【方案参考 | 微生物蛋白纯化实验室搭建模版】
一级学科：生物学
二级学科：生物化学、微生物学
简述：方案包含重组载体构建、蛋白纯化、蛋白性质分析等3大部分3个流程，涉及21种设备。
核心设备：高压破碎仪、蛋白纯化仪、高速冷冻离心机、紫外可见分光光度计、高效液相色谱
关键词：重组载体构建、蛋白纯化、亲和层析、疏水层析、离子交换层析、尺寸排阻层析、生理生化性质鉴定。
基本概念：重组载体构建、蛋白纯化、亲和层析、疏水层析、离子交换层析、尺寸排阻层析、蛋白性质分析。
实验流程：
蛋白纯化主要包括三个步骤：1）重组载体的构建；2）蛋白的上柱纯化；3）蛋白性质分析。
1、重组载体的构建
蛋白纯化主要分为异源表达纯化和野生菌纯化。其中异源表达纯化在蛋白上柱纯化之前需要构建目的基因的重组载体，并且在载体构建过程中给目的基因添加特殊的标签，如His-Tag、GST、Strep等，最终通过相应的亲和层析柱获得目的蛋白.此方法为蛋白纯化最常用的方法。
而野生菌纯化则是通过离子交换层析、疏水层析、尺寸排阻层析（凝胶过滤）等方法原理，从野生菌中直接获得某种蛋白的蛋白纯化方法。
其中重组载体的构建主要由分为三个步骤：1）目的基因片段的获得；2）酶切及切胶回收；3）酶连、转化及保存等
1.1目的基因片段的获得（对应编号1-1）
选用合适的质粒作为载体，并选择合适的双酶切位点。
以相应菌株的基因组为模板，设计相应引物，利用PCR仪对目的基因进行扩增，获得大量的目的基因片段。
1.2酶切及切胶回收（对应编号1-2）
将PCR获得的目的基因片段和提取的质粒同时进行双酶切处理，该过程需要在恒温水浴槽中37℃中酶切40 min。
对酶切之后的反应液利用水平电泳仪进行TAE琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统下切下目的片段及酶切后的载体片段，用DNA纯化回收试剂盒进行纯化回收，该回收过程需要多次用到小型高速离心机。
1.3酶连、转化及保存（对应编号1-3、1-4）
用T4 DNA Ligase对切胶回收后的目的片段和载体质粒进行酶连实验，该过程需要在恒温水浴槽中25℃中酶连30 min左右，最终将酶连产物通过转化转入克隆宿主。
转化的方法有两种，第一种方法是通过电转化法，直接通过电转仪将重组后的质粒转入克隆宿主，省时高效；另一种方法是将连接液加入到感受态细胞中，冰浴30 min，之后37℃水浴5 min，冰上放置3 min，之后超净台中加入500 μL LB培养基，37℃振荡培养箱振荡培养约1 h。
将上述培养液在超净工作台进行平板涂布，过夜培养观察平板菌落生长情况。
通过PCR验证与测序挑选正确的转化子，并将正确的转化子转入到表达宿主中，经PCR验证后将含有重组质粒的表达宿主甘油处理，并保存在超低温冰箱的-80℃环境中。
2、蛋白的上柱纯化
蛋白的上柱纯化主要分为四个步骤组成：1）目的细胞的培养；2）目的细胞的破碎及离心；3）目的蛋白上柱纯化及浓缩脱盐等。
2.1 目的细胞的培养（对应编号2-1）
对于异源表达纯化来说，需对上述含有重组质粒的表达宿主进行诱导表达。
一般方法如下（假设表达宿主为BL21（DE3），载体为pET28b(+)）：将测序成功的含有重组质粒的表达宿主在超净工作台接种至LB培养基，在大容量恒温振荡器中37℃、170 rpm培养至OD值达到0.8-1.0时，加入诱导剂IPTG（终浓度一般为0.5 mM），降低温度和转速至30℃、130 rpm，过夜诱导后利用大容量高速冷冻离心机收菌，并用pH 7.0的50 mM磷酸钠清洗两遍，-20℃保存细胞。
而对于野生菌纯化来说，只需在该菌株最适生长条件之下培养获得大量菌体，以备下一步试验所需。
该过程中培养基以及以下步骤所需的缓冲液均需要pH计来调剂pH。如果所需目的细胞为厌氧细胞，需用厌氧手套箱进行培养基的配制。
2.2 目的细胞的破碎及离心（对应编号2-2、2-3）
将目的细胞用缓冲液重悬，并用高压细胞破碎仪破碎目的细胞，如果是革兰氏染色阳性的细胞，需在菌悬液中添加溶菌酶，并在37℃下恒温水浴30 min。
细胞破碎液用高速冷冻离心机在35000 ×g、4℃下离心30 min，将上清用0.22 μm滤头过滤，最终获得上清粗酶液。
对于膜蛋白组分，需用超速离心机进行离心。
2.3 目的蛋白上柱纯化（对应编号2-4、2-5）
对于异源表达纯化来说，将上述步骤制备的粗酶液通过蠕动泵上样到以亲和层析为主的蛋白纯化柱上（此处以常用的His-Tag和Ni柱为例）。
将上样完成的Ni柱利用蛋白纯化仪进行咪唑梯度蛋白洗脱，并将每个梯度的样品分别收取，并利用浓缩管和高速冷冻离心机对蛋白进行浓缩脱盐，用于目的蛋白的验证和表征。
相比异源表达纯化，野生菌纯化要复杂得多。首先需知道所要纯化蛋白的基本性质，比如所催化的基础反应。
利用此反应，依据不同的纯化原理来进一步捕获和纯化蛋白，该过程需要蛋白纯化仪的支持。
如首先通过蠕动泵上样离子交换层析柱（通常用Q柱或DEAE柱），该层析柱通过逐步提高盐浓度洗脱蛋白，依据目的蛋白所催化的基础反应捕获蛋白，该过程通常需要用到电脑实时监测的双光束紫外可见分光光度计。
