#化妆教学##高冷仙气##刘诗诗妆容#刘诗诗的高冷仙女风格妆容，你也可以轻松掌握！✨
你是否被最近刘诗诗的"堕落仙子妆"迷倒了呢？真是太美了~ 为什么我强调不要模仿这种妆容呢？因为这可能会让你在潜意识中不自觉地想与照片中的形象保持一致。但这并不是我在化妆课程中经常提倡的方法，我们的目的不是变成任何人，而是展现出最好的自己。这款妆容教程旨在帮助那些像我和刘诗诗一样属于冷夏类型的朋友们分解并演示每个步骤以及绘制方法，以帮助我们普通人在日常妆容中使用。对于那些暖色调的朋友来说，你可以借鉴一些技巧，只需将颜色调整为暖色调即可。当然，化妆本身就是一个有趣的过程，无需有任何心理负担就能尽情享受。 这项产品的清单真的非常实用，如Celvoke单色眼影 EX14、Dasique九宫格眼影盘 13 Cool Blending、Regina Gao The S Collection S06 晕染刷、Regina Gao The S Collection S10 铺色刷、Sephora防水塑型摩登奇袭眼线胶笔 47 waterfall、NARS12色眼影盘 Cool Crush、橘朵唇线笔 01、Lunasol四色眼影盘 EX28、EXCEL单色眼影 D03、Stila单色眼影 lake havasu、淳睫No.20元媛款、CHANEL单色腮红 15 ORCHID ROSE、Into you唇泥 W01、3ce face blush NUDE PEACH等，都是必备的工具！
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#AME资讯# https://t.cn/A6YN3H9q
MiR-29c-3p和MiR-223-3p通过靶向ANGPTL4调控口腔鳞状细胞癌的增殖和耐药性
背景：本研究旨在确定血管生成素样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）中的表达和功能，并探究miR-29C-3p和miR-223-3p是否可以通过靶向ANGPTL4调控OSCC的增殖和顺铂耐药性。
方法：首先在生物信息学数据库中预测肿瘤中ANGPTL4和microRNAs（miRNAs）的表达，随后通过Western blot和qPCR检测组织和细胞中ANGPTL4和miRNA的蛋白质、mRNA表达水平。通过平板克隆形成、CCK-8实验和IC50确定细胞的增殖和药物敏感性，并使用双荧光素酶报告实验来确定miRNA对ANGPTL4的调控。
结果：ANGPTL4在OSCC组织中较正常组织表达高。敲除ANGPTL4后，OSCC细胞增殖减少，对顺铂的敏感性增加。双荧光素酶报告实验显示，当过表达miR-29c-3p和miR-223-3p后，野生型（wild-type, WT）组的荧光强度减少，而突变型（mutant, MUT）组的荧光强度几乎没有变化。上述结果证明了miRNA的过表达降低了ANGPTL4的蛋白水平，从而影响OSCC细胞增殖和耐药性。
结论：miR-29c-3p和miR-223-3p可以通过靶向ANGPTL4来调控OSCC的细胞增殖和顺铂耐药性。
关键词：口腔鳞状细胞癌（OSCC）；微小RNA（microRNA, miRNA）；血管生成素样蛋白4（ANGPTL4）；增殖；顺铂耐药性。
·前言
口腔癌（Oral cancer）是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，占全球所有恶性肿瘤的1%～2%[1]。因为口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinom, OSCC）易于转移且预后不良，5年总生存率仅为55%[2]。顺铂（Cisplatin）是OSCC术后化疗的一线药物[3]，但OSCC对顺铂化疗的耐药性日益严重[4]。如何有效提高术后化疗的药物敏感性，是OSCC研究中的一个热点和难题。
近期研究表明血管生成样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）可能参与OSCC的发生，并与OSCC的转移相关[5]，同时ANGPTL4也可能是舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinoma ，TSCC）的重要标志物以及防止TSCC发展和转移的重要治疗靶点[6]。
本课题组前期研究表明，ANGPTL4的下调可以抑制TSCC的迁移和增殖，且ANGPTL4的高表达与TSCC的T分期、淋巴结转移、血管生成和较差的总生存期相关[7]。ANGPTL4基因位于19p131染色体上，包含7个外显子和6个内含子。目前认为，ANGPTL4家族的主要功能是参与物质和能量代谢的调节，但近期许多研究已证实，ANGPTL4在肿瘤进展中也起着重要的调控作用。此外，仍有研究表明ANGPTL4在肝癌和其他癌症中发挥抑癌作用[8]。ANGPTL4可能作为抑癌基因和致癌基因发挥双重功能，但其调节机制仍不清楚。因此，ANGPTL4在OSCC中的作用值得进一步探索。
