【乡村振兴】梨子中的“白甜美”来自江华瑶山
“邹总，明年的瑶山雪梨要优先供应我们超市啊，这次深圳的推介会上，‘白甜美’的名号可是引爆全场啊！”11月16日，我县六月香公司董事长邹会龙接到深圳沃尔沃超市的订单电话，自从2021年永州市文旅推介会在深圳专门为梨子中的“白甜美”——瑶山雪梨打call以来，这样的订单电话，邹总接了很多个了。
其实瑶山雪梨不是第一次被专门推介。2016年，多家网络平台以及全国15家省级纸媒，在我县启动媒体电商精准扶贫第一站，助销瑶山雪梨。2018年10月，湖南卫视组成30多人的团队专程来我县对瑶山雪梨进行广告扶贫，拍摄了长达60秒的瑶山雪梨宣传片，并在湖南卫视、湖南经视、湖南公共频道、芒果TV等各家媒体黄金时段集中免费播出，时间长达3个月。2019年8月，湖南卫视的天天向上栏目又专门为瑶山雪梨策划了一期节目，把我县大瑶山的孩子们请到了现场，天天向上栏目的主持人和嘉宾专门为瑶山雪梨代言！一时间，瑶山雪梨的美誉满天下。连续两年，我县的瑶山雪梨刚刚挂果就被经销商订购一空！
瑶山雪梨是何方神圣？为何被各家媒体和各种博览会反复推介热捧？别急，笔者来为您解开迷雾！
瑶山雪梨，湖南省永州市江华瑶族自治县特产，全国农产品地理标志。
江华瑶山雪梨，是雪梨中的“隐秘宝藏”，皮包肉嫩，沁甜多汁，是一款可以当水喝的水果，白色果肉抗氧化功能超强，削皮后，它雪白的果肉在常温下能保证两个小时不变色。
瑶家姑娘抓住它这一特点，很奢侈地刮出梨肉薄片，劳作后在太阳光下敷脸，竟然有超出寻常的补水抗氧化效果，梨肉面膜让瑶家姑娘的脸变得愈加白嫩。
说起瑶山雪梨，绕不开一个人，那就是“六月香”瑶山雪梨的董事长邹会龙。1998年，时年25岁的邹会龙下岗了，下岗后的邹会龙只身前往浙江打工，打工期间，他品尝到当地爽脆的绿皮梨。在享受到沁甜多汁的美味雪梨的同时，邹会龙萌生了大梦想。因为他发现家乡的土壤、气候与浙江产梨一带相仿。
“我在湖南农大、湖南农科院的水果专家、教授的指导下，从安徽、浙江一带挑选了翠冠梨种苗，在沱江镇小洛坪村开辟了20亩的“母本园”，与本地野梨树杂交，经过漫长的培育和改良，终于在2002年成功培育出口感和品质都上佳的瑶山雪梨。”邹会龙告诉笔者。
瑶山雪梨出世不到二十年，却只用了10年的时间，2012年5月就获得了“国家地理标志产品”。不仅如此，“瑶山雪梨”还先后获得“绿色食品证”、“有机食品证”。2002年推广种植以来，核心区已种植2000亩，在江华涛圩、大石桥、白芒营、大路铺、沱江镇等5个乡镇种植了近3万亩，有生产种植企业、合作社11家，从业人员5000多人，年产值2.2亿元。
每年6月中下旬，瑶山雪梨凭着最早熟梨子的优势抢先进入各大城市的水果市场，凭借“中国最早上市的梨子”出圈，成为新晋网红。它比北方的梨子提早40天左右成熟，比南方的梨子提早7到10天。
拥有北方梨子基因的瑶山雪梨能在南方成就“特早熟”的美誉，离不开它生活的“世外桃源”。雪梨作为一种喜光喜温的果树，对生长得环境和土壤要求颇高。江华处于湖南最南端，被五岭山脉萌渚岭山系及其支脉贯穿全境，地形南、北、东三面高、西南低，像个口袋。既能阻挡强冷空气入境，又能防范极端高温天气。这种得天独厚的地理条件，使得江华境内平均温度达到18.7度，无霜期300天以上，是瑶山雪梨的“天然温室”。不仅如此，江华地下水资源丰富，方圆几十公里无任何污染源，能源源不断地供应雪梨生长期所需的水分，江华的有机质含量高、土质深厚、富含硒等微量元素的土壤也满足了雪梨的生长需求。
天地人和、阳光雨露孕育出来的瑶山雪梨不仅是可以当水喝的水果，还是最甜的水果！
瑶山雪梨最大的特点就是汁水充足，爽甜无渣。它长相圆润周正，通常一个梨有半斤到一斤重，但它的果核却只有拇指大小，因而这沉甸甸的果子里几乎都是水，它的含水量达到百分之八十以上，比常规品种的梨要多出三分之一的汁液含量。皮薄多汁的雪梨，削皮时，刀和果皮之间汁水横流，入口即化！懒得削皮时，轻咬一口，嘴巴就成了天然榨汁机，清甜入心。
成熟后的瑶山雪梨果皮呈浅绿色，表皮非常薄，泛着鲜亮的光泽。这正是它好吃的秘密，梨皮越薄，果肉越细腻。
颜值高的瑶山雪梨，源于它经受了风雨的洗礼。瑶山雪梨实行标准化种植，每一棵树都是统一的“开心型”，就像一群站军姿的士兵一样挺拔向上。标准化雪梨园基本南北分布，有向阳坡和便捷的水源，能保证梨树充分享受光照和灌溉。
瑶山雪梨是无公害栽培技术培养出来的。每一棵树都需要耐住寂寞的六年培育期。这期间，除了施用各种肥料，还要松土、拉伸、整形。每棵梨树都控制在100颗左右的果实，生长前期要套小袋，生长中期要第二次套袋，这样既避免夜蛾、梨食心虫的伤害，又避免阳光长时间照射，以保证果皮颜色鲜亮翠绿。