当监测到目的蛋白所在梯度后，对该梯度进行蛋白浓缩，并将缓冲液换成疏水层析柱（一般为苯基柱）的缓冲液。
将上述样品通过蠕动泵上样苯基柱，该层析柱需要逐步降低盐浓度来洗脱蛋白，依据目的蛋白所催化的基础反应进一步蛋白，并将目的蛋白梯度浓缩脱盐。
再将上一步样品利用尺寸排阻层析柱（分子筛）进一步纯化蛋白样品，最终获得较纯的蛋白样品，用于蛋白生理生化性质的分析，还可通过分子筛测定蛋白的分子量，并预测蛋白亚基的聚合形式。
3、蛋白性质分析
对于蛋白的生理生化性质的测定，主要包括以下几个方面：1）蛋白浓度测定及SDS-PAGE电泳；2）催化性质及其产物测定；3）辅基测定；4）蛋白结构解析等。
3.1 蛋白浓度测定及SDS-PAGE电泳（对应编号3-1）
对于蛋白浓度的测定，一般以牛血清白蛋白为标准品，用Bradford法进行测定，该测定须使用紫外可见分光光度计。
SDS-PAGE电泳首先对蛋白样品进行处理，选择合适浓度的蛋白样品，加入蛋白loading，100℃金属浴10 min，经小型高速离心机离心后，在垂直电泳槽中点样，最终完成蛋白电泳。
3.2 催化性质及其产物测定（对应编号3-2、3-4）
对于目的蛋白催化性质的测定，一般可使用电脑实时监测的双光束紫外可见分光光度计来完成，通过监测底物的消耗或产物的生成监测反应进行，并可通过计算酶活曲线的斜率计算比酶活。
有的反应因底物产物较为相似，无法用紫外可见分光光度计分开，这时需要高效液相色谱（HPLC）来监测反应的进行，一般通过监测单位时间内产物的生成来计算比酶活。
3.3 辅基测定（对应编号3-3）
对于蛋白辅基的测定，测定方法多种多样。
如Fe含量的测定，通常使用 Ferene法，该方法需用到紫外可见分光光度计和金属浴。
对于蛋白中其他离子的鉴定与定量如Zn、Mo、W和S等，其最便捷高效的方法就是使用原子吸收光谱进行测定。
而对于其他辅基如FAD、FMN等，其最简便的鉴别定量方法是利用HPLC进行监测。
3.3 蛋白结构解析（对应编号3-5、3-6）
目前对于蛋白质二级结构的研究，其主要手段之一是利用圆二色光谱进行鉴定，该方法广泛应用于蛋白质的构象研究中。
而对于蛋白质三级结构的解析，主要的方法包括X-射线衍射法、核磁共振和冷冻电镜。
其中X-射线衍射法需要先对蛋白进行结晶，然后利用X-射线衍射仪进行结构分析，因此适用于较小分子蛋白质的结构解析，因为大分子蛋白很难结晶，该方法同样很难捕捉蛋白质动态变化过程；
核磁共振依据强磁场中原子和对射频辐射的吸收作用，需要用到核磁共振波谱仪进行研究，该方法可以捕捉蛋白质分子动力学，但是仅适用于小分子蛋白；
冷冻电镜是近年来兴起的蛋白质结构测定方法，难以结晶的膜蛋白以及生物大分子复合体可用此方法进行解析。#木木西里# #实验方案# #微生物蛋白#
一级学科：生物学
二级学科：生物化学、微生物学
简述：方案包含重组载体构建、蛋白纯化、蛋白性质分析等3大部分3个流程，涉及21种设备。
核心设备：高压破碎仪、蛋白纯化仪、高速冷冻离心机、紫外可见分光光度计、高效液相色谱
关键词：重组载体构建、蛋白纯化、亲和层析、疏水层析、离子交换层析、尺寸排阻层析、生理生化性质鉴定。
基本概念：重组载体构建、蛋白纯化、亲和层析、疏水层析、离子交换层析、尺寸排阻层析、蛋白性质分析。
实验流程：
蛋白纯化主要包括三个步骤：1）重组载体的构建；2）蛋白的上柱纯化；3）蛋白性质分析。
1、重组载体的构建
蛋白纯化主要分为异源表达纯化和野生菌纯化。其中异源表达纯化在蛋白上柱纯化之前需要构建目的基因的重组载体，并且在载体构建过程中给目的基因添加特殊的标签，如His-Tag、GST、Strep等，最终通过相应的亲和层析柱获得目的蛋白.此方法为蛋白纯化最常用的方法。
而野生菌纯化则是通过离子交换层析、疏水层析、尺寸排阻层析（凝胶过滤）等方法原理，从野生菌中直接获得某种蛋白的蛋白纯化方法。
其中重组载体的构建主要由分为三个步骤：1）目的基因片段的获得；2）酶切及切胶回收；3）酶连、转化及保存等
1.1目的基因片段的获得（对应编号1-1）
选用合适的质粒作为载体，并选择合适的双酶切位点。
以相应菌株的基因组为模板，设计相应引物，利用PCR仪对目的基因进行扩增，获得大量的目的基因片段。
1.2酶切及切胶回收（对应编号1-2）
将PCR获得的目的基因片段和提取的质粒同时进行双酶切处理，该过程需要在恒温水浴槽中37℃中酶切40 min。
对酶切之后的反应液利用水平电泳仪进行TAE琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统下切下目的片段及酶切后的载体片段，用DNA纯化回收试剂盒进行纯化回收，该回收过程需要多次用到小型高速离心机。
1.3酶连、转化及保存（对应编号1-3、1-4）
用T4 DNA Ligase对切胶回收后的目的片段和载体质粒进行酶连实验，该过程需要在恒温水浴槽中25℃中酶连30 min左右，最终将酶连产物通过转化转入克隆宿主。
转化的方法有两种，第一种方法是通过电转化法，直接通过电转仪将重组后的质粒转入克隆宿主，省时高效；另一种方法是将连接液加入到感受态细胞中，冰浴30 min，之后37℃水浴5 min，冰上放置3 min，之后超净台中加入500 μL LB培养基，37℃振荡培养箱振荡培养约1 h。
