实验四 人体血涂片的制作与读片
一．涂片
（一）血液涂片的制作
（1）需载玻片2张，分别称为玻片1和玻片2（推片）。
（2）用玻片1一端接约3mm直径的血滴，将此玻片1保持水平。
（3）取另一边缘平整的载玻片2（推片），将其前端放在血滴前，与片1保持30°角并稍向后移与血滴接触，即见血液沿片2（推片）下缘散开，使血液展开并充满整个推片的宽度。
（4）立刻将推片与载玻片呈30°角，边轻压推片边将血液按下图的箭头方向推动涂抹，至血液铺完血膜为止。
（5）挥动片1使血膜吹干，用蜡笔将血膜边缘圈画备染色。
（6）每一人涂片至少一张。
（7）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明。
（8）置30min～1h后较利于观察红细胞的形态。
注意事项：
如标本本身太短，可观察的部分会受局限，故以在离开载玻片另一端2cm地方涂抹为宜。
载玻片、推片的角度越小、血液越薄；涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹贫血病人的血液时，将推片稍竖起（不是30°而是35°～40°左右），以较快的速度推比较好，而对红细胞增高的病人则相反。
如用力过猛白细胞容易破损。
二．染色
血液涂片的染色
（1）将待染涂片平放于染色架上。
（2）用滴管将染液滴于涂片上，覆盖整张涂片，放置1～3分钟。
（3）加入等量的磷酸缓冲液或蒸馏水，与染液混匀，可以用滴管从一端吸入，另一端放出，混匀为止，或用嘴来回轻轻吹之，使之混匀，室温下染色5～10分钟（白细胞数多或骨髓标本时间应长一些，如20～30min）。
（4）染色结束时，先用蒸馏水或缓冲液洗将涂片上的染液直接冲掉。
（5）再将片子用自来水温和冲洗，至血液膜呈淡红色。
（6）甩干或晾干玻片。
（7）封片。
血涂片的观察方法
1．肉眼观察
在观察染色标本时，首先用肉眼对颜色进行观察。如果是正常的末梢血液则呈粉红色，白血病时白细胞高度增加或骨髓瘤的高γ球蛋白血症等情况下，血涂片会带有蓝色，此时应意识到为异常标本。
2．高倍镜下观察
首先观察血涂片制备和染色是否良好、细胞分布是否均匀，同时可估计白细胞数量增减情况。最后对血涂片的体尾交界的区域进行观察，选择细胞分布均匀不重叠、标本不太厚容易观察的地方进行油镜观察。
3．油镜下观察 边移动视野边观察下列各项：
1）染色是否良好：如果血涂片染色确实不好，应重新染色。
2）观察红细胞形态：
（1）有无人为造成的变形，此外有时载玻片上的碱性物质的溶出（玻璃效应）会导致红细胞呈严重的棘形红细胞。如固定不良（固定液中含有水分时）会导致呈面包圈形红细胞，从而无法观察红细胞的形态。
（2）大小如何，是大细胞还是小细胞，有无红细胞大小不一。
（3）形态如何，注意有无畸形红细胞、球形红细胞、椭圆新红细胞、靶形红细胞、口形红细胞（唇形红细胞）、中心淡染色红细胞、棘形红细胞、胆状红细胞、皱缩红细胞、泪滴状红细胞、破碎红细胞及镰状红细胞等。
（4）是否有染色性的变化，有无嗜多色性红细胞，中心淡染红细胞。
（5）红细胞内有无异常。观察是否有嗜碱性点彩、豪-乔小体、卡波环状体红细胞、幼红细胞、帕彭海姆氏小体和疟原虫的出现。
（6）有关大小不一，畸形和嗜多色性，可分为轻度±、中度++、高度三个级别。
3）观察白细胞形态
（1）与红细胞比较，判断白细胞数是否正常，是否增加或减少。红细胞数/白细胞数约为500：1。