“邹总，明年的瑶山雪梨要优先供应我们超市啊，这次深圳的推介会上，‘白甜美’的名号可是引爆全场啊！”11月16日，我县六月香公司董事长邹会龙接到深圳沃尔沃超市的订单电话，自从2021年永州市文旅推介会在深圳专门为梨子中的“白甜美”——瑶山雪梨打call以来，这样的订单电话，邹总接了很多个了。
其实瑶山雪梨不是第一次被专门推介。2016年，多家网络平台以及全国15家省级纸媒，在我县启动媒体电商精准扶贫第一站，助销瑶山雪梨。2018年10月，湖南卫视组成30多人的团队专程来我县对瑶山雪梨进行广告扶贫，拍摄了长达60秒的瑶山雪梨宣传片，并在湖南卫视、湖南经视、湖南公共频道、芒果TV等各家媒体黄金时段集中免费播出，时间长达3个月。2019年8月，湖南卫视的天天向上栏目又专门为瑶山雪梨策划了一期节目，把我县大瑶山的孩子们请到了现场，天天向上栏目的主持人和嘉宾专门为瑶山雪梨代言！一时间，瑶山雪梨的美誉满天下。连续两年，我县的瑶山雪梨刚刚挂果就被经销商订购一空！
瑶山雪梨是何方神圣？为何被各家媒体和各种博览会反复推介热捧？别急，笔者来为您解开迷雾！
瑶山雪梨，湖南省永州市江华瑶族自治县特产，全国农产品地理标志。
江华瑶山雪梨，是雪梨中的“隐秘宝藏”，皮包肉嫩，沁甜多汁，是一款可以当水喝的水果，白色果肉抗氧化功能超强，削皮后，它雪白的果肉在常温下能保证两个小时不变色。
瑶家姑娘抓住它这一特点，很奢侈地刮出梨肉薄片，劳作后在太阳光下敷脸，竟然有超出寻常的补水抗氧化效果，梨肉面膜让瑶家姑娘的脸变得愈加白嫩。
说起瑶山雪梨，绕不开一个人，那就是“六月香”瑶山雪梨的董事长邹会龙。1998年，时年25岁的邹会龙下岗了，下岗后的邹会龙只身前往浙江打工，打工期间，他品尝到当地爽脆的绿皮梨。在享受到沁甜多汁的美味雪梨的同时，邹会龙萌生了大梦想。因为他发现家乡的土壤、气候与浙江产梨一带相仿。
“我在湖南农大、湖南农科院的水果专家、教授的指导下，从安徽、浙江一带挑选了翠冠梨种苗，在沱江镇小洛坪村开辟了20亩的“母本园”，与本地野梨树杂交，经过漫长的培育和改良，终于在2002年成功培育出口感和品质都上佳的瑶山雪梨。”邹会龙告诉笔者。
瑶山雪梨出世不到二十年，却只用了10年的时间，2012年5月就获得了“国家地理标志产品”。不仅如此，“瑶山雪梨”还先后获得“绿色食品证”、“有机食品证”。2002年推广种植以来，核心区已种植2000亩，在江华涛圩、大石桥、白芒营、大路铺、沱江镇等5个乡镇种植了近3万亩，有生产种植企业、合作社11家，从业人员5000多人，年产值2.2亿元。
每年6月中下旬，瑶山雪梨凭着最早熟梨子的优势抢先进入各大城市的水果市场，凭借“中国最早上市的梨子”出圈，成为新晋网红。它比北方的梨子提早40天左右成熟，比南方的梨子提早7到10天。
拥有北方梨子基因的瑶山雪梨能在南方成就“特早熟”的美誉，离不开它生活的“世外桃源”。雪梨作为一种喜光喜温的果树，对生长得环境和土壤要求颇高。江华处于湖南最南端，被五岭山脉萌渚岭山系及其支脉贯穿全境，地形南、北、东三面高、西南低，像个口袋。既能阻挡强冷空气入境，又能防范极端高温天气。这种得天独厚的地理条件，使得江华境内平均温度达到18.7度，无霜期300天以上，是瑶山雪梨的“天然温室”。不仅如此，江华地下水资源丰富，方圆几十公里无任何污染源，能源源不断地供应雪梨生长期所需的水分，江华的有机质含量高、土质深厚、富含硒等微量元素的土壤也满足了雪梨的生长需求。
天地人和、阳光雨露孕育出来的瑶山雪梨不仅是可以当水喝的水果，还是最甜的水果！
瑶山雪梨最大的特点就是汁水充足，爽甜无渣。它长相圆润周正，通常一个梨有半斤到一斤重，但它的果核却只有拇指大小，因而这沉甸甸的果子里几乎都是水，它的含水量达到百分之八十以上，比常规品种的梨要多出三分之一的汁液含量。皮薄多汁的雪梨，削皮时，刀和果皮之间汁水横流，入口即化！懒得削皮时，轻咬一口，嘴巴就成了天然榨汁机，清甜入心。
成熟后的瑶山雪梨果皮呈浅绿色，表皮非常薄，泛着鲜亮的光泽。这正是它好吃的秘密，梨皮越薄，果肉越细腻。
颜值高的瑶山雪梨，源于它经受了风雨的洗礼。瑶山雪梨实行标准化种植，每一棵树都是统一的“开心型”，就像一群站军姿的士兵一样挺拔向上。标准化雪梨园基本南北分布，有向阳坡和便捷的水源，能保证梨树充分享受光照和灌溉。