将上述培养液在超净工作台进行平板涂布，过夜培养观察平板菌落生长情况。
通过PCR验证与测序挑选正确的转化子，并将正确的转化子转入到表达宿主中，经PCR验证后将含有重组质粒的表达宿主甘油处理，并保存在超低温冰箱的-80℃环境中。
2、蛋白的上柱纯化
蛋白的上柱纯化主要分为四个步骤组成：1）目的细胞的培养；2）目的细胞的破碎及离心；3）目的蛋白上柱纯化及浓缩脱盐等。
2.1 目的细胞的培养（对应编号2-1）
对于异源表达纯化来说，需对上述含有重组质粒的表达宿主进行诱导表达。
一般方法如下（假设表达宿主为BL21（DE3），载体为pET28b(+)）：将测序成功的含有重组质粒的表达宿主在超净工作台接种至LB培养基，在大容量恒温振荡器中37℃、170 rpm培养至OD值达到0.8-1.0时，加入诱导剂IPTG（终浓度一般为0.5 mM），降低温度和转速至30℃、130 rpm，过夜诱导后利用大容量高速冷冻离心机收菌，并用pH 7.0的50 mM磷酸钠清洗两遍，-20℃保存细胞。
而对于野生菌纯化来说，只需在该菌株最适生长条件之下培养获得大量菌体，以备下一步试验所需。
该过程中培养基以及以下步骤所需的缓冲液均需要pH计来调剂pH。如果所需目的细胞为厌氧细胞，需用厌氧手套箱进行培养基的配制。
2.2 目的细胞的破碎及离心（对应编号2-2、2-3）
将目的细胞用缓冲液重悬，并用高压细胞破碎仪破碎目的细胞，如果是革兰氏染色阳性的细胞，需在菌悬液中添加溶菌酶，并在37℃下恒温水浴30 min。
细胞破碎液用高速冷冻离心机在35000 ×g、4℃下离心30 min，将上清用0.22 μm滤头过滤，最终获得上清粗酶液。
对于膜蛋白组分，需用超速离心机进行离心。
2.3 目的蛋白上柱纯化（对应编号2-4、2-5）
对于异源表达纯化来说，将上述步骤制备的粗酶液通过蠕动泵上样到以亲和层析为主的蛋白纯化柱上（此处以常用的His-Tag和Ni柱为例）。
将上样完成的Ni柱利用蛋白纯化仪进行咪唑梯度蛋白洗脱，并将每个梯度的样品分别收取，并利用浓缩管和高速冷冻离心机对蛋白进行浓缩脱盐，用于目的蛋白的验证和表征。
相比异源表达纯化，野生菌纯化要复杂得多。首先需知道所要纯化蛋白的基本性质，比如所催化的基础反应。
利用此反应，依据不同的纯化原理来进一步捕获和纯化蛋白，该过程需要蛋白纯化仪的支持。
如首先通过蠕动泵上样离子交换层析柱（通常用Q柱或DEAE柱），该层析柱通过逐步提高盐浓度洗脱蛋白，依据目的蛋白所催化的基础反应捕获蛋白，该过程通常需要用到电脑实时监测的双光束紫外可见分光光度计。
当监测到目的蛋白所在梯度后，对该梯度进行蛋白浓缩，并将缓冲液换成疏水层析柱（一般为苯基柱）的缓冲液。
将上述样品通过蠕动泵上样苯基柱，该层析柱需要逐步降低盐浓度来洗脱蛋白，依据目的蛋白所催化的基础反应进一步蛋白，并将目的蛋白梯度浓缩脱盐。
再将上一步样品利用尺寸排阻层析柱（分子筛）进一步纯化蛋白样品，最终获得较纯的蛋白样品，用于蛋白生理生化性质的分析，还可通过分子筛测定蛋白的分子量，并预测蛋白亚基的聚合形式。
3、蛋白性质分析
对于蛋白的生理生化性质的测定，主要包括以下几个方面：1）蛋白浓度测定及SDS-PAGE电泳；2）催化性质及其产物测定；3）辅基测定；4）蛋白结构解析等。
3.1 蛋白浓度测定及SDS-PAGE电泳（对应编号3-1）
对于蛋白浓度的测定，一般以牛血清白蛋白为标准品，用Bradford法进行测定，该测定须使用紫外可见分光光度计。
SDS-PAGE电泳首先对蛋白样品进行处理，选择合适浓度的蛋白样品，加入蛋白loading，100℃金属浴10 min，经小型高速离心机离心后，在垂直电泳槽中点样，最终完成蛋白电泳。
3.2 催化性质及其产物测定（对应编号3-2、3-4）
对于目的蛋白催化性质的测定，一般可使用电脑实时监测的双光束紫外可见分光光度计来完成，通过监测底物的消耗或产物的生成监测反应进行，并可通过计算酶活曲线的斜率计算比酶活。
有的反应因底物产物较为相似，无法用紫外可见分光光度计分开，这时需要高效液相色谱（HPLC）来监测反应的进行，一般通过监测单位时间内产物的生成来计算比酶活。
3.3 辅基测定（对应编号3-3）
对于蛋白辅基的测定，测定方法多种多样。
如Fe含量的测定，通常使用 Ferene法，该方法需用到紫外可见分光光度计和金属浴。
对于蛋白中其他离子的鉴定与定量如Zn、Mo、W和S等，其最便捷高效的方法就是使用原子吸收光谱进行测定。
而对于其他辅基如FAD、FMN等，其最简便的鉴别定量方法是利用HPLC进行监测。
3.3 蛋白结构解析（对应编号3-5、3-6）
目前对于蛋白质二级结构的研究，其主要手段之一是利用圆二色光谱进行鉴定，该方法广泛应用于蛋白质的构象研究中。
而对于蛋白质三级结构的解析，主要的方法包括X-射线衍射法、核磁共振和冷冻电镜。
其中X-射线衍射法需要先对蛋白进行结晶，然后利用X-射线衍射仪进行结构分析，因此适用于较小分子蛋白质的结构解析，因为大分子蛋白很难结晶，该方法同样很难捕捉蛋白质动态变化过程；
