷
M)、1.13(瑞鲍迪苷N)、1.27(瑞鲍迪苷O)；
Ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积值；
Kd——A.3.5.1 中瑞鲍迪苷D线性函数斜率；
c——试样溶液的浓度，单位为毫克每升(mg/L)。
由式(A.1)和式(A.2)计算得到13种组分的含量ωs、ωa、ωb、ωc、ωf、ωda、ωru、ωsb、ωd、ωe、ωm、ωn和ω0，取各组分含量之和即为试样中甜菊糖苷含量。
A.4 pH的测定
A.4.1仪器和设备
酸度计。
A.4.2试剂和材料
称取1 g试样，溶于100 mL除去二氧化碳的水中，用酸度计测定试样溶液的pH。
A.5 甲醇和乙醇的测定
A.5.1试剂和材料
A.5.1.1 甲醇：色谱纯。
A.5.1.2乙醇：色谱纯。
A.5.1.3水：GB/T 6682规定的一级水。
A.5.2仪器和设备
气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器(FID)和顶空进样器。
A.5.3参考色谱条件
A.5.3.1色谱柱：键合聚乙二醇熔融石英毛细管柱(柱长为30 m，柱内径为0.25 mm，膜厚度为0.25 μm)，或其他等效的色谱柱。
A.5.3.2载气：氮气( 纯度≥99.99%)。
A.5.3.3载气流量：5.0 mL/ min。
A.5.3.4 柱温：40℃保持5 min，以10℃/min升温至120℃，保持2 min，最后以16℃/min升温至
200℃，保持5 min。
A.5.3.5进样口温度：200℃。
A.5.3.6检测器温度：250℃。
A.5.3.7进样体积：1 mL。
A.5.3.8分流比：1 ： 50。
A.5.4参考顶空条件
A.5.4.1顶空瓶温度：80℃。
A.5.4.2顶空瓶平衡时间：30 min。
A.5.5分析步骤
A.5.5.1空白溶液的制备
移取2 mL水，置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
A.5.5.2标准溶液的制备
A.5.5.2.1甲 醇标准溶液的制备
称取0.1 g甲醇，精确至0.001 g，用水稀释后转移至一个1 000 mL的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得100 mg/L的甲醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为2.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L和50 mg/L的甲醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2 mL，分别置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
A.5.5.2.2乙醇标准 溶液的制备
称取0.1 g乙醇，精确至0.001 g，用水稀释后转移至一个100 mL的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得1 000 mg/L的乙醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、500 mg/L和750 mg/L的乙醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2 mL，分别置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
A.5.5.3试样溶液的制备
称取1.0g试样，精确至0.001 g，用水溶解后转移至-个10 mL的容量瓶中，在室温下超声处理约3 min，加水稀释至刻度，摇匀。移取该溶液2 mL置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
A.5.6 测定
在参考操作条件A.5.3和A.5.4下，分别对空白溶液、标准系列溶液和试样溶液进行测定，记录甲醇或乙醇的峰面积值。以标准系列溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值为Y轴，以对应溶剂浓度(mg/L)为X轴，绘制标准曲线，得到甲醇标准曲线或乙醇标准曲线。根据试样溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值，从标准曲线求得试样溶液中甲醇或乙醇的浓度(mg/L)。
A.5.7结果计算
试样中甲醇或乙醇的含量w，单位为毫克每千克(mg/kg) ，按式(A.3)计算。
image.png
式中：
c——从标准曲线求得的试样溶液中甲醇或乙醇的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V——试样溶液的体积，单位为毫升(mL)；
m——试样的质量，单位为克(g)。
#【热点文章】# 厦门大学陈曦教授等：过氧亚硝基传感检测的荧光探针合成与应用
引用本文:叶廷秀，杨林，罗红元，等. 过氧亚硝基传感检测的荧光探针合成与应用[J]. 化学试剂, 2023, 45(11):45-50.