瑶山雪梨是无公害栽培技术培养出来的。每一棵树都需要耐住寂寞的六年培育期。这期间，除了施用各种肥料，还要松土、拉伸、整形。每棵梨树都控制在100颗左右的果实，生长前期要套小袋，生长中期要第二次套袋，这样既避免夜蛾、梨食心虫的伤害，又避免阳光长时间照射，以保证果皮颜色鲜亮翠绿。
ibidi µ-Patterns 上的细胞粘附：实验参数和优化
本应用说明讨论了对于细胞粘附到 ibidi µ-Patterns 的重要实验参数。此外，它还解释了如何优化细胞粘附和模式覆盖。
关键词
· µ-Patterning、粘附、结合基序、单细胞模式、多细胞微模式、细胞培养、粘附细胞
细胞类型
ibidi µ-Patterning 的成功实验仅限于贴壁细胞类型——悬浮细胞不能附着在图案表面。此外，对 µ-Pattern 表面的粘附高度依赖于细胞类型，因为并非所有细胞类型都与所有结合基序结合。因此，在开始实验之前，有必要测试所选细胞类型是否能够粘附在图案表面上。
结合基序
ibidi µ-Patterning 技术为细胞粘附提供共价结合的结合基序。这些结合基序的表面密度可能不同于经典的蛋白质涂层。因此，结合基序可能导致细胞形态或粘附行为的改变。测试您的细胞是否与结合基序兼容的最佳方法是将它们接种在具有大粘合面积的图案点上（例如，多细胞图案）。验证单元格兼容性后，您可以切换到更小的模式，例如单单元格模式。
几何图案
由于结合基序的数量，图案几何形状会影响细胞的粘附行为。例如，较小的形状呈现较少的结合基序，与较大的形状相比，这可能会降低细胞粘附。特别是对于单细胞实验，需要在图案上实现单细胞占有率，图案尺寸非常重要，因为太小的图案阻碍了适当的细胞粘附和扩散，而太大的图案会导致多个细胞粘附在一个单点。此外，当所用细胞类型的间距太小时，粘附斑块之间的间距会影响理想的细胞接种浓度和细胞从一个点到另一个点的桥接。
细胞接种浓度
接种浓度是优化粘附过程的另一个关键参数。较低的浓度会导致图案上的细胞较少，或者只有稀疏占据的斑点，但结块较少。较高的细胞浓度可以提高细胞覆盖率，但要承担 a) 结块和 b) 在单细胞粘附位点上出现多个细胞的风险。如果细胞浓度太高并且细胞在附着到粘附点之前开始聚集，这些漂浮的聚集体可能会从模式中分离粘附细胞并阻止进一步的细胞粘附。
细胞悬液质量
细胞悬液的均匀性高度影响实验输出。没有任何细胞聚集体的单细胞悬浮液非常适合单细胞检测。接种细胞簇或球体悬浮液是 3D多细胞检测的一种选择。
培养时间
接种细胞后的孵育时间会影响粘附过程。与其他表面相比，细胞附着在图案上所需的时间可能不同。在粘合过程中移动 µ-Patterned 载玻片时要特别小心。未连接或仅松散连接的细胞可能会开始结块。
机械应力和洗涤
部分附着的细胞可能会被机械力冲走。利用这种效果有助于去除细胞或碎片。根据洗涤步骤的强度（剪切应力），可能会从表面洗掉更多或更少的细胞。
细胞适合度
细胞的活力和适应性是适当细胞粘附的重要因素。因此，请确保优化细胞制备过程，以最大限度地减少细胞压力。优化和标准化影响细胞健康的因素，例如化学分离、温度、机械应力、悬浮时间、培养基成分和其他细胞培养参数。
优化 µ-Pattern 上的细胞粘附
初步测试：细胞类型是否与 µ-Pattern 兼容？
如果您不知道您的细胞类型是否与 µ-Patterning 的结合基序兼容，我们建议首先在多细胞 µ-Pattern 上运行初始细胞粘附测试。在较大图案上测试粘附减少了对结合基序本身的初始兼容性测试，同时排除了单细胞和图案几何效应。
· 按照说明中的协议使用 2-3 种不同的细胞接种浓度，并通过将它们孵育至少 4 小时直至过夜，让细胞不受干扰地粘附。
· 在洗掉未附着的细胞之前, 用相差显微镜控制细胞附着。拍摄细胞图像总是有助于随后优化过程。
· 洗涤后至少 2 小时拍摄额外的图像，让细胞有时间从洗涤时经历的剪切应力中恢复。
请注意：在此阶段，不需要最佳模式覆盖。任何细胞都坚持该模式是很重要的。如果是这种情况，您可以继续优化所需模式的播种参数。如果您在孵育过夜后仍未在图案上看到任何细胞附着，则您的细胞类型可能与所使用的结合基序不兼容。
优化附着在 µ-Pattern 上的细胞的播种参数
如果您知道细胞与 µ-Pattern 的结合基序结合，则可以开始优化所需模式上的细胞接种参数。请考虑每个模式都需要针对您的特定细胞类型进行优化，因为模式大小和模式之间的距离在很大程度上影响播种参数。确保细胞至关重要，并且您有单细胞悬液。
第一次优化运行
· 按照说明在载玻片上接种至少三种不同浓度的细胞。
· 让细胞在洗涤前无干扰地粘附至少 4 小时。