核磁共振依据强磁场中原子和对射频辐射的吸收作用，需要用到核磁共振波谱仪进行研究，该方法可以捕捉蛋白质分子动力学，但是仅适用于小分子蛋白；
冷冻电镜是近年来兴起的蛋白质结构测定方法，难以结晶的膜蛋白以及生物大分子复合体可用此方法进行解析。#木木西里# #实验方案# #微生物蛋白#
【三种新冠疫苗都有什么特点，应该选择哪一种？】
进入5月以后，安徽、辽宁、广东等地发生了新一轮局部疫情，中国疫苗接种也随之明显提速。截止到5月28日，全国各地累计报告接种新冠病毒疫苗超6亿剂次。自3月27日超过1亿剂次以来，每亿剂次所需时间为25天、16天、9天、7天；而此次突破6亿，只用了5天，间隔不断缩短，这是疫苗接种的中国速度。那么，我国疫苗接种速度为什么越来越快？目前的三种疫苗都有什么特点，应该选择哪一种？面对巨大的需求量，我们的疫苗生产能跟得上吗？
近段时间以来，国内疫苗接种速度在不断加快，但与此同时，疫情的变化也时刻提醒我们：必须赢得这场与时间的赛跑。今年5月，在全国已经有22天没有新增本土确诊病例的情况下，安徽、辽宁、广东再次出现确诊病例，广东局部散发的疫情还在继续。这说明在国际疫情持续高发的情况下，疫情输入我国的风险加大，疫情防控形势仍然严峻复杂，加快疫苗接种迫在眉睫。
截止到5月29日，广东又新增13例本土无症状感染者，随着这轮本土疫情的发生，广东老百姓接种疫苗的积极性也随之高涨。当地在加强疫情防控的同时，也在全力加速疫苗接种。深圳湾体育中心是深圳最大的疫苗接种点之一，近几天，前来接种新冠疫苗的市民大幅度增加，原本在工作日并不需要排队的接种现场，如今排起了长队。为应对增加的接种人群，疫苗接种点增派了医护人员及志愿者。
近段时间以来，各地采用多种灵活多样的方式，尽量让有接种需求的群众都能尽快接种上疫苗。与此同时，可供大家选择的疫苗种类也越来越多。我国正在使用的新冠疫苗包含一针、两针、三针三种不同的类型：分别是只打一针的腺病毒载体疫苗，打两针的灭活疫苗和需要打三针的重组蛋白疫苗，疫苗接种的选择更加灵活多样。
那么，这三种疫苗各有什么特点呢？据了解，只打一针的是腺病毒载体疫苗。通俗地说，腺病毒像货车一样，可以搭载新冠病毒核酸片断，将其高效地送到细胞内表达抗原，单针接种就可诱导免疫保护反应。需要打两针的是灭活疫苗，这是大家熟悉的传统疫苗，它将活病毒灭活后作为抗原接种到人体，疫苗的成分和天然的病毒结构最接近。需要打三针的是重组蛋白疫苗，是将最有效的抗原成分通过基因工程的方法来制作成疫苗。尽管这三种疫苗类型不同，但都是安全和有效的。
5月28日，中国疾控中心发布我国新冠疫苗接种不良反应监测情况，2020年12月15日至2021年4月30日，全国不良反应报告发生率为11.86/10万剂次。其中严重病例188例，报告发生率为0.07/10万剂次，发生概率在极其罕见的范围以内。监测情况显示，我国新冠病毒疫苗的一般反应、异常反应发生率均低于2019年我国其他各类疫苗的平均报告水平。专家提醒，需紧急接种的人员一般选用一针的疫苗，其他人可以根据能够方便获取的疫苗类型以及自身的身体状况来选择。
中国疾控中心研究员、世卫组织疫苗研发委员会顾问邵一鸣说：“体质比较弱、基础性疾病比较多的人，选择副反应低的疫苗类型，比如发烧比较少的蛋白疫苗或者灭活疫苗，就比选病毒载体疫苗mRNA疫苗更好一些。”
随着新冠疫苗知识的普及，大家接种的热情也越来越高。专家提醒，在追求接种速度的同时，也要讲究接种质量。近日以来，一些省市市民反映接到了这样的消息：6月10日起停止新冠疫苗第一针接种，全面转入第二针接种的阶段。这说法是否属实？据记者了解，根据国家卫生健康委部署，6月10日到30日期间，主要对接种完第一剂次疫苗的重点人群集中开展第二剂次接种。但这期间对有出国需求的人群仍然继续提供接种第一剂次疫苗的服务。7月份后，将继续开展第一剂次和第二剂次接种工作。这是根据我国新冠肺炎防控需要，结合我国疫苗供应实际情况进行的安排。
中国疫苗行业协会会长封多佳说：“接种生产数量、接种数量和接种覆盖率，这都是效率指标，在这个基础上现在应该更关注的是接种质量，所以说还是要先保证前面打过一针的人完成全程免疫，比人人都打一针更能够体现接种质量。”
现在尽管我国累计接种新冠病毒疫苗已经超过6亿剂次，业内专家强调，这并不意味着有6亿人已经完成了接种，眼下要更加注重的是，坚持区分轻重缓急和加强供需协调，确保已经接种的人完成全程免疫，以确保免疫质量。
要完成疫苗接种，第一针、第二针甚至第三针需要及时有效地衔接。为做好第二剂次查漏补种，湖北全省建立了红黄蓝“三色”预警机制，对第二剂次逾期未种人员进行预警并通知接种，由17个驻点督导组负责督促接种进度。在武汉的一家社区卫生服务中心，每天，工作人员都会通过全省联网系统，对第一针接种者的后续情况进行电话随访。
现在，因为国外一些地方疫情蔓延态势依旧，并且不断出现变异毒株，一些老百姓担心，现在市面上的疫苗会不会对变异后的病毒没有效果呢？
邵一鸣说：“现有的变异株仅是中和抗体的程度下降，但仍然还是维持在50%以上的保护率，所以说现有的疫苗可以应付变异病毒，但是很重要的是大家要快一点接种，因为病毒的变异会继续发生，要想阻断它变异，防止完全能逃脱疫苗的免疫监视的变异株，我们就要阻断它传播，不给它机会继续去变异。”