（2）有关白细胞的种类，要观察大量的白细胞后才可判断是否异常，然后计算白细胞的百分率。在日常检查中，一般只计算100个，但是发现异常或白细胞有增加时，尽量增加到200个。计算的白细胞数越多，白细胞百分率的可信度越高。
4）观察血小板形态
（1）通过与红细胞的比较，判断血小板数量是否正常，是增加或减少。正常情况下每15～20个红细胞中有1个血小板。
（2）注意大小的变化。
（3）观察未加抗凝剂而直接从毛细血管采集的标本时，要注意血小板的凝集性（观察由若干血小板凝集的现象。如果呈散在状，则怀疑为血小板无力症）。
（4）观察有无寄生虫，当白细胞减低或白细胞分类中单核细胞增多时，应注意观察红细胞内有无疟原虫。
实验结果
1．数码拍照
（1）依次在低倍（×10）、高倍（×40）、油镜（×100）下观察红细胞、白细胞以及血小板正常与异常的变化。
（2）用数码相机拍摄不同倍数下的细胞照片。
（3）输入电脑，比较分析各组间的差异。
红细胞呈桔红色，白细胞核紫色，嗜酸颗粒细胞鲜红色，嗜碱颗粒细胞蓝紫色，中性颗粒细胞紫或紫红色，淋巴细胞及单核细胞浆蓝灰色，血小板紫色。
2．注意事项：
1．染色涂片水冲洗后，应在空气中自然干燥或风干，不可用火烤干。
2．染液量要充足，勿使染液蒸发干燥。
3．细胞染色过浅或过深，待标本干燥后，立即用瑞氏染液或甲醇重新染色数秒或数分钟。
4．保存过久的细胞涂片，细胞染色会退色，可重新染色。
5．新鲜涂片应立即染色。
实验反思：
这次试验比较简单，但是扎手指出血量比较少，扎了三次才获得比较满意的结果。推片时没有掌控好力度，因此载玻片上的血细胞分布不够均匀，但是不影响观察、记录。封片时应在玻片洁净处做好标记，以便后续查看。
一．涂片
（一）血液涂片的制作
（1）需载玻片2张，分别称为玻片1和玻片2（推片）。
（2）用玻片1一端接约3mm直径的血滴，将此玻片1保持水平。
（3）取另一边缘平整的载玻片2（推片），将其前端放在血滴前，与片1保持30°角并稍向后移与血滴接触，即见血液沿片2（推片）下缘散开，使血液展开并充满整个推片的宽度。
（4）立刻将推片与载玻片呈30°角，边轻压推片边将血液按下图的箭头方向推动涂抹，至血液铺完血膜为止。
（5）挥动片1使血膜吹干，用蜡笔将血膜边缘圈画备染色。
（6）每一人涂片至少一张。
（7）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明。
（8）置30min～1h后较利于观察红细胞的形态。
注意事项：
如标本本身太短，可观察的部分会受局限，故以在离开载玻片另一端2cm地方涂抹为宜。
载玻片、推片的角度越小、血液越薄；涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹贫血病人的血液时，将推片稍竖起（不是30°而是35°～40°左右），以较快的速度推比较好，而对红细胞增高的病人则相反。
如用力过猛白细胞容易破损。
二．染色
血液涂片的染色
（1）将待染涂片平放于染色架上。
（2）用滴管将染液滴于涂片上，覆盖整张涂片，放置1～3分钟。
（3）加入等量的磷酸缓冲液或蒸馏水，与染液混匀，可以用滴管从一端吸入，另一端放出，混匀为止，或用嘴来回轻轻吹之，使之混匀，室温下染色5～10分钟（白细胞数多或骨髓标本时间应长一些，如20～30min）。
（4）染色结束时，先用蒸馏水或缓冲液洗将涂片上的染液直接冲掉。
（5）再将片子用自来水温和冲洗，至血液膜呈淡红色。
