#慕梓的电子日记簿[超话]#
D32
1⃣️换脱钙液
在2楼细胞室拿两个5mL枪头，
把四个板子从37℃摇床上拿下来，
把旧液体吸走，然后加2mL新的17%EDTA脱钙液
❌
1.把一个骨头忘切了，还完完整整地放在里面！[二哈][二哈][二哈]救大命了大失误[失望][失望]师兄补救的时候说骨头都已经软了不好切了
2.用5mL枪的时候稳一点，慢吸慢打。不然像我今天一样，给冲出去了
3.注意枪的数，本来调好的2mL打着打着变成2.8mL了，再打着打着变成3mL了[污]救命我太愚钝了

摇床的参数的设定

#慕梓的电子日记簿[超话]#
D30 11.13
1⃣️脱钙
把在福尔马林里泡着的组织（关节➕上下两骨）用长镊子夹出来，泡进装着pbs的塑料盒里，用眼科镊和刀片把肉都刮走，再把它放进12孔板里。12孔板里每个孔装5mLEDTA，详见p1. 做好标记。标记最重要
然后脱10天的钙，放37℃摇床上，其中每一天换一次液
✍︎在福尔马林里泡着的组织可以常温泡两年

#慕梓的电子日记簿[超话]#
D26 11.3
1⃣️收样 其实就是蛋白提取，和RNA提取
19:00先把台子照上
蛋白提取
在外面配置提取蛋白的液体。上次的在这儿https://t.cn/A6xZCZa2
（因为要重复两次嘛，这次是重复的第一次，以后还要再做一次[馋嘴]因为细胞是SW1353，比较小，所以打算把六孔板的两个孔合在一起。）
cocktail : RIPA 1:100
cocktail 六孔板的每个孔加150μL，6个孔4个板，就是150×6×4=3600，怕损耗，所以配4000μL. 1.5mL离心管里加10μL。
所以RIPA在1.5mL离心管里加 1mL
配好后。振荡，不要猛摇。不然产生气泡了

完了以后在超净工作台，六孔板的一个孔里加配好的100微升

RNA提取
详见师兄发的文件[打call]p1就做了第一步
在超净工作台：用pbs 冲洗，每孔0.8-0.9mL。然后调到1mL大量程，吸走。
RNA提取，每个孔加500微升，因为细胞少，要把两个孔合一起。
提取RNA用的Trizon RNA裂解液，是美国原版，有专利，中国盗版叫trizol[doge]咱用的就是这便宜的[doge][doge]详见p2p3
RNA的反转、扩增都得在创新港做

2⃣️BCA定量
实验思路和上一次一样，但是用的是新盒子新试剂，就是人家已经配好的，咱直接加就行[awsl]
酶标仪电脑上的操作p4p5