"NCI-H810 人肺癌贴壁细胞系
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
Hs840_T细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:4—1:8传代,每周换液2—3次;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:成纤维细胞;相关细胞有:LIXC002细胞、578T细胞、EoL-1 cell细胞
H1623细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:OCILY7细胞、HO-8910PM细胞、mouse Inner Medullary Collecting Duct-3细胞
CA-OV-3细胞;细胞背景资料:该细胞1976年建系,源自一位54岁白人女性的卵巢腺癌组织。;细胞传代方法:1:3传代,2—3天换液一次;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;相关细胞有:HIT T15细胞、VK2 (E6/E7)细胞、L6565细胞
C3H/10T1/2 clone 8细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:TE 32细胞、PIG1细胞、RPMI-8402细胞
HFTF细胞;细胞背景资料:胚胎;眼;成纤维细胞;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:HeLa细胞、AX-Mel细胞、NCIH1048细胞
细胞冻存复苏材料与方法步骤:常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器,规格有35L和50L两种。使用时要注意以下几点:(1)一般两周需充液氮一次,至少一个月充氮一次。液氮温度达-196℃,使用时注意勿让液氮溅到皮肤上,以免引起冻伤。(2)液氮容器为双层结构,中间为真空层,瓶口有双层焊接处,应防止焊接部裂开。(3)在装入液氮时,要注意缓慢小心,并用厚纸卷筒或特制漏斗作引导,使液氮直达瓶底,如有专用液氮灌注装置则更好。若为初次使用,加液氮时更要缓慢,以免温度骤降而使容器损坏。细胞冻存时常备的材料有:0.25%胰蛋白酶,含10%~20%的血清培养液,DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(121°C蒸气高压消毒),2mL安瓿(或专用细胞冻存管)、吸管、离心管、喷灯、纱布袋(或冻存管架)等。主要操作步骤为:(1)选择处于对数生长期的细胞,在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养 液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶,加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞,使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min,10分钟)。(2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培养基,于4℃预冷15分钟后,逐滴加入已无菌的DMSO或甘油,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,细胞浓度为3×106~1×107/mL之间。(3)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中,安瓿装1~1.5mL在火焰喷灯上封口,封口处要完全封闭,圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧,并标记好细胞名称和冻存日期,同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。(4)将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内;置于液氮容器颈口处存放过夜,次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤:先将安瓿置入4℃冰箱中2~3小时,再移至冰箱冷冻室内3~4小时,再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时,最后沉入液氮中。细胞冻存在液氮中可以长期保存,但为妥善起见,冻存半年后,最好取出一只安瓿细胞复苏培养,观察生长情况,然后再继续冻存。
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:1:2-1:6传代,每周2-3次。
NCI-H810 人肺癌贴壁细胞系
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
CAL-33细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:COLO 678细胞、WM451细胞、hTERT-HPNE细胞
NPA87-1细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:SUM 52PE细胞、Y3细胞、HT 1376细胞
UMR106细胞;细胞背景资料:注射放射性同位素磷(32P)诱导产生的可移植性大鼠骨肉瘤克隆建立了UMR-106细胞株。 细胞对PTH,前列腺素及破骨甾体有响应。 对PTH的响应度,UMR-106比相关细胞株UMR-108(ATCC CRL-1663)要高。 蛋白激酶C的活化抑制ATP诱导的胞内水平的升高。 起始骨肉瘤和克隆株都是University of Sheffield的T.J. Martin建立的。;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:上皮细胞样;相关细胞有:TGW-nu细胞、Panc203细胞、Mouse INsulinoma 6细胞
MMAc.SF细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2传代;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:PIEC细胞、NCIH2452细胞、CDC/EU.HMEC-1细胞
Hs-578T细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:MV411细胞、SGC-996细胞、H-2126细胞
