胰岛素样生长因子1受体elisa方法说明书
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中血清素/血清胺(ST)水平。用纯化的血清素/血清胺(ST)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血清素/血清胺(ST)，再与HRP标记的血清素/血清胺(ST)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻di洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶S的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血清素/血清胺(ST)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中血清素/血清胺(ST)浓度。
试剂盒特点:
1、高效、灵敏、特异的抗体;
2、稳定的重复性和可靠性;
3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体;
4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
5、节省实验经费。
试剂盒组成 :
1、30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2、酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（160pg/ml） 0.5ml×1瓶
3、酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4、样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5、显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6、显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求:
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
样本处理及要求：
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤：
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
80pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
40pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
20pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
10pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
5pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中血清素/血清胺(ST)水平。用纯化的血清素/血清胺(ST)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血清素/血清胺(ST)，再与HRP标记的血清素/血清胺(ST)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻di洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶S的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血清素/血清胺(ST)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中血清素/血清胺(ST)浓度。
试剂盒特点:
1、高效、灵敏、特异的抗体;
2、稳定的重复性和可靠性;
3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体;
4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
5、节省实验经费。
试剂盒组成 :
1、30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2、酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（160pg/ml） 0.5ml×1瓶
3、酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4、样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5、显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6、显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求:
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
样本处理及要求：
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤：
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
80pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
40pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
20pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
10pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
5pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
动物造模：大小手术模型 药物诱导模型
模型评价监测：行为学检测 影像检测 生化生理指标检测
细胞培养 细胞爬片 细胞转染 流式细胞术 慢病毒包装 细胞划痕 细胞迁移 细胞侵袭 稳定株筛选等
硬组织切片 不脱钙切片 脱钙 软化 包埋 切片 染色 特殊染色 免疫组化 免疫荧光 病理图像采集等
荧光定量PCR服务 miPNA检测 DNA定量 甲基化测序 质粒提取 质粒构造 菌种鉴定 慧星实验 引物合成等
蛋白质纯化 蛋白质双向电泳 单克隆抗体制备 原核表达 免疫沉淀 免疫共沉淀 SILAC标记定量蛋白质组学
ELISA检测 生化检测 血细胞分析 组织样本匀浆 肝功能 肾功能 心肌酶谱 血常规 血脂 血糖 凝血因子
基因组学 转录组学 单细胞测序 蛋白质组学 代谢组学 承接全国实验项目：可电话/微信联系153-8316-6405#动物实验外包##医学科研#
模型评价监测：行为学检测 影像检测 生化生理指标检测
细胞培养 细胞爬片 细胞转染 流式细胞术 慢病毒包装 细胞划痕 细胞迁移 细胞侵袭 稳定株筛选等
硬组织切片 不脱钙切片 脱钙 软化 包埋 切片 染色 特殊染色 免疫组化 免疫荧光 病理图像采集等
荧光定量PCR服务 miPNA检测 DNA定量 甲基化测序 质粒提取 质粒构造 菌种鉴定 慧星实验 引物合成等
蛋白质纯化 蛋白质双向电泳 单克隆抗体制备 原核表达 免疫沉淀 免疫共沉淀 SILAC标记定量蛋白质组学
ELISA检测 生化检测 血细胞分析 组织样本匀浆 肝功能 肾功能 心肌酶谱 血常规 血脂 血糖 凝血因子
基因组学 转录组学 单细胞测序 蛋白质组学 代谢组学 承接全国实验项目：可电话/微信联系153-8316-6405#动物实验外包##医学科研#
【CXCL16与大动脉粥样硬化性脑梗死及预后的关系】大动脉粥样硬化型脑梗死的发病率约占缺血性脑梗死的50%，近年来，一系列实验及临床数据表明，炎症反应参与了动脉粥样硬化的形成，CXCL16可能在动脉粥样硬化相关病变中发挥重要作用，然而CXCL16与大动脉粥样硬化型脑梗死及预后的相关性尚不清楚。我们旨在讨论CXCL16在大动脉粥样硬化型脑梗死中的价值。方法：纳入273例大动脉粥样硬化型脑梗死患者和198例健康对照组。将大动脉粥样硬化型脑梗死患者按出院后3个月mRS评分分为两组，血清CXCL16水平通过ELISA进行定量。结果：大动脉粥样硬化型脑梗死患者血清CXCL16水平明显升高。是大动脉粥样硬化型脑梗死的独立危险因素。mRS评分 ≥ 3分组CXCL16水平高于mRS评分 < 3分组。#毕业论文# #论文投稿咨询# #学术论文# #期刊论文# #论文写作# #汉斯出版社#
崔雪晨, 李奔, 马爱军. CXCL16与大动脉粥样硬化性脑梗死及预后的关系[J]. 临床医学进展, 2024, 14(2): 4012-4022. https://t.cn/A6Yuk8Rm
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崔雪晨, 李奔, 马爱军. CXCL16与大动脉粥样硬化性脑梗死及预后的关系[J]. 临床医学进展, 2024, 14(2): 4012-4022. https://t.cn/A6Yuk8Rm
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