· 在洗涤前和洗涤后至少 2 小时拍摄细胞图像。
可能的结果和故障排除
– 洗涤后，细胞很好地固定在图案上，图案覆盖度很好。
您已经为您的实验找到了合适的播种参数。您可以使用相同的条件开始您的实验。
– 洗涤前，只有少数细胞漂浮和聚集。洗涤后，图案上的细胞很少，图案覆盖率差。
细胞密度可能太低。在洗去未附着的细胞之前，尝试更高的接种浓度并考虑更长的孵育时间。
– 在洗涤之前，有很多漂浮的、聚集的细胞。洗涤后，图案上的细胞很少，图案覆盖率差。
细胞密度可能太高。尝试降低初始接种浓度，因为过高的细胞密度通常会导致细胞聚集，阻碍细胞与模式结合。此外，在播种后 2 小时和 3 小时检查细胞，看看更短的孵化时间是否会导致更少的聚集，从而更好地覆盖模式。
– 洗涤后，图案上会出现不需要的细胞聚集。
这表明初始接种浓度太高/或洗涤前孵育时间太长。尝试较低的接种浓度，并在 2 小时和 3 小时后检查细胞，看看较短的孵育时间是否足以使细胞粘附良好。
– 当使用小的单细胞斑点或细线时，图案上没有细胞粘附或细胞呈圆形且不会扩散。
如果您从之前的实验中知道细胞可以与所使用的图案结合基序结合，则图案尺寸对于您的细胞类型来说可能太小，并且细胞没有足够的空间来正确传播和粘附。因此，为您的实验使用更大的图案尺寸。
第二次优化运行
· 如上所述，根据第一次优化运行的结果使用优化的细胞培养参数。
将您的结果与第一次优化运行进行比较，如有必要，进入另一轮优化。
示例图像
图1，L929 细胞不同接种浓度对单个细胞模式的影响。(A) 将细胞以 1*10 5cells/ml加入µ-Slide VI 0.4，(B) 3*10 5 cells/ml、(C) ) 5.25*105 cells/ml。24 小时后，洗去未附着的细胞，并在洗涤后 2 小时拍摄图像。在低接种密度下，许多点没有被任何细胞覆盖。然而，在太高的接种浓度下，细胞开始在图案上聚集。
图 2：不同图案孔大小对 Rat1 细胞在单个细胞图案上的传播行为的影响。将细胞接种到 µ-Slide VI0.4中，µ-Pattern 为 (A) 20 µm 正方形，距离为 110 µm 或 (B) 30 µm 正方形，距离为 110 µm，浓度为 9*105 cells/ml。24 小时后，洗去未附着的细胞，并在洗涤后 2 小时拍摄图像。对于 Rat1 细胞，20 µm 正方形对于良好的细胞扩散来说太小了，而 30 µm 正方形为细胞提供了足够的区域以在图案上展平。
图 3：不同图案几何形状对 NIH3T3 细胞在单个细胞图案上的扩散行为的影响。将细胞接种到 µ-Slide VI0.4中，µ-Pattern 为 (A) 20 µm 正方形，距离为 110 µm，或 (B) 30 µm 正方形，距离为 110 µm，浓度为 3* 10 5 cells/ml。24 小时后，洗去未附着的细胞，并在洗涤后 2 小时拍摄图像。对于 NIH3T3 细胞，20 µm 正方形对于良好的细胞扩散来说太小了，而 30 µm 正方形为细胞提供了足够的区域以使其在图案上变平。然而，由于图案边缘之间的距离小了 10 µm，细胞能够从一个点连接到另一个点。对于该细胞系，需要更大的图案之间的距离。
本应用说明讨论了对于细胞粘附到 ibidi µ-Patterns 的重要实验参数。此外，它还解释了如何优化细胞粘附和模式覆盖。
关键词
· µ-Patterning、粘附、结合基序、单细胞模式、多细胞微模式、细胞培养、粘附细胞
细胞类型
ibidi µ-Patterning 的成功实验仅限于贴壁细胞类型——悬浮细胞不能附着在图案表面。此外，对 µ-Pattern 表面的粘附高度依赖于细胞类型，因为并非所有细胞类型都与所有结合基序结合。因此，在开始实验之前，有必要测试所选细胞类型是否能够粘附在图案表面上。
结合基序
ibidi µ-Patterning 技术为细胞粘附提供共价结合的结合基序。这些结合基序的表面密度可能不同于经典的蛋白质涂层。因此，结合基序可能导致细胞形态或粘附行为的改变。测试您的细胞是否与结合基序兼容的最佳方法是将它们接种在具有大粘合面积的图案点上（例如，多细胞图案）。验证单元格兼容性后，您可以切换到更小的模式，例如单单元格模式。
几何图案
由于结合基序的数量，图案几何形状会影响细胞的粘附行为。例如，较小的形状呈现较少的结合基序，与较大的形状相比，这可能会降低细胞粘附。特别是对于单细胞实验，需要在图案上实现单细胞占有率，图案尺寸非常重要，因为太小的图案阻碍了适当的细胞粘附和扩散，而太大的图案会导致多个细胞粘附在一个单点。此外，当所用细胞类型的间距太小时，粘附斑块之间的间距会影响理想的细胞接种浓度和细胞从一个点到另一个点的桥接。