专家表示，一方面我们要加快接种疫苗速度，阻断病毒传播和变异。另一方面，根据现有疫苗生产的机制，如果真正发生了变异严重的毒株，疫苗生产又如何应对呢？
邵一鸣说：“已经在针对变异株研制新一代疫苗，我们国家灭活疫苗的技术路线特别适合快速应对变异株，因为整个疫苗供应不做丝毫改变，只是在投料端把原来的早期流行株换成现在对我们有威胁的变异株，一个生产周期，这一头出来的就是变异株的疫苗，所以说百姓不用担心。”
除了严密追踪和研究变异毒株之外，距离我国第一批人员接种新冠疫苗的时间已经接近6个月。大家想了解，在6个月之后，接种疫苗产生的抗体是否会失效，又是否需要重新接种呢？
邵一鸣说：“6个月之后，大人群的监控数据正在分析之中，初步的情况看，大概一半左右的人抗体还是可以的。我们会根据科学数据的支持下，确定我们国家接种时间比较长的人群，在什么时间应该进行加强针的免疫。”
所谓加强针就是在首次完成疫苗全程接种之后，根据追踪实验免疫消退的状况，再决定是否补充接种针剂，以保持人体对病毒免疫力。按照专家的解释，根据目前的研究，接种疫苗6个月之后，部分人对病毒仍然有一定的防御能力。因此目前来说，最紧要的还是完成首次疫苗接种，尽快建立免疫屏障。现在我国疫苗接种能力和民众的意愿也都有了大大的提升。随着各地接种进程提速，新冠肺炎疫苗的需求也变得更加急切，这对国内疫苗的供给提出了不小的挑战。
中国距离建立群体免疫屏障的目标越来越近，要和病毒跑赢这场比赛，需要每个人的参与。在这其中最重要的是，疫苗产能、接种意愿和接种能力三者要形成匹配的合力。
封多佳说：“我觉得关键还是疫苗产能供应和匹配的问题，这个要能够保障，我相信肯定没问题。现在生产出来10亿多剂次，这是从零开始慢慢加速到这个程度，从现在这个基数到年底至少超过30亿剂次，后面的速度会更快，所以技术上不是问题。”
邵一鸣说：“每单日的接种量长期维持在500万剂次以上，最近加速到1000万剂次以上，接种潜能突破单日接种2000万剂次都是没有问题的，所以说，按照现在国家规划的节奏进行接种，完全可以实现建立群体免疫屏障的目标。”
接种疫苗对于预防传染病来说需要时间和过程。疾控专家强调，对于普通人而言，重要的是在所在地没有出现疫情的时候，公众要积极参与，按照既定的节奏进行接种，这样我国的免疫屏障才能早日建立。
中国如果不尽快建立起免疫屏障，就有可能形成一个“免疫洼地”。中国要避免从“防疫高地”变为“免疫洼地”，就必须抓住窗口期，加快推进疫苗接种，确保我们来之不易的防疫成果。疾控专家预计，到明年初甚至今年年底，中国能达到70%—80%的新冠疫苗接种率，也就是完成约10亿人口的疫苗接种，基本实现群体免疫。但这个巨大的挑战需要每一位的共同努力。应接尽接、应早尽早，共筑“免疫长城”，期待你的一“臂”之力。
来源：央视网
进入5月以后，安徽、辽宁、广东等地发生了新一轮局部疫情，中国疫苗接种也随之明显提速。截止到5月28日，全国各地累计报告接种新冠病毒疫苗超6亿剂次。自3月27日超过1亿剂次以来，每亿剂次所需时间为25天、16天、9天、7天；而此次突破6亿，只用了5天，间隔不断缩短，这是疫苗接种的中国速度。那么，我国疫苗接种速度为什么越来越快？目前的三种疫苗都有什么特点，应该选择哪一种？面对巨大的需求量，我们的疫苗生产能跟得上吗？
近段时间以来，国内疫苗接种速度在不断加快，但与此同时，疫情的变化也时刻提醒我们：必须赢得这场与时间的赛跑。今年5月，在全国已经有22天没有新增本土确诊病例的情况下，安徽、辽宁、广东再次出现确诊病例，广东局部散发的疫情还在继续。这说明在国际疫情持续高发的情况下，疫情输入我国的风险加大，疫情防控形势仍然严峻复杂，加快疫苗接种迫在眉睫。
截止到5月29日，广东又新增13例本土无症状感染者，随着这轮本土疫情的发生，广东老百姓接种疫苗的积极性也随之高涨。当地在加强疫情防控的同时，也在全力加速疫苗接种。深圳湾体育中心是深圳最大的疫苗接种点之一，近几天，前来接种新冠疫苗的市民大幅度增加，原本在工作日并不需要排队的接种现场，如今排起了长队。为应对增加的接种人群，疫苗接种点增派了医护人员及志愿者。
近段时间以来，各地采用多种灵活多样的方式，尽量让有接种需求的群众都能尽快接种上疫苗。与此同时，可供大家选择的疫苗种类也越来越多。我国正在使用的新冠疫苗包含一针、两针、三针三种不同的类型：分别是只打一针的腺病毒载体疫苗，打两针的灭活疫苗和需要打三针的重组蛋白疫苗，疫苗接种的选择更加灵活多样。
那么，这三种疫苗各有什么特点呢？据了解，只打一针的是腺病毒载体疫苗。通俗地说，腺病毒像货车一样，可以搭载新冠病毒核酸片断，将其高效地送到细胞内表达抗原，单针接种就可诱导免疫保护反应。需要打两针的是灭活疫苗，这是大家熟悉的传统疫苗，它将活病毒灭活后作为抗原接种到人体，疫苗的成分和天然的病毒结构最接近。需要打三针的是重组蛋白疫苗，是将最有效的抗原成分通过基因工程的方法来制作成疫苗。尽管这三种疫苗类型不同，但都是安全和有效的。