细胞生长特性:贴壁生长
细胞复苏基本方法:1.从液氮罐中取出安剖;有时因安剖未封严,浸入了液氮,取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸,因此应带有防护眼睛和手套。2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上盖并不时摇动,尽快解冻。3.剪开纱布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,净化台上打开盖,用吸管吸出细胞悬液,装入离心管中,再补加10ml培养液,吹打使细胞悬浮。4.低速离心(500~1000转/分)5分钟,取上清后再重复用培养液漂洗、离心。5.加入培养液适当稀释后,再移装入培养瓶中,置温箱培养,次日更换一次培养液后再继续培养。收到T25 flask细胞时,处理方式为:在寄送过程中,为避免起泡造成细胞脱落死亡,T25 flask均加满培养基。请检查flask外观,并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象,若有任何问题,不要打开盖子,请立即通知细胞实验室。将原封之T25 flask静置于37°C,5%CO2培养箱中,使细胞回温至37°C,并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后,于无菌操作箱内取出flask内之培养基(取出之培养基可以再使用),仅留约5-10ml培养基于flask内,依一般培养方式再将细胞置入培养箱中,或细胞已长满盘,则将细胞做传代培养。
细胞形态特性:上皮样
Hs-578T细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:MV411细胞、SGC-996细胞、H-2126细胞
SNU1040细胞;细胞背景资料:结肠癌;男性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:16HBE14o-细胞、PLA-801D细胞、RSC 96细胞
THP 1细胞;细胞背景资料:该细胞从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞,细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白,表达C3R和FcR;可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化;可作为转染宿主。;细胞传代方法:维持细胞浓度在2-4×105-8×105/ml,勿超过1×106/ml;2-3天换液1次。;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:单核细胞;相关细胞有:HUT-226细胞、C2C12细胞、KMS-26细胞
EBNA293细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:4-1:10传代;每周2次。;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞样;相关细胞有:HSC-I细胞、OV-1063细胞、MiaPaCa2细胞
NCIH748细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:3-4天换液1次。;细胞生长特性:悬浮生长 ;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:A375S2细胞、Central Adrenergic TH-expressing a细胞、SUDHL-10细胞
HEK/EBNA细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:4-1:10传代;每周2次。;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞样;相关细胞有:K 562细胞、HT3细胞、NCI-H1693细胞
HK2细胞;细胞背景资料:该细胞属源于正常肾的近曲小管细胞,通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2,Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317,最后将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性,但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。;细胞传代方法:1:4传代;2-3天换液1次;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;相关细胞有:OCI-Ly 10细胞、2E8细胞、H-4-II-E细胞
NCI-H810 人肺癌贴壁细胞系
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法:在解冻冻存细胞时,发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题,究竟是什么原因导致,我们该怎么进行解决?以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题,总结的一些解决方案!出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下:1)解冻过程中细胞裂解,推荐的解决方案:可预期到一定量的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够高,考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升;2)解冻过程中的问题,推荐的解决方案:在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物,保存时间为1-5天,但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养;3)对冷冻液过敏,推荐的解决方案:A.完全或部分更换培养基,减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物,取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的最佳条件在对数期;4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄,推荐的解决方案:解冻最近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长,存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
