一 、模板质量问题：
1）模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以泡个电泳看看提取的DNA，PCR阳性样品与阴性样品是否有明显差别。如果确定是这种问题，可以增加模板量试试，但不一定行得通。2）模板里面残留某种试剂成份，可能抑制Taq聚合酶的活性，如果是这种情况，可以用试剂盒把模板再纯化一下，或将模板做个梯度稀释以确定最佳的模板量。3） 为什么跑电泳会出现拖带呢？1. 有可能的因为你的电压调的太高了。电泳跟很多因素有关，其中就有一个是电压，在适当的电压范围内增加是可以加快迁移速率，但是要是超到一个临界值反而有害。你可以适当的调低点看看。2.有时候发现上样量太多的话会有拖带。你看能否回收之后 ，按1:50 或1:100 等稀释后，再当成模板扩一次怎么样。
二 、引物问题
1）样品自身的基因型差异导致扩增失败。也就是说你的引物与某些基因型的样品结合的好，而和另一些基因型结合不好。可以换一对更保守的引物试试。祝顺利！2）普通PCR所用的一对引物中有一个引物加多了，为正常的三倍只要引物特异性比较好，那么不会产生大的影响。如果恰巧是加多的这条引物不是很特异的话，也许会扩出来非特异带。在制备单链探针时候就采取这样的不对称pcr，没关系的三Taq酶处于失活状态。因为活性降低了能出现二聚体。
三、Taq酶处于失活状态。
因为活性降低了能出现二聚体。
四、模板浓度过低。
五、退火温度过高。
有可能，可以做个梯度PCR试一下。
六、循环次数过少或延伸时间过短以致目的基因扩增量不够。
这个可能性不大。
七、dNTP浓度低时PCR产率及特异性均增高，适合于用扩增掺入法标记生物素及放射性元素。
当100μl PCR液中含dNTP各40μmol/L时就足以合成2.6μg的DNA（dNTP消耗一半）,所以,你不小心多加了4倍的量,会很影响PCR结果,即Taq酶活力要降低20～30%，即底物抑制。
八、PCR产物电泳
1.电泳图不清晰，可能电泳缓冲液和制胶缓冲液浓度不准或者脏了吧。换新的电泳缓冲液和制胶缓冲液试试。marker都出问题说明是你的胶的问题，或者电泳操作的问题。2. PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。
毕合生物（www.bihebio.com)提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物
1）模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以泡个电泳看看提取的DNA，PCR阳性样品与阴性样品是否有明显差别。如果确定是这种问题，可以增加模板量试试，但不一定行得通。2）模板里面残留某种试剂成份，可能抑制Taq聚合酶的活性，如果是这种情况，可以用试剂盒把模板再纯化一下，或将模板做个梯度稀释以确定最佳的模板量。3） 为什么跑电泳会出现拖带呢？1. 有可能的因为你的电压调的太高了。电泳跟很多因素有关，其中就有一个是电压，在适当的电压范围内增加是可以加快迁移速率，但是要是超到一个临界值反而有害。你可以适当的调低点看看。2.有时候发现上样量太多的话会有拖带。你看能否回收之后 ，按1:50 或1:100 等稀释后，再当成模板扩一次怎么样。
二 、引物问题
1）样品自身的基因型差异导致扩增失败。也就是说你的引物与某些基因型的样品结合的好，而和另一些基因型结合不好。可以换一对更保守的引物试试。祝顺利！2）普通PCR所用的一对引物中有一个引物加多了，为正常的三倍只要引物特异性比较好，那么不会产生大的影响。如果恰巧是加多的这条引物不是很特异的话，也许会扩出来非特异带。在制备单链探针时候就采取这样的不对称pcr，没关系的三Taq酶处于失活状态。因为活性降低了能出现二聚体。
三、Taq酶处于失活状态。
因为活性降低了能出现二聚体。
四、模板浓度过低。
五、退火温度过高。
有可能，可以做个梯度PCR试一下。
六、循环次数过少或延伸时间过短以致目的基因扩增量不够。
这个可能性不大。
七、dNTP浓度低时PCR产率及特异性均增高，适合于用扩增掺入法标记生物素及放射性元素。
当100μl PCR液中含dNTP各40μmol/L时就足以合成2.6μg的DNA（dNTP消耗一半）,所以,你不小心多加了4倍的量,会很影响PCR结果,即Taq酶活力要降低20～30%，即底物抑制。
八、PCR产物电泳
1.电泳图不清晰，可能电泳缓冲液和制胶缓冲液浓度不准或者脏了吧。换新的电泳缓冲液和制胶缓冲液试试。marker都出问题说明是你的胶的问题，或者电泳操作的问题。2. PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。
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我的老公。是全世界最最好的老公。
他从来没对我说过一句重话，永远支持我的决定，永远告诉我只要我开心就好。
在我们逐渐熟悉后，我曾告诉过他有时候面对叔叔阿姨我也会有点压力，我怕自己表现不好，他坚定的告诉我不要有心理负担，甚至再之后说出过 希望我能把面对他和面对我爸爸妈妈时的小脾气也展现在叔叔阿姨面前。