5月28日，中国疾控中心发布我国新冠疫苗接种不良反应监测情况，2020年12月15日至2021年4月30日，全国不良反应报告发生率为11.86/10万剂次。其中严重病例188例，报告发生率为0.07/10万剂次，发生概率在极其罕见的范围以内。监测情况显示，我国新冠病毒疫苗的一般反应、异常反应发生率均低于2019年我国其他各类疫苗的平均报告水平。专家提醒，需紧急接种的人员一般选用一针的疫苗，其他人可以根据能够方便获取的疫苗类型以及自身的身体状况来选择。
中国疾控中心研究员、世卫组织疫苗研发委员会顾问邵一鸣说：“体质比较弱、基础性疾病比较多的人，选择副反应低的疫苗类型，比如发烧比较少的蛋白疫苗或者灭活疫苗，就比选病毒载体疫苗mRNA疫苗更好一些。”
随着新冠疫苗知识的普及，大家接种的热情也越来越高。专家提醒，在追求接种速度的同时，也要讲究接种质量。近日以来，一些省市市民反映接到了这样的消息：6月10日起停止新冠疫苗第一针接种，全面转入第二针接种的阶段。这说法是否属实？据记者了解，根据国家卫生健康委部署，6月10日到30日期间，主要对接种完第一剂次疫苗的重点人群集中开展第二剂次接种。但这期间对有出国需求的人群仍然继续提供接种第一剂次疫苗的服务。7月份后，将继续开展第一剂次和第二剂次接种工作。这是根据我国新冠肺炎防控需要，结合我国疫苗供应实际情况进行的安排。
中国疫苗行业协会会长封多佳说：“接种生产数量、接种数量和接种覆盖率，这都是效率指标，在这个基础上现在应该更关注的是接种质量，所以说还是要先保证前面打过一针的人完成全程免疫，比人人都打一针更能够体现接种质量。”
现在尽管我国累计接种新冠病毒疫苗已经超过6亿剂次，业内专家强调，这并不意味着有6亿人已经完成了接种，眼下要更加注重的是，坚持区分轻重缓急和加强供需协调，确保已经接种的人完成全程免疫，以确保免疫质量。
要完成疫苗接种，第一针、第二针甚至第三针需要及时有效地衔接。为做好第二剂次查漏补种，湖北全省建立了红黄蓝“三色”预警机制，对第二剂次逾期未种人员进行预警并通知接种，由17个驻点督导组负责督促接种进度。在武汉的一家社区卫生服务中心，每天，工作人员都会通过全省联网系统，对第一针接种者的后续情况进行电话随访。
现在，因为国外一些地方疫情蔓延态势依旧，并且不断出现变异毒株，一些老百姓担心，现在市面上的疫苗会不会对变异后的病毒没有效果呢？
邵一鸣说：“现有的变异株仅是中和抗体的程度下降，但仍然还是维持在50%以上的保护率，所以说现有的疫苗可以应付变异病毒，但是很重要的是大家要快一点接种，因为病毒的变异会继续发生，要想阻断它变异，防止完全能逃脱疫苗的免疫监视的变异株，我们就要阻断它传播，不给它机会继续去变异。”
专家表示，一方面我们要加快接种疫苗速度，阻断病毒传播和变异。另一方面，根据现有疫苗生产的机制，如果真正发生了变异严重的毒株，疫苗生产又如何应对呢？
邵一鸣说：“已经在针对变异株研制新一代疫苗，我们国家灭活疫苗的技术路线特别适合快速应对变异株，因为整个疫苗供应不做丝毫改变，只是在投料端把原来的早期流行株换成现在对我们有威胁的变异株，一个生产周期，这一头出来的就是变异株的疫苗，所以说百姓不用担心。”
除了严密追踪和研究变异毒株之外，距离我国第一批人员接种新冠疫苗的时间已经接近6个月。大家想了解，在6个月之后，接种疫苗产生的抗体是否会失效，又是否需要重新接种呢？
邵一鸣说：“6个月之后，大人群的监控数据正在分析之中，初步的情况看，大概一半左右的人抗体还是可以的。我们会根据科学数据的支持下，确定我们国家接种时间比较长的人群，在什么时间应该进行加强针的免疫。”
所谓加强针就是在首次完成疫苗全程接种之后，根据追踪实验免疫消退的状况，再决定是否补充接种针剂，以保持人体对病毒免疫力。按照专家的解释，根据目前的研究，接种疫苗6个月之后，部分人对病毒仍然有一定的防御能力。因此目前来说，最紧要的还是完成首次疫苗接种，尽快建立免疫屏障。现在我国疫苗接种能力和民众的意愿也都有了大大的提升。随着各地接种进程提速，新冠肺炎疫苗的需求也变得更加急切，这对国内疫苗的供给提出了不小的挑战。
中国距离建立群体免疫屏障的目标越来越近，要和病毒跑赢这场比赛，需要每个人的参与。在这其中最重要的是，疫苗产能、接种意愿和接种能力三者要形成匹配的合力。
封多佳说：“我觉得关键还是疫苗产能供应和匹配的问题，这个要能够保障，我相信肯定没问题。现在生产出来10亿多剂次，这是从零开始慢慢加速到这个程度，从现在这个基数到年底至少超过30亿剂次，后面的速度会更快，所以技术上不是问题。”
邵一鸣说：“每单日的接种量长期维持在500万剂次以上，最近加速到1000万剂次以上，接种潜能突破单日接种2000万剂次都是没有问题的，所以说，按照现在国家规划的节奏进行接种，完全可以实现建立群体免疫屏障的目标。”
接种疫苗对于预防传染病来说需要时间和过程。疾控专家强调，对于普通人而言，重要的是在所在地没有出现疫情的时候，公众要积极参与，按照既定的节奏进行接种，这样我国的免疫屏障才能早日建立。
中国如果不尽快建立起免疫屏障，就有可能形成一个“免疫洼地”。中国要避免从“防疫高地”变为“免疫洼地”，就必须抓住窗口期，加快推进疫苗接种，确保我们来之不易的防疫成果。疾控专家预计，到明年初甚至今年年底，中国能达到70%—80%的新冠疫苗接种率，也就是完成约10亿人口的疫苗接种，基本实现群体免疫。但这个巨大的挑战需要每一位的共同努力。应接尽接、应早尽早，共筑“免疫长城”，期待你的一“臂”之力。