（6）甩干或晾干玻片。
（7）封片。
血涂片的观察方法
1．肉眼观察
在观察染色标本时，首先用肉眼对颜色进行观察。如果是正常的末梢血液则呈粉红色，白血病时白细胞高度增加或骨髓瘤的高γ球蛋白血症等情况下，血涂片会带有蓝色，此时应意识到为异常标本。
2．高倍镜下观察
首先观察血涂片制备和染色是否良好、细胞分布是否均匀，同时可估计白细胞数量增减情况。最后对血涂片的体尾交界的区域进行观察，选择细胞分布均匀不重叠、标本不太厚容易观察的地方进行油镜观察。
3．油镜下观察 边移动视野边观察下列各项：
1）染色是否良好：如果血涂片染色确实不好，应重新染色。
2）观察红细胞形态：
（1）有无人为造成的变形，此外有时载玻片上的碱性物质的溶出（玻璃效应）会导致红细胞呈严重的棘形红细胞。如固定不良（固定液中含有水分时）会导致呈面包圈形红细胞，从而无法观察红细胞的形态。
（2）大小如何，是大细胞还是小细胞，有无红细胞大小不一。
（3）形态如何，注意有无畸形红细胞、球形红细胞、椭圆新红细胞、靶形红细胞、口形红细胞（唇形红细胞）、中心淡染色红细胞、棘形红细胞、胆状红细胞、皱缩红细胞、泪滴状红细胞、破碎红细胞及镰状红细胞等。
（4）是否有染色性的变化，有无嗜多色性红细胞，中心淡染红细胞。
（5）红细胞内有无异常。观察是否有嗜碱性点彩、豪-乔小体、卡波环状体红细胞、幼红细胞、帕彭海姆氏小体和疟原虫的出现。
（6）有关大小不一，畸形和嗜多色性，可分为轻度±、中度++、高度三个级别。
3）观察白细胞形态
（1）与红细胞比较，判断白细胞数是否正常，是否增加或减少。红细胞数/白细胞数约为500：1。
（2）有关白细胞的种类，要观察大量的白细胞后才可判断是否异常，然后计算白细胞的百分率。在日常检查中，一般只计算100个，但是发现异常或白细胞有增加时，尽量增加到200个。计算的白细胞数越多，白细胞百分率的可信度越高。
4）观察血小板形态
（1）通过与红细胞的比较，判断血小板数量是否正常，是增加或减少。正常情况下每15～20个红细胞中有1个血小板。
（2）注意大小的变化。
（3）观察未加抗凝剂而直接从毛细血管采集的标本时，要注意血小板的凝集性（观察由若干血小板凝集的现象。如果呈散在状，则怀疑为血小板无力症）。
（4）观察有无寄生虫，当白细胞减低或白细胞分类中单核细胞增多时，应注意观察红细胞内有无疟原虫。
实验结果
1．数码拍照
（1）依次在低倍（×10）、高倍（×40）、油镜（×100）下观察红细胞、白细胞以及血小板正常与异常的变化。
（2）用数码相机拍摄不同倍数下的细胞照片。
（3）输入电脑，比较分析各组间的差异。
红细胞呈桔红色，白细胞核紫色，嗜酸颗粒细胞鲜红色，嗜碱颗粒细胞蓝紫色，中性颗粒细胞紫或紫红色，淋巴细胞及单核细胞浆蓝灰色，血小板紫色。
2．注意事项：
1．染色涂片水冲洗后，应在空气中自然干燥或风干，不可用火烤干。
2．染液量要充足，勿使染液蒸发干燥。
3．细胞染色过浅或过深，待标本干燥后，立即用瑞氏染液或甲醇重新染色数秒或数分钟。
4．保存过久的细胞涂片，细胞染色会退色，可重新染色。
5．新鲜涂片应立即染色。
实验反思：
这次试验比较简单，但是扎手指出血量比较少，扎了三次才获得比较满意的结果。推片时没有掌控好力度，因此载玻片上的血细胞分布不够均匀，但是不影响观察、记录。封片时应在玻片洁净处做好标记，以便后续查看。
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