#Shionari的生化研讨室#
第11期：蛋白特定Lys位点的酰基化修饰【渣浪今天放我一马】

上个月的Nature Chemistry上登载了一篇介绍如何对蛋白特定位点（绝大部分是赖氨酸Lys）进行酰基化修饰的研究。

蛋白质酰基化在生化层面上起到不少关键作用，其中包括了泛素化（26S蛋白酶体降解，作用位点识别，复合体组装等）和SUMO化（定位，DNA修复等）。然而，目前还没有很好的办法来操控这些过程，让他们只在特定位点发生反应，而一个蛋白若有多个这种位点，就很难将他们分开独立进行研究。

他们组利用人体内天然存在的E2-SUMO偶联酶Ubc9，加上他们设计的probe，构建出了用一步法在蛋白特定Lys位点添加酰化基团的系统，取名为LACE。选择Ubc9的原因，是因为它能够不依赖E3就对SUMO motif进行识别和反应。至于这个probe怎么设计的，是参照ATP活化后的E1-Ubl而模仿的硫酯类中间体，其中的肽段试了多种SUMO亚型但效果都不太好，而用泛素末端的肽段（LRLRGG）效果反而出乎意料的好。最后的probe就变成了图2左边那个样子。

识别修饰位点（被酰化的位置，称为LACE tag）最少有4个连续的氨基酸：ΨKXD/E,其中Ψ表示疏水aa,D/E表示酸性aa，X表示任意。LACE tag可以在N端，C端，或者中间位置。如果存在多个符合条件的位点则都可以被修饰。

到这里为止都只是尝试在特定位点加上泛素末端的各种小肽段，并用荧光团检验反应特性。成功之后，他们下面就开始尝试能不能用这个方法对目的蛋白添加整个泛素。首先要准备2-巯基乙烷磺酸泛素作为酰基供体，并在目的蛋白的特定Lys周围通过点突变方法构建表达含LACE tag的重组蛋白。对α突触核蛋白（帕金森病中的致病蛋白，存在多个单泛素化位点）的实验可以看到，反应只在构建好LACE tag的Lys96或Lys102上发生，证明了这一系统的有效性（图3），同时也为某些蛋白的泛素修饰研究提供的格外简便的研究方法。

【写给自己：如果以后要研究泛素相关功能记得回来精读这篇文章】

那位喜欢周杰伦的女生，刚才我把她的朋友圈翻到了底。从14年开始，几乎每个月都会发一到两条关于周杰伦的动态，演唱会的视频repo，周杰伦写给自己或他人的歌，甚至转发早几百年前的绯闻，其中也有很多公众号的文章（几乎都是乱写的，大概是因为周杰伦所以她才这么轻易相信，有点好笑又有点可爱），但差不多18年开始频率就变低了，好几个月才找到一条和周杰伦有关的消息。而上一条则是六月份新歌发行时，她po了一首《超人不会飞》，配字依旧在维护他，这就是最后的怜爱了。我不知道她以后还会不会为了他的新动态欣喜，他不再活跃，人们也不再执着，花期似乎结束了，曾经那些温柔的生机的世俗的，我在他那里获得的无比安全的浪漫，现在却让我产生了敌意。我爱的东西把我打捞起，却又把我沉入万丈海底。

写给自己的一封信，我不知道等再过一段时间我看到这段文字会怎么想，先不管了，先让我发泄一下吧！
最近压力好大，工作生活一塌糊涂，谁都没顾上，手里也没有多余的钱，我是一个没有安全感的人，手里没多余的钱放在这里心里好不踏实。这是自参加工作以来从未有过的感觉。
我没想到自己有这么一天，一直总在想只要我好好工作就可以赚到钱就可以养好家，可现在，我竟然信用卡要分期了，每到月底或月初支付宝的花呗，信用卡的提醒，房贷的提醒，还帮别人垫了一笔货款，弄得我焦头烂额，心思安定不下来，可我已经很拼了，我感觉再这样奋进下去我会崩溃，我会彻底自我放弃，我有时候感到胸口闷得慌，现在的我已经很激进了，已经很努力了，我快要爆炸了，可没人理解我，任何一件事不管大小做不好都会影响到我的心情，成天提心吊胆的，让我念念不忘，就算是周末我也忘不掉工作上没处理好的事，我也一直在思考是我做的不够好还是因为我能力不足。
工作12年，我从未像别人一样想休息休息，更没有想离开就离开，更没有任性过想辞职就辞职，就算是生孩子。因为家里缺钱，家里不能少了我这份收入，也就是说我应该没有因为自己活过，这段时间我也一直在试着调节自己，可这次我真的好像坚持不住了，不能再像以前可以走出来。
我想离开，想逃脱，想放下这种紧张的生活和工作，可家里没有让我放弃的勇气和底气。
我曾经试探着说想要休息休息，家里回了句，如果现在……挺好，我明白………。其实我有时候非常恨，恨自己出生在这样一个家庭，让我要负担这么多，让我承受这么大的压力，我凭什么就不能正常一点，想哭就哭想笑就笑，想离开就离开，想怎样就怎样，想任性并不是攀比，是我太累了，我只不过是想放松一下，可是我不能，工作不能生活不能！