微小RNA（MicroRNAs, miRNAs）是长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们参与调节转录后基因表达。许多研究已经证明，miRNA的异常表达可以参与头颈鳞状细胞癌（head and neck squamous carcinoma, HNSC）及其他癌症的发生、发展[9]。miRNA可以调节目标基因的表达水平，诱导mRNA降解或抑制蛋白翻译。在本研究中，探索了ANGPTL4在OSCC中的表达水平及其变化的影响，验证miRNA对ANGPTL4的靶向调控，并确定miRNA对ANGPTL4的靶向调控是否对OSCC的增殖和耐药性存在影响。本研究将对OSCC的诊断、治疗以及预后预测提供一定的参考作用。按照MDAR报告清单呈现以下文章。（可在https://t.cn/A6YN3H95获取）
·方法
组织收集
本研究符合赫尔辛基宣言（Declaration of Helsinki, 2013年修订版）。该研究已得到中山大学孙逸仙纪念医院伦理委员会的批准（No. SYSEC-KY-KS-2021-028）。从中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科获取了36对来自口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者的肿瘤组织（tumor tissues , T）和癌旁组织（paracancerous tissues, P）。所有患者均为原发OSCC，未接受过术前放疗或化疗。所有样本均存储在-80℃下备用。所有患者均已签署知情同意书。使用了癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas, TCGA）数据库来分析头颈鳞状细胞癌（HNSC）和正常组织中ANGPTL4的表达。
细胞培养和处理
购买了来自中国科学院（上海，中国）的HOK、SCC9、UM1、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞系，并使用上述细胞开展实验。所有细胞系均培养于含10％胎牛血清（FBS）（Thermo Fisher，美国）和1％青霉素-链霉素溶液（Thermo Fisher，美国）的DMEM（Thermo Fisher，美国）或DMEM-F12（Thermo Fisher，美国）所配完全培养基，温度37℃，含有5％CO2的细胞培养箱中。其中HOK、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞培养使用DMEM，SCC9和UM1细胞培养使用F12/DMEM。
RNA提取和定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）
总RNA使用TRIzol试剂（TaKaRa，日本）提取，按照制造商说明，使用ABI 9700实时PCR仪（ABI，美国）反转录为cDNA。MicroRNA反转录引物按照茎环法[10]设计。1 µL的cDNA与TB Green® Premix Ex Taq™ II (#RR820B, TaKaRa, Japan）按照制造商的说明，在20 µL反应体积下混合。在Light Cycler 480 II实时PCR系统（Roche，瑞士）中测定mRNA的相对表达，使用统计软件进行统计分析。反应条件如下：94℃ 2 min，94℃ 20秒，58℃ 20秒，72℃ 20秒，共40循环，所有反应均重复3次。根据GAPDH和U6的表达进行标准化后，使用2−ΔΔCt方法计算ANGPTL4和microRNA的相对表达水平。如表S1所示，所有PCR引物均从IGEBIO（广州，中国）购买。
Western blot检测
为提取蛋白，将细胞用预冷PBS洗涤2次，刮取收集细胞，然后在含有1%蛋白酶抑制剂（#CW2200S，CWBIO，中国）的裂解缓冲液（#01408，Beyotime，中国）中裂解。离心后，收集上清液，使用BCA蛋白定量试剂盒（#CW0014S，CWBIO，中国）确定蛋白浓度。稀释并混合上样缓冲液（#CW0027S，CWBIO，中国），并在95℃加热5 min使蛋白变性。按照Beyotime聚丙烯酰胺凝胶试剂盒的说明准备SDS-PAGE凝胶。电泳后（90 V，1.3 h），将蛋白转移到PVDF膜（#P0021S，Beyotime，中国）（250 mA，70 min）。将PVDF膜在含有5％脱脂牛奶和0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中孵育1 h，以封闭蛋白。将一抗ANGPTL4 (#18374-1-AP, Proteintech, USA）和GAPDH (60004-1-Ig, Proteintech, USA）在含有0.1％ Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白抗体稀释液中溶解，稀释比例为1:1000，然后在4℃摇床中孵育16 h（过夜孵育）。将膜在含有0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中洗涤。然后在含有0.1％Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白中，以1:1,000的稀释比例孵育二抗，包括山羊抗小鼠IgG-HRP (#sc-2005, Santa Cruz Biotechnology, USA）和山羊抗兔IgG-HRP (#sc-2004, Santa Cruz Biotechnology, USA)1 h。根据标准流程进行显色，拍照和凝胶图像分析。