细胞接种浓度
接种浓度是优化粘附过程的另一个关键参数。较低的浓度会导致图案上的细胞较少，或者只有稀疏占据的斑点，但结块较少。较高的细胞浓度可以提高细胞覆盖率，但要承担 a) 结块和 b) 在单细胞粘附位点上出现多个细胞的风险。如果细胞浓度太高并且细胞在附着到粘附点之前开始聚集，这些漂浮的聚集体可能会从模式中分离粘附细胞并阻止进一步的细胞粘附。
细胞悬液质量
细胞悬液的均匀性高度影响实验输出。没有任何细胞聚集体的单细胞悬浮液非常适合单细胞检测。接种细胞簇或球体悬浮液是 3D多细胞检测的一种选择。
培养时间
接种细胞后的孵育时间会影响粘附过程。与其他表面相比，细胞附着在图案上所需的时间可能不同。在粘合过程中移动 µ-Patterned 载玻片时要特别小心。未连接或仅松散连接的细胞可能会开始结块。
机械应力和洗涤
部分附着的细胞可能会被机械力冲走。利用这种效果有助于去除细胞或碎片。根据洗涤步骤的强度（剪切应力），可能会从表面洗掉更多或更少的细胞。
细胞适合度
细胞的活力和适应性是适当细胞粘附的重要因素。因此，请确保优化细胞制备过程，以最大限度地减少细胞压力。优化和标准化影响细胞健康的因素，例如化学分离、温度、机械应力、悬浮时间、培养基成分和其他细胞培养参数。
优化 µ-Pattern 上的细胞粘附
初步测试：细胞类型是否与 µ-Pattern 兼容？
如果您不知道您的细胞类型是否与 µ-Patterning 的结合基序兼容，我们建议首先在多细胞 µ-Pattern 上运行初始细胞粘附测试。在较大图案上测试粘附减少了对结合基序本身的初始兼容性测试，同时排除了单细胞和图案几何效应。
· 按照说明中的协议使用 2-3 种不同的细胞接种浓度，并通过将它们孵育至少 4 小时直至过夜，让细胞不受干扰地粘附。
· 在洗掉未附着的细胞之前, 用相差显微镜控制细胞附着。拍摄细胞图像总是有助于随后优化过程。
· 洗涤后至少 2 小时拍摄额外的图像，让细胞有时间从洗涤时经历的剪切应力中恢复。
请注意：在此阶段，不需要最佳模式覆盖。任何细胞都坚持该模式是很重要的。如果是这种情况，您可以继续优化所需模式的播种参数。如果您在孵育过夜后仍未在图案上看到任何细胞附着，则您的细胞类型可能与所使用的结合基序不兼容。
优化附着在 µ-Pattern 上的细胞的播种参数
如果您知道细胞与 µ-Pattern 的结合基序结合，则可以开始优化所需模式上的细胞接种参数。请考虑每个模式都需要针对您的特定细胞类型进行优化，因为模式大小和模式之间的距离在很大程度上影响播种参数。确保细胞至关重要，并且您有单细胞悬液。
第一次优化运行
· 按照说明在载玻片上接种至少三种不同浓度的细胞。
· 让细胞在洗涤前无干扰地粘附至少 4 小时。
· 在洗涤前和洗涤后至少 2 小时拍摄细胞图像。
可能的结果和故障排除
– 洗涤后，细胞很好地固定在图案上，图案覆盖度很好。
您已经为您的实验找到了合适的播种参数。您可以使用相同的条件开始您的实验。
– 洗涤前，只有少数细胞漂浮和聚集。洗涤后，图案上的细胞很少，图案覆盖率差。
细胞密度可能太低。在洗去未附着的细胞之前，尝试更高的接种浓度并考虑更长的孵育时间。
– 在洗涤之前，有很多漂浮的、聚集的细胞。洗涤后，图案上的细胞很少，图案覆盖率差。
细胞密度可能太高。尝试降低初始接种浓度，因为过高的细胞密度通常会导致细胞聚集，阻碍细胞与模式结合。此外，在播种后 2 小时和 3 小时检查细胞，看看更短的孵化时间是否会导致更少的聚集，从而更好地覆盖模式。
– 洗涤后，图案上会出现不需要的细胞聚集。
这表明初始接种浓度太高/或洗涤前孵育时间太长。尝试较低的接种浓度，并在 2 小时和 3 小时后检查细胞，看看较短的孵育时间是否足以使细胞粘附良好。
– 当使用小的单细胞斑点或细线时，图案上没有细胞粘附或细胞呈圆形且不会扩散。
如果您从之前的实验中知道细胞可以与所使用的图案结合基序结合，则图案尺寸对于您的细胞类型来说可能太小，并且细胞没有足够的空间来正确传播和粘附。因此，为您的实验使用更大的图案尺寸。
第二次优化运行
· 如上所述，根据第一次优化运行的结果使用优化的细胞培养参数。
将您的结果与第一次优化运行进行比较，如有必要，进入另一轮优化。
示例图像