DOI:10.13822/j.cnki.hxsj.2023.0353
背景介绍
过氧亚硝基阴离子（ONOO-）是生物体内许多病理过程的信号分子之一。在生理条件下，ONOO-的有效浓度一般维持在极低的水平，且寿命也极短，通常为10 ms左右。小分子荧光探针具有灵敏度高、选择性好、生物兼容性好等优点，将其与荧光成像技术相结合，用于活细胞、活体中目标分子的识别、影像以及监控目标分子动态变化，设计合成可特异性识别ONOO-的小分子荧光探针，并结合生物成像技术挖掘荧光探针在体内ONOO-检测与监测依然是研究的热点。
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文章亮点
1.提供了一种基于硼酸酯为识别基团的小分子荧光探针TPE-BCO的合成方法，并考察了TPE-BCO用于体外ONOO-检测的可行性及检测条件；
2.通过核磁共振氢谱、高分辨质谱表征了TPE-BCO的结构，研究了TPE-BCO的光谱性质，探讨了TPE-BCO用于ONOO-检测的响应机理；
3.为用于ONOO-检测的小分子荧光探针合成及其在ONOO-检测中的应用提供了新思路。
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内容介绍
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1 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验方法
1.2.1 TPE-BCO的合成
在25 mL的单口烧瓶中加入34.8 mg（0.1 mmol）1-（4-羟基苯）-1,2,2-三苯乙烯（TPE-OH）、34.8 mg（1.45 mmol）氢化钠（NaH）以及5 mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF），25 ℃充分搅拌反应0.5 h，随后加入35.5 mg（0.12 mmol）4-溴甲基苯硼酸频哪醇酯，继续反应24 h。
将滤液在室温下旋蒸至无溶剂，置于真空中干燥，得到除去溶剂的粗产品。用硅胶柱层析法（V（石油醚）∶V（CH2Cl2）= 5∶2）分离纯化粗产品，旋蒸后得到0.0274 g纯的探针TPE-BCO，产率78.4%。具体合成路线如图1所示。
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1.2.2 溶液的配制
ONOO-溶液的配制[32]：分别取1.5 mL（0.7 mol/L）H2O2溶液和1.5 mL（0.6 mol/L）HCl溶液于烧瓶中，快速混入3.0 mL（0.6 mol/L）NaNO2溶液和3.0 mL（1.5 mol/L）NaOH溶液，在室温下快速搅拌得到ONOO-溶液。
2 结果与讨论
2.1 TPE-BCO的紫外-可见吸收光谱
通过扫描获得了1.0×10-5 mol/L TPE-BCO的吸收光谱以及加入1.4×10-5 mol/L ONOO-后的吸收光谱（图2）。
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2.2 TPE-BCO的荧光光谱
TPE-BCO的荧光激发光谱和发射光谱图如图3所示。为了便于比较，实验同时扫描了TPE-OH的荧光光谱图。
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2.3 TPE-BCO在PBS缓冲溶液中的稳定性研究
以330 nm为激发波长，考察了 1.0×10-5 mol/L TPE-BCO在磷酸缓冲溶液（PBS，0.01 mol/L，pH 7.4）中的稳定性（图4）。
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2.4 TPE-BCO用于ONOO-检测的可行性研究
2.4.1 响应时间
实验以1.0×10-5 mol/L TPE-BCO与 1.4×10-5mol/L ONOO-在不同响应时间的荧光强度（λ=465 nm）变化探讨了反应时间对ONOO-检测荧光强度信号的影响（图5）。
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2.4.2 pH的影响
pH是影响荧光强度的重要参数之一，实验考察了pH 4.0～10.0 的PBS缓冲溶液（0.01 mol/L）中 1.0×10-5 mol/L TPE-BCO与 1.4×10-5mol/L 的ONOO-的响应情况（图6）。
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2.4.3 ONOO-的响应情况
2.4.4 选择性
2.5 反应体系检测ONOO-机理推测
硼酸酯对过氧亚硝基等氧化自由基有良好的响应能力[33]。实验发现，TPE-BCO与前驱体TPE-OH的荧光光谱基本重叠，但硼酸酯作为过氧亚硝基识别基团的引入降低了TPE-BCO的溶解度，增强了TPE-BCO的荧光强度。
3 结论
本文设计合成了以1-（4-羟基苯）-1,2,2-三苯乙烯为荧光部分，4-溴甲基苯硼酸频哪醇酯为识别部分的荧光探针TPE-BCO，并对其与ONOO-的响应性能进行了研究。该探针最大发射波长为465 nm，ONOO-对TPE-BCO的荧光有猝灭响应，TPE-BCO的荧光强度与0~7.0×10-5 mol/L ONOO-的浓度符合指数函数关系（R2 = 0.9949），在ONOO-浓度7.0 ×10-6~2.8×10-5 mol/L的范围内呈现良好的线性相关关系，TPE-BCO与ONOO-最佳响应时间为25 min。该方法检测灵敏度高，检出限达2.4×10-8 mol/L，且选择性好，对其他活性物质的抗干扰能力强，能够选择性的用于体外ONOO-的检测。
引用本文:叶廷秀，杨林，罗红元，等. 过氧亚硝基传感检测的荧光探针合成与应用[J]. 化学试剂, 2023, 45(11):45-50.
