可以很容易地通过荧光法追踪4A）。pH高于6.5时，与MIANS（4 M）的反应速率随pH达到最大速率（pH 8.5）和200-300 s内的最大荧光而增加（图4A）。在pH 9下获得的结果与在pH 8.5下获得的结果非常相似，增加MIANS的浓度对最大荧光水平没有影响，表明所有Cys残基均已修饰。在环VII-VIII的K221C位和环V-VI的N177C位得到了与MIANS的非常相似的反应模式（数据未显示）。此外，在这些位置的反应的pH依赖性与与NEM的反应的pH依赖性非常相似（数据未显示）。
显然，类似于其对反转运蛋白活性的pH依赖性和在Lys249位置的构象变化的作用，如用胰蛋白酶检测的，Glu252的Cys置换引起碱转变为在E252C位置对MIANS的可及性。MIANS对E252C的标记率显着提高，尤其是Na和Li的增加-因为E252C将反转运蛋白的K m增加至其特定的配体Na和Li，我们测试了Na对速率的影响 MIANS标记NhaA蛋白的过程。在这些实验中，将离子以指定的浓度添加到用于MIANS标记的反应混合物中（图5）。
FILORGA菲洛嘉时光抗皱面霜50ml
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菲洛嘉
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