Det 562细胞;细胞背景资料:器官:咽头 疾病:癌 取材转移灶:胸水;细胞传代方法:1:2-1:4传代,2-3天换液1次。;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞;相关细胞有:Loucy细胞、G402细胞、NCI-H1882细胞
K-562细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:GFP-Olig2细胞、Colo205细胞、H3255细胞
MHH-CALL2细胞;细胞背景资料:急性B淋巴细胞白血病;女性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:D-283MED细胞、W133细胞、BE(2)-C细胞
LAPC4细胞;细胞背景资料:前列腺癌;淋巴结转移;男性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:EVSAT细胞、SNU886细胞、Bovine ENDometrial cells细胞
NCI-841细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:3—1:5传代,;细胞生长特性:混合型生长;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:AML-2细胞、Rat1细胞、LS180细胞
SACC83细胞;细胞背景资料:涎腺腺样囊性癌;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:BMSCs(mBMSCs)细胞、MLMA细胞、SF17细胞
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"NCI-H774 人小细胞肺癌贴壁细胞系
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
VeroE6细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:HANK细胞、SF 767细胞、A-20细胞
OCI-AML-4细胞;细胞背景资料:急性髓系白血病;女性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:SK-N-DZ细胞、MC9细胞、SW 837细胞
Hs611T细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:混合型;细胞形态特性:淋巴母细胞样;相关细胞有:B16-F0细胞、MFD-1细胞、NCIH1385细胞
SSP-25细胞;细胞背景资料:肝内胆管癌;女性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:NIH 3T3细胞、MDCK细胞、MCF10-A细胞
BGC823细胞;细胞背景资料:建自一位62岁的胃癌患者;细胞传代方法:1:3传代,2-3天换液一次;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;相关细胞有:KM12SM细胞、Hep G2/C3A细胞、MLMA细胞
细胞复苏相关注意事项:1.取细胞的过程中注意带好防冻手套,护目镜。此项尤为重要,细胞冻存管可能漏入液氮,解冻时冻存管中的气温急剧上升,可导致爆炸。2.冻存液的问题:冻存液的配置已是常识,在这里不作详述,但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全无毒副作用,在常温下,二甲基亚砜对细胞的毒副作较大,因此,必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢,会造成细胞的损伤,二甲基亚砜(DMSO)最好选择进口产品。3.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高,注意加入少量培养液可稀释其浓度,以减少对细胞的损伤。4.离心问题:目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养,第二天换液。因为离心的目的是两个,去除DMSO,去除死细胞,这个是标准流程,但对一般人来说,把握不好离心转速和时间,转的不够活细胞沉底的少,细胞就全被扔掉了,转过了活细胞会受压过大,死亡。此外在操作过程中容易污染,所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO),DMSO对细胞有一定的毒副作用,所以须将离心后的液体前倒净,且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏,结果无异常。5.细胞贴壁少的问题:教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15ml培养液,而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。6.复苏细胞分装的问题:试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中,分装过多,细胞浓度过低,不利于细胞的贴壁。7.加培养基的量放入问题:这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度,从如果你加培养基的太少,那么DMSO的浓度就会比较大,就会影响细胞生长,从以前的资料来看,DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响,还有一个说法是1%。所以如果你的冻存液的浓度是10%DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:每周换液2次。
NCI-H774 人小细胞肺癌贴壁细胞系
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
TALL1细胞;细胞背景资料:该细胞源于一名复发T-ALL(急性T淋巴细胞性白血病)的儿童的外周血;具有很强的细胞毒性,体内体外实验中都能破坏肿瘤细胞;IL-2可使细胞更好地生长;α/β TCR阳性,γ/δ TCR阴性;可产生IFNγ、TNF-α和GM-CSF。;细胞传代方法:维持细胞密度在4×105-1×106 cells/ml之间,2-3天换液1次 ;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:淋巴母细胞;相关细胞有:VERO76细胞、293-H细胞、SHZ-88细胞