叔叔阿姨，是特别好的。我的这种心理负担，我都认为是我在侮辱他们，这样说话可能有点严重，但我找不到词语了哈哈哈。
叔叔阿姨的好，不是他们对我这个“儿媳妇“有多好，而是他们对待每个人，无论朋友家人陌生人，都很好，很好。就连对待猫猫狗狗，也很有爱心。所以这样好的人，才会在每个知道我们家和他们家要结为亲家的人口中，都说我们家有福气。
在这样家庭的教育下，我的老公也非常好。或许有时候有点直男，不懂得给我制造浪漫，但只要我想要我想买的，我说一声，老公从不拒绝我。他永远都坚定的站在我这边，以我的开心为主。和我们在一起吃过的姐姐总是拿“爱她如骨”向别人形容我们，嗯！都说肉眼可见我的老公真的是太爱我，都让我不要辜负他。
我们其实没有吵架过，换句话说是他单方面挨骂。我把他欺负过过几次，五一节他哭到我我哄不好，因为他觉得我不爱他了。我们吵架时，我会说很多狠话，举个例子——“想到和你在一起我就觉得恶心，怎么会和你这种人在一起”
好恶毒，实际上还有很多恶毒的话，但我已经改掉，我不想失去他，我也特别爱他。我和老公相处的时候，我是肆无忌惮的，我的地位是至高无上的，我从一开始的不敢对他说重话不好意思收他钱到现在
…嗯，现在我不要他的钱了，从——总薅他的钱 让他给钱给报销到——对他的钱没什么欲望。因为已经到这是我的了夫妻共同财产的地步。
我和我老公，也是全世界最合拍的人。宅家，爱吃，很多地方都很相似。
好吧，感谢我的老公。遇见他，就是让我的人生幸福度到达了巅峰。我想要的不多，刚好我的老公都能够全部满足我。
他从来没对我说过一句重话，永远支持我的决定，永远告诉我只要我开心就好。
在我们逐渐熟悉后，我曾告诉过他有时候面对叔叔阿姨我也会有点压力，我怕自己表现不好，他坚定的告诉我不要有心理负担，甚至再之后说出过 希望我能把面对他和面对我爸爸妈妈时的小脾气也展现在叔叔阿姨面前。
叔叔阿姨，是特别好的。我的这种心理负担，我都认为是我在侮辱他们，这样说话可能有点严重，但我找不到词语了哈哈哈。
叔叔阿姨的好，不是他们对我这个“儿媳妇“有多好，而是他们对待每个人，无论朋友家人陌生人，都很好，很好。就连对待猫猫狗狗，也很有爱心。所以这样好的人，才会在每个知道我们家和他们家要结为亲家的人口中，都说我们家有福气。
在这样家庭的教育下，我的老公也非常好。或许有时候有点直男，不懂得给我制造浪漫，但只要我想要我想买的，我说一声，老公从不拒绝我。他永远都坚定的站在我这边，以我的开心为主。和我们在一起吃过的姐姐总是拿“爱她如骨”向别人形容我们，嗯！都说肉眼可见我的老公真的是太爱我，都让我不要辜负他。
我们其实没有吵架过，换句话说是他单方面挨骂。我把他欺负过过几次，五一节他哭到我我哄不好，因为他觉得我不爱他了。我们吵架时，我会说很多狠话，举个例子——“想到和你在一起我就觉得恶心，怎么会和你这种人在一起”
好恶毒，实际上还有很多恶毒的话，但我已经改掉，我不想失去他，我也特别爱他。我和老公相处的时候，我是肆无忌惮的，我的地位是至高无上的，我从一开始的不敢对他说重话不好意思收他钱到现在
…嗯，现在我不要他的钱了，从——总薅他的钱 让他给钱给报销到——对他的钱没什么欲望。因为已经到这是我的了夫妻共同财产的地步。
我和我老公，也是全世界最合拍的人。宅家，爱吃，很多地方都很相似。
好吧，感谢我的老公。遇见他，就是让我的人生幸福度到达了巅峰。我想要的不多，刚好我的老公都能够全部满足我。
邯郸广平县水利部门真霸道，闸口溢水也不能开闸，下游无奈呀
我们看到位于广平县后固寨东风渠闸口，水从闸口溢水哗哗流，也不能开闸放水吗。农谚说,“足墒灌浆粒饱穗方”。
这句谚语是说,在足墒的情况,有利于小麦灌浆,能够形成大穗,而且籽粒饱满。这句谚语告诉我们,小麦灌浆需要吸收大量的水肥,如果墒情不足,田间发生了干旱,就要及时浇灌浆水。
现在正是小麦灌浆期，下游急需用水，据下游村群众反映，东风渠是附近几十个村的灌溉主要用水，水质好浇地以后玉米小麦都丰产很多，就是东风渠水非常蹊跷，有时候需要水的时候东风渠水干枯了，不需要水时它来水了，有时候是上游水库没有放水有情可原，有时候上游河床水很多，就是不给下游放，下游老百姓很是不理解。
今天我们就看到，广平后固寨闸口溢水也不能开闸，也不知道水利部门咋管理的，现在正是小麦灌浆期，真的好需要水啊。
难道下游就是个受气桶吗。#爆料##河北爆料[超话]##河北身边事#
禁止粘贴复制，转载需经作者同意，非法转载追究法律责任
我们看到位于广平县后固寨东风渠闸口，水从闸口溢水哗哗流，也不能开闸放水吗。农谚说,“足墒灌浆粒饱穗方”。
这句谚语是说,在足墒的情况,有利于小麦灌浆,能够形成大穗,而且籽粒饱满。这句谚语告诉我们,小麦灌浆需要吸收大量的水肥,如果墒情不足,田间发生了干旱,就要及时浇灌浆水。
现在正是小麦灌浆期，下游急需用水，据下游村群众反映，东风渠是附近几十个村的灌溉主要用水，水质好浇地以后玉米小麦都丰产很多，就是东风渠水非常蹊跷，有时候需要水的时候东风渠水干枯了，不需要水时它来水了，有时候是上游水库没有放水有情可原，有时候上游河床水很多，就是不给下游放，下游老百姓很是不理解。
今天我们就看到，广平后固寨闸口溢水也不能开闸，也不知道水利部门咋管理的，现在正是小麦灌浆期，真的好需要水啊。
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