图1，L929 细胞不同接种浓度对单个细胞模式的影响。(A) 将细胞以 1*10 5cells/ml加入µ-Slide VI 0.4，(B) 3*10 5 cells/ml、(C) ) 5.25*105 cells/ml。24 小时后，洗去未附着的细胞，并在洗涤后 2 小时拍摄图像。在低接种密度下，许多点没有被任何细胞覆盖。然而，在太高的接种浓度下，细胞开始在图案上聚集。
图 2：不同图案孔大小对 Rat1 细胞在单个细胞图案上的传播行为的影响。将细胞接种到 µ-Slide VI0.4中，µ-Pattern 为 (A) 20 µm 正方形，距离为 110 µm 或 (B) 30 µm 正方形，距离为 110 µm，浓度为 9*105 cells/ml。24 小时后，洗去未附着的细胞，并在洗涤后 2 小时拍摄图像。对于 Rat1 细胞，20 µm 正方形对于良好的细胞扩散来说太小了，而 30 µm 正方形为细胞提供了足够的区域以在图案上展平。
图 3：不同图案几何形状对 NIH3T3 细胞在单个细胞图案上的扩散行为的影响。将细胞接种到 µ-Slide VI0.4中，µ-Pattern 为 (A) 20 µm 正方形，距离为 110 µm，或 (B) 30 µm 正方形，距离为 110 µm，浓度为 3* 10 5 cells/ml。24 小时后，洗去未附着的细胞，并在洗涤后 2 小时拍摄图像。对于 NIH3T3 细胞，20 µm 正方形对于良好的细胞扩散来说太小了，而 30 µm 正方形为细胞提供了足够的区域以使其在图案上变平。然而，由于图案边缘之间的距离小了 10 µm，细胞能够从一个点连接到另一个点。对于该细胞系，需要更大的图案之间的距离。
卫星，每颗行星的守护神，太阳系几大行星的卫星都是哪些呢？
电话簿☎
导语：太阳系拥有九大行星，但是九大行星里面只有地球适合人类居住，因为只有地球才能产生大气，另外由于地球距离太阳的巧妙位置，使得地球拥有可以适宜人类居住的温度，接下来让我们看一下地球各大行星的卫星介绍。
01地球、火星卫星接收
1、地球卫星：月球
虽然有卫星，但离地球最近的是地球的卫星：月球。月亮到地球的距离大约是38.4百万米。约44亿年前，一个太阳系中的大型天体撞击地球，不仅撞歪了地球的自转轴，产生的残骸还围绕着地球旋转，最终凝聚成现在的月球。
月亮太小，几乎没有大气，所以在太阳系中，月球表面经常受到其他小行星的撞击，形成大小陨石坑。
2、火星的卫星
1877年，霍尔(AsaphHall)发现了两颗火星卫星，这两颗卫星被称为火卫一(Phobos)和火卫二(Deimos)。Firefox距离火星表面的平均距离只有6000千米，相当于月球到地球平均距离的60分之一，是太阳系中距离木星最近的一颗卫星。
奇异知识：火卫一在3个方向上最大的尺寸为：27千米，22千米和18千米。在3个方向上，火卫二最大尺寸为15公里，12.2公里，11公里。火箭一周环绕火星，以每7小时39分的速度从火星西边升起并向东降落。同时火星的自转周期为24小时40分钟。这就是说，每隔火星一周，火卫一就能绕火星3圈。这是太阳系中唯一一颗自转周期小于母星的卫星。
一九六九年，NASA的水手七号探测器掠过火星，拍摄到第一张火卫一照片。一九七六年，NASA的海盗一号在火星表面着陆，第二年，海盗一号给火卫一拍了一张更清晰的照片，照片中，火卫一上方有一个陨石坑，是一颗天体撞击它时留下的，它几乎将火卫一撞毁。
在距离火星约3千万到5千万年后，火卫一将会撞上火星，或者被火星的引力撕裂，不再存在。
02
木星、天王星的卫星介绍
1、木星卫星的介绍
1609年，伽利略用他自己制造的天文望远镜观察木星，发现木星上有4颗卫星，其后人将其命名为木卫一(Io)、木卫二(Europa)、木卫三(Ganymede)和木卫四(Callisto)。后来，天文学家相继发现了许多新的卫星。到2021年为止，共发现79颗木星卫星，其中63颗直径在10公里以内，形状不规则。
其中最大的卫星还有四颗伽利略卫星，木卫三不仅是木星和太阳系中最大的卫星，而且是太阳系中最大的一颗，其直径达到5268千米，超过水星半径的三分之一。在这几年，木卫二受到了特别的注意，因为在其表面冰下的猜测可能是由水组成的海洋，其中可能有生命存在。据哈勃木卫三拍的照片，人们还推测木卫三的地下还有一片巨大的海水。
2、天王星的卫星
截至2020年，天文学家已经发现了27颗卫星，它们都是以莎士比亚和Pope作品中的人物命名的。最大的天文学卫星天卫三号(Titania)，其半径为394公里，在天王星被发现的当天被发现。天卫一(Ariel)也是一个更大的卫星，其半径为289公里。天王星也有环，只是不太明显。