Lewis lung carcinoma line 1细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:MDA157细胞、IPEC-1细胞、SNU119细胞
G292细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:Nb 2细胞、HS940细胞、Lymph Node Carcinoma of the prostate细胞
Tn-5B1-4细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:OSC-19细胞、MNNG-HOS细胞、HL-60 Clone 15细胞
Hs294细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:4传代,2-3天换液1次。;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:混合星状和多边形;相关细胞有:HIT细胞、COLO 201细胞、MDA-MB435细胞
细胞生长特性:悬浮生长
细胞复苏基本方法:1.从液氮罐中取出安剖;有时因安剖未封严,浸入了液氮,取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸,因此应带有防护眼睛和手套。2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上盖并不时摇动,尽快解冻。3.剪开纱布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,净化台上打开盖,用吸管吸出细胞悬液,装入离心管中,再补加10ml培养液,吹打使细胞悬浮。4.低速离心(500~1000转/分)5分钟,取上清后再重复用培养液漂洗、离心。5.加入培养液适当稀释后,再移装入培养瓶中,置温箱培养,次日更换一次培养液后再继续培养。收到T25 flask细胞时,处理方式为:在寄送过程中,为避免起泡造成细胞脱落死亡,T25 flask均加满培养基。请检查flask外观,并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象,若有任何问题,不要打开盖子,请立即通知细胞实验室。将原封之T25 flask静置于37°C,5%CO2培养箱中,使细胞回温至37°C,并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后,于无菌操作箱内取出flask内之培养基(取出之培养基可以再使用),仅留约5-10ml培养基于flask内,依一般培养方式再将细胞置入培养箱中,或细胞已长满盘,则将细胞做传代培养。
细胞形态特性:详见细胞说明书
UO31细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:3-1:6传代;2-3天换液1次。;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;相关细胞有:MHH-CALL-2细胞、MV-4:11细胞、293 HEK细胞
Ly8细胞;细胞背景资料:弥漫大B淋巴瘤;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:Vx-2细胞、LU451细胞、CWR22-Rv1细胞
SP2/0 Ag-14细胞;细胞背景资料:该细胞是由绵羊红细胞免疫的BALB/c小鼠脾细胞和P3X63Ag8骨髓瘤细胞融合得到的。该细胞不分泌免疫球蛋白,对20μg/ml的8-氮鸟嘌呤有抗性,对HAT比较敏感;该细胞可以作为细胞融合时的B细胞组分用于制备杂交瘤;鼠痘病毒阴性。;细胞传代方法:1:2传代;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:淋巴母细胞样;圆形;相关细胞有:Cloudman S91 melanoma细胞、KTA7细胞、Psi-2-DAP细胞
UM-UC14细胞;细胞背景资料:肾癌;男性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:NCIH510细胞、OVCAR 8细胞、Psi2-DAP细胞
VMRCRCZ细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:6传代;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞;相关细胞有:BE(2)-C细胞、SL1细胞、NU-GC-3细胞
50.B1细胞;细胞背景资料:角膜上皮;Ad12-SV40;男性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:TOV21G细胞、WIL2 S细胞、SW579细胞
MB157细胞;细胞背景资料:该细胞源自一位患有乳腺髓样癌的44岁黑人女性,表达WNT7B癌基因,细胞与细胞边界处有细胞桥粒、微绒毛、张力细丝。;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;相关细胞有:SNU-1细胞、18G3.cl 1细胞、SK-ChA-1细胞
NCI-H774 人小细胞肺癌贴壁细胞系
体内细胞培养及其操作步骤:【瘤细胞悬液接种】1)无菌选取生长良好(有光泽,淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞;2)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨,经80~100目筛网过滤成细胞悬液;3)培养细胞应用PBS洗两遍;4)计数并调整细胞浓度至107~108/ml;5)常规消毒后,于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(0.1ml/部位,>106细胞)。初次接种成功率低,细胞数尽可能多一些;6)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期,以后随着传代潜伏期逐渐缩短,最后固定为一个相对稳定的时间。【腹水瘤的建立与腹水瘤的接种】将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤细胞,将这种腹水反复传代,即可成为腹水瘤。初次传代时,腹水常呈血性(含大量红细胞),反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。1)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤,进行细胞计数;2)消毒动物,左下腹穿刺接种106腹水瘤细胞;3)接种腹水瘤细胞后约7~12d,待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9号针头抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml;4)抽取的腹水经3000rpm离心15min,收集上清,分装冻存备用。