DOI:10.13822/j.cnki.hxsj.2023.0353
背景介绍
过氧亚硝基阴离子（ONOO-）是生物体内许多病理过程的信号分子之一。在生理条件下，ONOO-的有效浓度一般维持在极低的水平，且寿命也极短，通常为10 ms左右。小分子荧光探针具有灵敏度高、选择性好、生物兼容性好等优点，将其与荧光成像技术相结合，用于活细胞、活体中目标分子的识别、影像以及监控目标分子动态变化，设计合成可特异性识别ONOO-的小分子荧光探针，并结合生物成像技术挖掘荧光探针在体内ONOO-检测与监测依然是研究的热点。
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文章亮点
1.提供了一种基于硼酸酯为识别基团的小分子荧光探针TPE-BCO的合成方法，并考察了TPE-BCO用于体外ONOO-检测的可行性及检测条件；
2.通过核磁共振氢谱、高分辨质谱表征了TPE-BCO的结构，研究了TPE-BCO的光谱性质，探讨了TPE-BCO用于ONOO-检测的响应机理；
3.为用于ONOO-检测的小分子荧光探针合成及其在ONOO-检测中的应用提供了新思路。
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内容介绍
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1 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
1.2 实验方法
1.2.1 TPE-BCO的合成
在25 mL的单口烧瓶中加入34.8 mg（0.1 mmol）1-（4-羟基苯）-1,2,2-三苯乙烯（TPE-OH）、34.8 mg（1.45 mmol）氢化钠（NaH）以及5 mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF），25 ℃充分搅拌反应0.5 h，随后加入35.5 mg（0.12 mmol）4-溴甲基苯硼酸频哪醇酯，继续反应24 h。
将滤液在室温下旋蒸至无溶剂，置于真空中干燥，得到除去溶剂的粗产品。用硅胶柱层析法（V（石油醚）∶V（CH2Cl2）= 5∶2）分离纯化粗产品，旋蒸后得到0.0274 g纯的探针TPE-BCO，产率78.4%。具体合成路线如图1所示。
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1.2.2 溶液的配制
ONOO-溶液的配制[32]：分别取1.5 mL（0.7 mol/L）H2O2溶液和1.5 mL（0.6 mol/L）HCl溶液于烧瓶中，快速混入3.0 mL（0.6 mol/L）NaNO2溶液和3.0 mL（1.5 mol/L）NaOH溶液，在室温下快速搅拌得到ONOO-溶液。
2 结果与讨论
2.1 TPE-BCO的紫外-可见吸收光谱
通过扫描获得了1.0×10-5 mol/L TPE-BCO的吸收光谱以及加入1.4×10-5 mol/L ONOO-后的吸收光谱（图2）。
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2.2 TPE-BCO的荧光光谱
TPE-BCO的荧光激发光谱和发射光谱图如图3所示。为了便于比较，实验同时扫描了TPE-OH的荧光光谱图。
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2.3 TPE-BCO在PBS缓冲溶液中的稳定性研究
以330 nm为激发波长，考察了 1.0×10-5 mol/L TPE-BCO在磷酸缓冲溶液（PBS，0.01 mol/L，pH 7.4）中的稳定性（图4）。
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2.4 TPE-BCO用于ONOO-检测的可行性研究
2.4.1 响应时间
实验以1.0×10-5 mol/L TPE-BCO与 1.4×10-5mol/L ONOO-在不同响应时间的荧光强度（λ=465 nm）变化探讨了反应时间对ONOO-检测荧光强度信号的影响（图5）。
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2.4.2 pH的影响
pH是影响荧光强度的重要参数之一，实验考察了pH 4.0～10.0 的PBS缓冲溶液（0.01 mol/L）中 1.0×10-5 mol/L TPE-BCO与 1.4×10-5mol/L 的ONOO-的响应情况（图6）。
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2.4.3 ONOO-的响应情况
2.4.4 选择性
2.5 反应体系检测ONOO-机理推测
硼酸酯对过氧亚硝基等氧化自由基有良好的响应能力[33]。实验发现，TPE-BCO与前驱体TPE-OH的荧光光谱基本重叠，但硼酸酯作为过氧亚硝基识别基团的引入降低了TPE-BCO的溶解度，增强了TPE-BCO的荧光强度。
3 结论
本文设计合成了以1-（4-羟基苯）-1,2,2-三苯乙烯为荧光部分，4-溴甲基苯硼酸频哪醇酯为识别部分的荧光探针TPE-BCO，并对其与ONOO-的响应性能进行了研究。该探针最大发射波长为465 nm，ONOO-对TPE-BCO的荧光有猝灭响应，TPE-BCO的荧光强度与0~7.0×10-5 mol/L ONOO-的浓度符合指数函数关系（R2 = 0.9949），在ONOO-浓度7.0 ×10-6~2.8×10-5 mol/L的范围内呈现良好的线性相关关系，TPE-BCO与ONOO-最佳响应时间为25 min。该方法检测灵敏度高，检出限达2.4×10-8 mol/L，且选择性好，对其他活性物质的抗干扰能力强，能够选择性的用于体外ONOO-的检测。
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