更多方法请点击微信链接查看！
MiR-29c-3p和MiR-223-3p通过靶向ANGPTL4调控口腔鳞状细胞癌的增殖和耐药性
背景：本研究旨在确定血管生成素样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）中的表达和功能，并探究miR-29C-3p和miR-223-3p是否可以通过靶向ANGPTL4调控OSCC的增殖和顺铂耐药性。
方法：首先在生物信息学数据库中预测肿瘤中ANGPTL4和microRNAs（miRNAs）的表达，随后通过Western blot和qPCR检测组织和细胞中ANGPTL4和miRNA的蛋白质、mRNA表达水平。通过平板克隆形成、CCK-8实验和IC50确定细胞的增殖和药物敏感性，并使用双荧光素酶报告实验来确定miRNA对ANGPTL4的调控。
结果：ANGPTL4在OSCC组织中较正常组织表达高。敲除ANGPTL4后，OSCC细胞增殖减少，对顺铂的敏感性增加。双荧光素酶报告实验显示，当过表达miR-29c-3p和miR-223-3p后，野生型（wild-type, WT）组的荧光强度减少，而突变型（mutant, MUT）组的荧光强度几乎没有变化。上述结果证明了miRNA的过表达降低了ANGPTL4的蛋白水平，从而影响OSCC细胞增殖和耐药性。
结论：miR-29c-3p和miR-223-3p可以通过靶向ANGPTL4来调控OSCC的细胞增殖和顺铂耐药性。
关键词：口腔鳞状细胞癌（OSCC）；微小RNA（microRNA, miRNA）；血管生成素样蛋白4（ANGPTL4）；增殖；顺铂耐药性。
·前言
口腔癌（Oral cancer）是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，占全球所有恶性肿瘤的1%～2%[1]。因为口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinom, OSCC）易于转移且预后不良，5年总生存率仅为55%[2]。顺铂（Cisplatin）是OSCC术后化疗的一线药物[3]，但OSCC对顺铂化疗的耐药性日益严重[4]。如何有效提高术后化疗的药物敏感性，是OSCC研究中的一个热点和难题。
近期研究表明血管生成样蛋白4（angiopoietin-like protein 4, ANGPTL4）可能参与OSCC的发生，并与OSCC的转移相关[5]，同时ANGPTL4也可能是舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinoma ，TSCC）的重要标志物以及防止TSCC发展和转移的重要治疗靶点[6]。
本课题组前期研究表明，ANGPTL4的下调可以抑制TSCC的迁移和增殖，且ANGPTL4的高表达与TSCC的T分期、淋巴结转移、血管生成和较差的总生存期相关[7]。ANGPTL4基因位于19p131染色体上，包含7个外显子和6个内含子。目前认为，ANGPTL4家族的主要功能是参与物质和能量代谢的调节，但近期许多研究已证实，ANGPTL4在肿瘤进展中也起着重要的调控作用。此外，仍有研究表明ANGPTL4在肝癌和其他癌症中发挥抑癌作用[8]。ANGPTL4可能作为抑癌基因和致癌基因发挥双重功能，但其调节机制仍不清楚。因此，ANGPTL4在OSCC中的作用值得进一步探索。
微小RNA（MicroRNAs, miRNAs）是长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们参与调节转录后基因表达。许多研究已经证明，miRNA的异常表达可以参与头颈鳞状细胞癌（head and neck squamous carcinoma, HNSC）及其他癌症的发生、发展[9]。miRNA可以调节目标基因的表达水平，诱导mRNA降解或抑制蛋白翻译。在本研究中，探索了ANGPTL4在OSCC中的表达水平及其变化的影响，验证miRNA对ANGPTL4的靶向调控，并确定miRNA对ANGPTL4的靶向调控是否对OSCC的增殖和耐药性存在影响。本研究将对OSCC的诊断、治疗以及预后预测提供一定的参考作用。按照MDAR报告清单呈现以下文章。（可在https://t.cn/A6YN3H95获取）
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组织收集
本研究符合赫尔辛基宣言（Declaration of Helsinki, 2013年修订版）。该研究已得到中山大学孙逸仙纪念医院伦理委员会的批准（No. SYSEC-KY-KS-2021-028）。从中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科获取了36对来自口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者的肿瘤组织（tumor tissues , T）和癌旁组织（paracancerous tissues, P）。所有患者均为原发OSCC，未接受过术前放疗或化疗。所有样本均存储在-80℃下备用。所有患者均已签署知情同意书。使用了癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas, TCGA）数据库来分析头颈鳞状细胞癌（HNSC）和正常组织中ANGPTL4的表达。