HK2细胞;细胞背景资料:该细胞属源于正常肾的近曲小管细胞,通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2,Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317,最后将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性,但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。;细胞传代方法:1:4传代;2-3天换液1次;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;相关细胞有:OCI-Ly 10细胞、2E8细胞、H-4-II-E细胞
HEM细胞;细胞背景资料:黑色素细胞;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:SW 1116细胞、KASUMI6细胞、NCI-446细胞
DI-TNC1细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2传代;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:成纤维母细胞样;相关细胞有:SN12CPM6细胞、Baby Hamster Kidney from litter No. 21细胞、hEM15A细胞
KTC-1细胞;细胞背景资料:甲状腺乳头状癌;男性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:RPMI 8226细胞、UMC11细胞、A 375细胞
TMK-1细胞;细胞背景资料:胃癌;男性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:MGHU3细胞、SF 295细胞、BOWES细胞
SNK-6细胞;细胞背景资料:NK/T细胞淋巴瘤;男性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:Turbot Embryonic Cell line细胞、HepaRG细胞、HL1细胞
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"DU4475 人乳腺上皮贴壁细胞系
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
EAC细胞;细胞背景资料:艾氏腹水瘤;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:半贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:U-373 MG细胞、Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma细胞、Swiss-3T3细胞
KCL22S细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2传代;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10细胞、SHG-44细胞、SK UT 1细胞
P30 OHK细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:10^5 cells/60mm dish;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:淋巴母细胞;相关细胞有:Ly1细胞、M-1细胞、SK-MEL-31细胞
SupB15WT细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2传代。3天内可长满。;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:淋巴母细胞;相关细胞有:H-1944细胞、IGROV 1细胞、ME 180细胞
HCC2218细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:每周换液2—3次;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:上皮样;相关细胞有:Hs 819.T细胞、rHSC-99细胞、HCC-78细胞
贴壁消化难题:1,先用PBS 把细胞洗两遍,使瓶内没有血清了,减少对胰酶的中和,然后用新配的0.25%的胰酶加入3ml左右,放在37度,然后可以在细胞有些消化下来时,拿着瓶口,运用手腕的力量轻轻震荡瓶内液体,这样细胞很快就下来了,还不需要吹打,分散也均匀;2,成团、絮状:消化液里加入edta可以减少细胞成团的现象,血清可以终止胰酶的作用,如果是进口血清的话也能终止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉,也可以不倒,直接加血清终止,如果消化液中加入了edta的话,就要将消化液倒干净,如果细胞贴壁要求不是很严格的话,一般不需要进行离心。鼻咽癌细胞的贴壁能力很强,用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化12~15min。用PBS洗涤时要洗净残余的培养基,加入胰酶后在培养箱中消化(避免细胞室温下受损以及在此温度时胰酶活性最强)至细胞收缩变圆(可显微镜下观察)且有少许细胞脱落(有流下来的趋势),随后立即弃去胰酶(如果脱落的细胞很多且需要大量细胞实验,则不能弃去胰酶),加入培养基仔细吹打(不能用无血清培养基或者PBS替代,否则细胞聚集成团块或絮状)。一般我都离心一次弃去上清(去除残留的胰酶及漂浮的死细胞或细胞碎片);消化过度:马上用培养基中和,用吸管吹打细胞,收集全部的细胞到以无菌的离心管中800RPM 3分钟。弃上清,用全培重悬,换新的培养瓶继续培养,状态不好的细胞在培养的过程中会死亡脱落,在换液的时候可以清除掉!