03
海王星和冥王星卫星介绍
1、海王星的卫星
迄今为止，天文学家已经发现了海王星的14颗卫星，其中的“海卫一”(Triton)在海王星被发现17天后被发现，而另外13颗直到1981年开始世纪：1981年，海卫七被发现；1989年，旅行者2号在海王星被发现时发现了6颗海王星卫星；2002至2003年，一个国际研究小组利用两台地面望远镜发现了5颗海王星卫星；2013年，天文学家在哈勃拍摄的照片中发现了海王星的第14颗卫星。
在海王星的卫星中，海卫一是唯一能保持其球形的卫星。更奇怪的是，海卫一是卫星逆行，所以天文学家认为这是一个单独的物体，在经过海王星附近时，它被海王星的引力捕获，从而变成了卫星。还有海卫二(Nereid)，轨道扁平，与海王星距离最远的距离只有7倍。
2、冥王星的卫星
布鲁托有多个卫星，最大的卫星是卡戎，于1978年6月22日被天文学家发现。卡戎的半径是606公里，仅仅是冥王星半径的一半。
卡戎的体积相当于冥王星体积的8分之一。若两者密度相等，则卡戎的质量也相当于冥王星的8倍。实际上，卡戎的质量相当于冥王星质量的百分之12.2，非常接近于8分之1，这表明两者的密度几乎相当。
卡戎和冥王星围绕着公共中心旋转，而卡戎的轨道几乎呈圆形，其轨道半径约为1.96万千米。从地面望远镜拍摄到的照片显示，这两个物体连接在一起，而哈勃观测冥王星和卡戎。
1990年，带病工作的哈勃第一次观测到了卡戎和冥王星，拍到的照片首次显示了两个完全分离的圆盘天体。
在1993年修复后，哈勃在1994年再次拍摄冥王星时，得到了两个更清晰的圆盘，显示了哈勃无与伦比的分辨率。
3、冥王星的新卫星
哈勃拍摄到2005年5月15日的时候，冥王星发现了两颗新卫星。这一发现是在2006年哈勃拍摄的图像中得到证实的。它们分别被命名为冥卫二号(Nix)和冥卫三(Hydra)，冥卫二最长的方向长50千米，而冥卫三最长的方向则是51千米，两者大小差不多。
六月二十八日，天文学家在用哈勃搜索冥王星的环时，发现了冥王星的第四颗卫星，即冥卫四，而冥卫四的距离只有19千米。
2012年7月11日，天文学家利用哈勃望远镜发现了冥王星的第五颗卫星——冥卫五，而冥卫五的距离只有16千米。在那时，天文学家们搜索冥王星附近地区的动机是寻找可能威胁到新视野飞船的物体。
有理论认为，冥王星和卡戎曾经是两个完全无关的物体，但是在某一时刻，小星体撞向太阳，造成大量碎片，然后冷却，原来大的天体和小的天体分别成为冥王星和卡戎，它们喷溅出的一些碎片变成了冥王星和卡戎，它们喷溅出的一些碎片变成了冥王星。
结语：卫星就像每一颗行星的保护者一样，围绕着行星进行旋转，这些卫星也有着自己的特点，对于卫星的研究可以更好地让我们了解宇宙，从而对宇宙进行更深的研究，只有这样我们才能征服宇宙。喜欢电话簿就关注我吧！欢迎点赞、收藏、评论和转发呀！ https://t.cn/R2WxlNJ
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导语：太阳系拥有九大行星，但是九大行星里面只有地球适合人类居住，因为只有地球才能产生大气，另外由于地球距离太阳的巧妙位置，使得地球拥有可以适宜人类居住的温度，接下来让我们看一下地球各大行星的卫星介绍。
01地球、火星卫星接收
1、地球卫星：月球
虽然有卫星，但离地球最近的是地球的卫星：月球。月亮到地球的距离大约是38.4百万米。约44亿年前，一个太阳系中的大型天体撞击地球，不仅撞歪了地球的自转轴，产生的残骸还围绕着地球旋转，最终凝聚成现在的月球。
月亮太小，几乎没有大气，所以在太阳系中，月球表面经常受到其他小行星的撞击，形成大小陨石坑。
2、火星的卫星
1877年，霍尔(AsaphHall)发现了两颗火星卫星，这两颗卫星被称为火卫一(Phobos)和火卫二(Deimos)。Firefox距离火星表面的平均距离只有6000千米，相当于月球到地球平均距离的60分之一，是太阳系中距离木星最近的一颗卫星。
奇异知识：火卫一在3个方向上最大的尺寸为：27千米，22千米和18千米。在3个方向上，火卫二最大尺寸为15公里，12.2公里，11公里。火箭一周环绕火星，以每7小时39分的速度从火星西边升起并向东降落。同时火星的自转周期为24小时40分钟。这就是说，每隔火星一周，火卫一就能绕火星3圈。这是太阳系中唯一一颗自转周期小于母星的卫星。