细胞培养和处理
购买了来自中国科学院（上海，中国）的HOK、SCC9、UM1、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞系，并使用上述细胞开展实验。所有细胞系均培养于含10％胎牛血清（FBS）（Thermo Fisher，美国）和1％青霉素-链霉素溶液（Thermo Fisher，美国）的DMEM（Thermo Fisher，美国）或DMEM-F12（Thermo Fisher，美国）所配完全培养基，温度37℃，含有5％CO2的细胞培养箱中。其中HOK、HSC6、HSC3、CAL27和OSCC3细胞培养使用DMEM，SCC9和UM1细胞培养使用F12/DMEM。
RNA提取和定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）
总RNA使用TRIzol试剂（TaKaRa，日本）提取，按照制造商说明，使用ABI 9700实时PCR仪（ABI，美国）反转录为cDNA。MicroRNA反转录引物按照茎环法[10]设计。1 µL的cDNA与TB Green® Premix Ex Taq™ II (#RR820B, TaKaRa, Japan）按照制造商的说明，在20 µL反应体积下混合。在Light Cycler 480 II实时PCR系统（Roche，瑞士）中测定mRNA的相对表达，使用统计软件进行统计分析。反应条件如下：94℃ 2 min，94℃ 20秒，58℃ 20秒，72℃ 20秒，共40循环，所有反应均重复3次。根据GAPDH和U6的表达进行标准化后，使用2−ΔΔCt方法计算ANGPTL4和microRNA的相对表达水平。如表S1所示，所有PCR引物均从IGEBIO（广州，中国）购买。
Western blot检测
为提取蛋白，将细胞用预冷PBS洗涤2次，刮取收集细胞，然后在含有1%蛋白酶抑制剂（#CW2200S，CWBIO，中国）的裂解缓冲液（#01408，Beyotime，中国）中裂解。离心后，收集上清液，使用BCA蛋白定量试剂盒（#CW0014S，CWBIO，中国）确定蛋白浓度。稀释并混合上样缓冲液（#CW0027S，CWBIO，中国），并在95℃加热5 min使蛋白变性。按照Beyotime聚丙烯酰胺凝胶试剂盒的说明准备SDS-PAGE凝胶。电泳后（90 V，1.3 h），将蛋白转移到PVDF膜（#P0021S，Beyotime，中国）（250 mA，70 min）。将PVDF膜在含有5％脱脂牛奶和0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中孵育1 h，以封闭蛋白。将一抗ANGPTL4 (#18374-1-AP, Proteintech, USA）和GAPDH (60004-1-Ig, Proteintech, USA）在含有0.1％ Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白抗体稀释液中溶解，稀释比例为1:1000，然后在4℃摇床中孵育16 h（过夜孵育）。将膜在含有0.1％ Tween-20的TRIS缓冲盐水中洗涤。然后在含有0.1％Tween-20 Tris缓冲盐水的5％牛血清白蛋白中，以1:1,000的稀释比例孵育二抗，包括山羊抗小鼠IgG-HRP (#sc-2005, Santa Cruz Biotechnology, USA）和山羊抗兔IgG-HRP (#sc-2004, Santa Cruz Biotechnology, USA)1 h。根据标准流程进行显色，拍照和凝胶图像分析。
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#韩振HANJIN[超话]# #韩振视觉中心#
【同款科普】 韩振衣橱 HANJIN‘s closet
▪️ SNAPPY CUDDLE［P2］
- Chilling Stripe Pajama Set (Blue)
▪️ FATE［P4］
- FADED RIBBED HEM DENIM JACKET
MLB［P5］
- 레터링 언스트럭쳐 볼캡 클리블랜드 가디언스 (BGM)
▪️ NOMANUAL［P7］
- CROPPED HAIRY KNIT (MELANGE)
▪️ DTHIRTYONE［P9］
- Big Pocket Denim Shirt Jacket (MEDIUM BLUE)
▪️ BUZZ RICKSONS［P11］
- Reverse Sweat Shirts Coast Guard (NAVY)
▪️ DEUS EX MACHINA［P13］
- No.177 Crew Sweatshirt
cr：owner & tws_closet_
资源 刀刀
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资源 刀刀
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