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:每周换液2—3次
DU4475 人乳腺上皮贴壁细胞系
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
SK-Mel 2细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:3-1:6传代,2-3天换液1次。;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:多边形的;相关细胞有:GMK,BSC-1细胞、YAC细胞、Tb 1 Lu细胞
MLMA细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2传代;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:淋巴母细胞;相关细胞有:NCI-H727细胞、COLO-16细胞、SW1417细胞
Wien133细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:CHL-CL-11细胞、BALL1细胞、LTEP-a2细胞
EoL-1细胞;细胞背景资料:急性髓系白血病;男性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:MEG-01细胞、U-138-MG细胞、C-Li-7细胞
SUPB15细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2传代。3天内可长满。;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:淋巴母细胞;相关细胞有:SN12C-PM6细胞、HRPEpiC细胞、A 2058细胞
细胞生长特性:悬浮,多细胞聚集
细胞培养中支原体污染的经验分享:支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之间,呈高度多形性,有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞,也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色,用姬姆萨染色很浅,革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长,营养要求比细菌高。细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到63%,支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达,又不能通过可视法对其进行检测,而且它对细胞的生长率影响较小,不易引起注意。国内外研究表明,95%以上是以下四种支原体:口腔支原体(M.orale)、精酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii),为牛源性。以上是最常见的污染细胞培养的支原体菌群,但能够污染细胞的支原体种类是很多的,国外调查证明,大约有二十多种支原体能污染细胞,有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。组织细胞培养工作中,主要从以下几个方面来预防支原体的污染:控制环境污染;严格实验操作;细胞培养基和器材要保证无菌;在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后,特别是重要的细胞株,有必要清除支原体,常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体最突出的结构特征是没有细胞壁,一般来讲,对作用于细胞壁生物合成的抗生素,如万古霉素等完全不敏感;对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体最有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些喹诺酮;其他类抗生素如基糖苷类、霉素对支原体有较小抑制作用,所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。
细胞形态特性:上皮细胞样
SUPB15细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2传代。3天内可长满。;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:淋巴母细胞;相关细胞有:SN12C-PM6细胞、HRPEpiC细胞、A 2058细胞
UMC-11细胞;细胞背景资料:肺肿瘤;男性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:Human Embryo Kidney-2细胞、TSCCa细胞、SNU-620细胞
MHHCALL2细胞;细胞背景资料:急性B淋巴细胞白血病;女性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:SK-MEL-24细胞、Mouse Forestomach Carcinoma细胞、WM35细胞
MDA MB 436细胞;细胞背景资料:该细胞源于一名43岁患有乳腺腺癌女性的胸腔积液。;细胞传代方法:1:2传代,每周换液2—3次;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:多角形;相关细胞有:U266-B1细胞、EAC-E2G8细胞、KM12-SM细胞
Transformed Human Liver Epithelial-3细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:消化3-5分钟。1:2。3天内可长满;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;相关细胞有:NRCC细胞、TE-1细胞、S.B.细胞
MGH-U1 (EJ)细胞;细胞背景资料:膀胱癌;女性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:Lewis lung carcinoma line 1细胞、HBL-100细胞、H1436细胞
GM17219细胞;细胞背景资料:B淋巴细胞;EBV转化;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:SUM159细胞、BT483细胞、Hs-852-T细胞
DU4475 人乳腺上皮贴壁细胞系
【细胞培养中支原体、黑蛟虫、真菌的污染情况总结】支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去。用泰乐菌素,兽用支原体病的药,但可用于细胞培养,无任何不良反应。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度;黑蛟虫:可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率;真菌:一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。
M-NFS-60细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:3传代;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞样;相关细胞有:ACC-2细胞、EOL1细胞、Caco-2 BBe细胞
TE7细胞;细胞背景资料:食管鳞癌;男性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:NCI-H1417细胞、CPA 47细胞、UM-UC-14细胞
NCIH1694细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:3-4天换液1次。;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:聚团悬浮;相关细胞有:GC1-SPG细胞、S3-HeLa细胞、Hs 636 T细胞
HCC-1500细胞;细胞背景资料:详见相关文献介绍;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每3-5天换液;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;相关细胞有:SKMES1细胞、Nb-2细胞、SW-1783细胞
SNK-1细胞;细胞背景资料:NK/T细胞淋巴瘤;女性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:CCD 966SK细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-453细胞、H-2085细胞
OCI-Ly19细胞;细胞背景资料:弥漫大B淋巴瘤;女性;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;相关细胞有:T84细胞、K-1735细胞、TNC-1B12B4细胞
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