一九六九年，NASA的水手七号探测器掠过火星，拍摄到第一张火卫一照片。一九七六年，NASA的海盗一号在火星表面着陆，第二年，海盗一号给火卫一拍了一张更清晰的照片，照片中，火卫一上方有一个陨石坑，是一颗天体撞击它时留下的，它几乎将火卫一撞毁。
在距离火星约3千万到5千万年后，火卫一将会撞上火星，或者被火星的引力撕裂，不再存在。
02
木星、天王星的卫星介绍
1、木星卫星的介绍
1609年，伽利略用他自己制造的天文望远镜观察木星，发现木星上有4颗卫星，其后人将其命名为木卫一(Io)、木卫二(Europa)、木卫三(Ganymede)和木卫四(Callisto)。后来，天文学家相继发现了许多新的卫星。到2021年为止，共发现79颗木星卫星，其中63颗直径在10公里以内，形状不规则。
其中最大的卫星还有四颗伽利略卫星，木卫三不仅是木星和太阳系中最大的卫星，而且是太阳系中最大的一颗，其直径达到5268千米，超过水星半径的三分之一。在这几年，木卫二受到了特别的注意，因为在其表面冰下的猜测可能是由水组成的海洋，其中可能有生命存在。据哈勃木卫三拍的照片，人们还推测木卫三的地下还有一片巨大的海水。
2、天王星的卫星
截至2020年，天文学家已经发现了27颗卫星，它们都是以莎士比亚和Pope作品中的人物命名的。最大的天文学卫星天卫三号(Titania)，其半径为394公里，在天王星被发现的当天被发现。天卫一(Ariel)也是一个更大的卫星，其半径为289公里。天王星也有环，只是不太明显。
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海王星和冥王星卫星介绍
1、海王星的卫星
迄今为止，天文学家已经发现了海王星的14颗卫星，其中的“海卫一”(Triton)在海王星被发现17天后被发现，而另外13颗直到1981年开始世纪：1981年，海卫七被发现；1989年，旅行者2号在海王星被发现时发现了6颗海王星卫星；2002至2003年，一个国际研究小组利用两台地面望远镜发现了5颗海王星卫星；2013年，天文学家在哈勃拍摄的照片中发现了海王星的第14颗卫星。
在海王星的卫星中，海卫一是唯一能保持其球形的卫星。更奇怪的是，海卫一是卫星逆行，所以天文学家认为这是一个单独的物体，在经过海王星附近时，它被海王星的引力捕获，从而变成了卫星。还有海卫二(Nereid)，轨道扁平，与海王星距离最远的距离只有7倍。
2、冥王星的卫星
布鲁托有多个卫星，最大的卫星是卡戎，于1978年6月22日被天文学家发现。卡戎的半径是606公里，仅仅是冥王星半径的一半。
卡戎的体积相当于冥王星体积的8分之一。若两者密度相等，则卡戎的质量也相当于冥王星的8倍。实际上，卡戎的质量相当于冥王星质量的百分之12.2，非常接近于8分之1，这表明两者的密度几乎相当。
卡戎和冥王星围绕着公共中心旋转，而卡戎的轨道几乎呈圆形，其轨道半径约为1.96万千米。从地面望远镜拍摄到的照片显示，这两个物体连接在一起，而哈勃观测冥王星和卡戎。
1990年，带病工作的哈勃第一次观测到了卡戎和冥王星，拍到的照片首次显示了两个完全分离的圆盘天体。
在1993年修复后，哈勃在1994年再次拍摄冥王星时，得到了两个更清晰的圆盘，显示了哈勃无与伦比的分辨率。
3、冥王星的新卫星
哈勃拍摄到2005年5月15日的时候，冥王星发现了两颗新卫星。这一发现是在2006年哈勃拍摄的图像中得到证实的。它们分别被命名为冥卫二号(Nix)和冥卫三(Hydra)，冥卫二最长的方向长50千米，而冥卫三最长的方向则是51千米，两者大小差不多。
六月二十八日，天文学家在用哈勃搜索冥王星的环时，发现了冥王星的第四颗卫星，即冥卫四，而冥卫四的距离只有19千米。
2012年7月11日，天文学家利用哈勃望远镜发现了冥王星的第五颗卫星——冥卫五，而冥卫五的距离只有16千米。在那时，天文学家们搜索冥王星附近地区的动机是寻找可能威胁到新视野飞船的物体。
有理论认为，冥王星和卡戎曾经是两个完全无关的物体，但是在某一时刻，小星体撞向太阳，造成大量碎片，然后冷却，原来大的天体和小的天体分别成为冥王星和卡戎，它们喷溅出的一些碎片变成了冥王星和卡戎，它们喷溅出的一些碎片变成了冥王星。
结语：卫星就像每一颗行星的保护者一样，围绕着行星进行旋转，这些卫星也有着自己的特点，对于卫星的研究可以更好地让我们了解宇宙，从而对宇宙进行更深的研究，只有这样我们才能征服宇宙。喜欢电话簿就关注我吧！欢迎点赞、收藏、评论和转发呀！ https://t.cn/R2WxlNJ
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