来源：央视网
世间的起起伏伏，其实是由一只无形的手在掌控，这手就叫“天道”。
天道就是宇宙法则，它犹如一张天罗地网，控制着社会的轮回！
天地不仁，以万物为刍狗。在天道面前，我们的能力根本不值一提。

人生福祸得失，皆因违背或顺应天道而起。
那些立于不败之地的人，往往都是掌握了天道和规律的人。
先来看几个简单的定律：
1:吸引法则
现实是内心的投射，心念总是能吸引和它一致的现实。
控制心念，就能控制命运。
2:利他定律
事事处处为他人着想，为别人造福，最后最受益的人，就是自己。
3:施受定律
宇宙是一个玄妙无比的运算程序，你给予出去的任何东西，最后都会以各种形式回到你的身边。
4:在乎定律
你越在乎的东西越容易失去，越不在乎的东西，越容易自己过来找你。
再来看几个深刻的规律：
5:强弱转化
强者和弱者一直在互相转化，没有永远的强者，也没有永远的弱者，富不过三代、也穷不过三代。

6:同情法则
大家永远都会同情弱者。只要你是弱者，哪怕不占理，也一定可以博取大家的同情。同样，大家永远都会嫉妒强者，无论你多么牛X，多么有理，如果不懂的示弱，就会成为万夫所指。
7:弱者上位
所有的弱者都不认命，都拼命的往上爬，弱者要拉每一个强者下马，然而可怕的是：有些弱者一旦上位，手段甚至会更狠，甚至去变本加厉的压迫其他弱者，这是一个恶性循环。
8:利益拆分
无论各行各业，都有一套内在的利益机制在掌握着人的各种行为。有些事只可做而不可说，有些事是只可说而不可做。
要想看透每个人的行为，必须要用“利益分析法”：每遇见一件事，要迅速切割成不同的利益方，用每个人的切身利益推导每个人的行为，千万不要被别人满口的仁义道德所迷惑。
9:高调法则
越成功的人越需要慎言慎行，如履薄冰；越弱小的人越可以胆大妄为/野蛮生长。而很多人却搞颠倒了：年轻时做事畏首畏尾，最终一无所成；成功时却胆大妄为，最后终于栽倒。
10:圈层原则
人永远只会相信亲人，关键位置都会留给亲人，不是本家族的人往往进不了核心圈层，所以很多公司最后往往都会做成家族企业。圈子比努力重要，血缘比圈子重要。
决定一个人前途的，往往是看他的圈层，也就是看他和谁形成了利益共同体。
11:做人为本
所有的问题都是“人”的问题。无论你事情做的多么成功，如果不懂做人的道理，照样会一败涂地。你十次“做事”上的成功，也无法掩盖一次“做人”的失败。把事做好的同时，还要求你能搞定人，同时又不被人搞，这就是最大的成功。
12:舍小取大
人要想取得成功，最厉害的本领不是依靠能力多强，而是如何通过牺牲小利益而收获大价值，懂得舍小而取大，这是做人的大道，远胜过做事的技巧。
13:贪婪必败
无论你多么有能力，如果你想独占一切，不留余地给别人，那么你的一切就会被清空； 如果你有功却什么都不想要，最后什么都是你的。
14:聪明忌巧
如果聪明的人也选择走捷径，一定会遭到天谴！
15:才华忌傲
越有才华的侠客，越需要深入群众，越不能傲慢，如果恃才傲物/脱离大众，一定会穷困潦倒，孤独终老。

16:平庸忌懒
世间的普通人，败就败在一个懒字上。
17:算计原则
人，最怕的不是有对手，而是遭人忌妒。
千万不要在别人失意的时候，炫耀你的得意。
18:斗争原则
打倒对手最狠的方式：避开事情对错本身，直接给对方扣上一顶帽子，从人品的角度全面否定这个人，这样他所有的言行都没有公信力了，没有任何还手的余地。这个招数被无数人掌控，包括小人，历史教训有很多，我们务必小心。
19:孤独原则
一个人的位置越高，惦记和算计你的人就越多。
你越出众，诋毁你的人也就越多。木秀于林，风必摧之。
再看看《易经》中隐含的那些天机
20：以自我为中心。必将自缚手脚
当“我”字被过分强调，就会变成诅咒。
21：过分在意别人眼光者，丢失自我
内心强大的人，才能活出自己。
22：嗜欲深者天机浅
过于贪婪和欲望太深的人
其判断力／洞察力／敏锐度必将下降！
23：善战者立于不败之地而战
君子不立于危墙之下。

24：缺乏自制力的人，百无一成
自由的本质上自律
有所为，有所不为
25：不能超越自己，便无法超越别人
人生最大敌人是自己
能改变自己的人
定能改变一切
26：送花者周围满是鲜花，种刺者身边满是荆棘
善待他人，最终有利于自己
与人为恶，会陷自己于万劫不复的境地
27：人生在于借力，而不是用力
当你参透世间大道之后
自然就会顺势而为。
28：被失败击败，才是真正的失败
真正的成功者
是那些历经失败而不倒的人。

29：成功在于智慧
不是胆大，更不是辛苦
比拼胆大的时代过去了
比拼努力的时代也过去了
未来依靠的是知识和智慧
做大事不可拘小节
集中精力解决主要矛盾
忽略次要矛盾。
30：决胜利器，不可示人
决战之前，不要轻易拔剑。
31：善战者，必求之于势
没有个人的成功
只有时代和大势的成功。
32：物极必反，盛极必衰，否极泰来。
知止，能及时知道收手的人
才是真正的牛人。
33：不贪者，方为王
那些什么都不想要的人
最后什么都是它的。
世间虽然风云莫测
人心也变化无常
但只要铭记以上大道
我们就可如鱼得水！ https://t.cn/R2WxjvI
天道就是宇宙法则，它犹如一张天罗地网，控制着社会的轮回！
天地不仁，以万物为刍狗。在天道面前，我们的能力根本不值一提。

人生福祸得失，皆因违背或顺应天道而起。
那些立于不败之地的人，往往都是掌握了天道和规律的人。
先来看几个简单的定律：
1:吸引法则
现实是内心的投射，心念总是能吸引和它一致的现实。
控制心念，就能控制命运。
2:利他定律
事事处处为他人着想，为别人造福，最后最受益的人，就是自己。
3:施受定律
宇宙是一个玄妙无比的运算程序，你给予出去的任何东西，最后都会以各种形式回到你的身边。
4:在乎定律
你越在乎的东西越容易失去，越不在乎的东西，越容易自己过来找你。
再来看几个深刻的规律：
5:强弱转化
强者和弱者一直在互相转化，没有永远的强者，也没有永远的弱者，富不过三代、也穷不过三代。

6:同情法则
大家永远都会同情弱者。只要你是弱者，哪怕不占理，也一定可以博取大家的同情。同样，大家永远都会嫉妒强者，无论你多么牛X，多么有理，如果不懂的示弱，就会成为万夫所指。
7:弱者上位
所有的弱者都不认命，都拼命的往上爬，弱者要拉每一个强者下马，然而可怕的是：有些弱者一旦上位，手段甚至会更狠，甚至去变本加厉的压迫其他弱者，这是一个恶性循环。
8:利益拆分
无论各行各业，都有一套内在的利益机制在掌握着人的各种行为。有些事只可做而不可说，有些事是只可说而不可做。
要想看透每个人的行为，必须要用“利益分析法”：每遇见一件事，要迅速切割成不同的利益方，用每个人的切身利益推导每个人的行为，千万不要被别人满口的仁义道德所迷惑。
9:高调法则
越成功的人越需要慎言慎行，如履薄冰；越弱小的人越可以胆大妄为/野蛮生长。而很多人却搞颠倒了：年轻时做事畏首畏尾，最终一无所成；成功时却胆大妄为，最后终于栽倒。
10:圈层原则
人永远只会相信亲人，关键位置都会留给亲人，不是本家族的人往往进不了核心圈层，所以很多公司最后往往都会做成家族企业。圈子比努力重要，血缘比圈子重要。
决定一个人前途的，往往是看他的圈层，也就是看他和谁形成了利益共同体。
11:做人为本
所有的问题都是“人”的问题。无论你事情做的多么成功，如果不懂做人的道理，照样会一败涂地。你十次“做事”上的成功，也无法掩盖一次“做人”的失败。把事做好的同时，还要求你能搞定人，同时又不被人搞，这就是最大的成功。
12:舍小取大
人要想取得成功，最厉害的本领不是依靠能力多强，而是如何通过牺牲小利益而收获大价值，懂得舍小而取大，这是做人的大道，远胜过做事的技巧。
13:贪婪必败
无论你多么有能力，如果你想独占一切，不留余地给别人，那么你的一切就会被清空； 如果你有功却什么都不想要，最后什么都是你的。
14:聪明忌巧
如果聪明的人也选择走捷径，一定会遭到天谴！
15:才华忌傲
越有才华的侠客，越需要深入群众，越不能傲慢，如果恃才傲物/脱离大众，一定会穷困潦倒，孤独终老。

16:平庸忌懒
世间的普通人，败就败在一个懒字上。
17:算计原则
人，最怕的不是有对手，而是遭人忌妒。
千万不要在别人失意的时候，炫耀你的得意。
18:斗争原则
打倒对手最狠的方式：避开事情对错本身，直接给对方扣上一顶帽子，从人品的角度全面否定这个人，这样他所有的言行都没有公信力了，没有任何还手的余地。这个招数被无数人掌控，包括小人，历史教训有很多，我们务必小心。
19:孤独原则
一个人的位置越高，惦记和算计你的人就越多。
你越出众，诋毁你的人也就越多。木秀于林，风必摧之。
再看看《易经》中隐含的那些天机
20：以自我为中心。必将自缚手脚
当“我”字被过分强调，就会变成诅咒。
21：过分在意别人眼光者，丢失自我
内心强大的人，才能活出自己。
22：嗜欲深者天机浅
过于贪婪和欲望太深的人
其判断力／洞察力／敏锐度必将下降！
23：善战者立于不败之地而战
君子不立于危墙之下。

24：缺乏自制力的人，百无一成
自由的本质上自律
有所为，有所不为
25：不能超越自己，便无法超越别人
人生最大敌人是自己
能改变自己的人
定能改变一切
26：送花者周围满是鲜花，种刺者身边满是荆棘
善待他人，最终有利于自己
与人为恶，会陷自己于万劫不复的境地
27：人生在于借力，而不是用力
当你参透世间大道之后
自然就会顺势而为。
28：被失败击败，才是真正的失败
真正的成功者
是那些历经失败而不倒的人。

29：成功在于智慧
不是胆大，更不是辛苦
比拼胆大的时代过去了
比拼努力的时代也过去了
未来依靠的是知识和智慧
做大事不可拘小节
集中精力解决主要矛盾
忽略次要矛盾。
30：决胜利器，不可示人
决战之前，不要轻易拔剑。
31：善战者，必求之于势
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只有时代和大势的成功。
32：物极必反，盛极必衰，否极泰来。
知止，能及时知道收手的人
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33：不贪者，方为王
那些什么都不想要的人
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