【建筑节能相关行业“热度不均” 规模化应用仍需时日】
日前，国家住建部发布《“十四五”建筑节能与绿色建筑发展规划》（简称《发展规划》），对建筑节能改造面积、装配式建筑新建比例以及太阳能光伏装机容量等做出了相关规划。同时，相应的《建筑节能与可再生能源利用通用规范》（简称《通用规范》）将于4月1日开始正式实施，该规范属于住建部“全文强制性”文件。
受此影响，建筑节能板块相关个股掀起一轮普涨，记者注意到，以建筑、节能玻璃、遮阳产品等相关公司最为活跃。近年来，节能环保愈发成为各行业发展的重要方向，那么在建筑领域，相关行业当前发展状况如何？
日前，证券时报·e公司记者联系相关公司了解情况，与二级市场的火热程度相比，行业经营并未遇到较大的爆发增量，相关产品的产销较为平稳，“政策确实为行业提供了非常好的发展前景，但在目前的时间节点上，不会突然间有较大的变动体现在业绩上，市场对政策的反应还需要一定过程。”业内人士告诉记者。
不过值得注意的是，在产业链上的一些细分行业，由于节能环保的需求升级，确实也出现了产品供不应求的现象。
节能玻璃产销平稳
据了解，建筑领域是玻璃行业首要的应用领域，在建筑节能环保方面，近年来Low-E玻璃（低辐射节能玻璃）产品应用广泛，其主要用途以商用建筑和民用建筑为主，特别是商用建筑玻璃幕墙上基本上采用Low-E玻璃。
申万宏源证券研报指出，“双碳”背景下我国建筑节能标准将不断提高，预计随着政策的不断催化将会继续推升Low-E玻璃在新增和存量建筑的渗透率，中长期看，新竣工房屋叠加存量房屋置换将支撑每年7.53亿平方米Low-E玻璃需求量。
不过，位于华东地区的一家玻璃制造企业的相关负责人向记者表示，暂时来看，Low-E玻璃由于原材料玻璃原片价格较贵，产品盈利能力并不强。“未来前景应该是可以的，但是产品起量的话，我估计还得等一等，没那么快。”
该负责人认为，尽管《通用规范》将在4月1日强制执行，但短期内下游对于Low-E玻璃的需求量不会出现一个猛然增加的现象。“首先，虽然新建建筑物需要强制使用节能玻璃，但新建建筑物本身在设计的时候，他就考虑到《通用规范》实行的这个因素了，所以预先有的订单就订购了节能玻璃。其次，此前虽然没有强制执行，但是很多大公司也会使用节能玻璃，因为用普通玻璃，建筑的‘高大上’就体现不出来。所以，现在是平稳地过渡，还是按照订单式生产。”
此外，他提到，近年来，相关部门一直在对建筑节能进行鼓励倡导，《发展规划》中提到的很多内容并非首次。“目前，各地政府对这个事推动的力度比较大，并且在近一年两年一直在鼓励使用节能玻璃，所以不管是生产企业还是下游的施工企业，一直是按照这个要求去做的，只不过现在要强制执行了，不仅是高端建筑要用，普通建筑也要用，实际上业内的应用已经比较多了，未来的增量会在普通建筑上。”
在价格方面，当前Low-E玻璃价格保持稳定，有业内人士向记者指出，“因为Low-E玻璃上游圆片比较贵，所以说它成本端比较高，它的下游主要针对商用建筑和民用建筑，而目前地产行业不景气销售不太好，所以涨价的逻辑还不成熟。但4月1日之后，随着政策逐渐传导，慢慢地会有一个放量的过程，未来这个产品肯定会水涨船高。”
另一方面，BIPV（光伏建筑一体化）也是建筑节能的一个重要方向，其中也涉及到光伏玻璃产品。据记者了解，目前光伏玻璃需求比较旺盛，同时生产厂商投放力度也比较大，价格维持在中等水平。
“目前光伏玻璃市场更偏成本，谁的成本低就有市场优势，其次看技术，谁的技术好大的组件厂商就用谁的。”业内人士表示。
其实从整个玻璃行业来看，浮法玻璃会呈现出更强的需求。“今年来自房地产的需求相对比较旺盛，因为2020年之前国家投资了一波房地产项目，这些项目两年才竣工，2020年上半年爆发疫情竣工期延后，所以，2022年相对来说玻璃的需求还比较旺盛。”
规模化应用仍需时日
建筑节能受到关注之下，建筑装饰企业首当其冲，日前，记者也向相关公司了解业内情况，相关企业负责人表示，由于建筑行业产业链比较长，政策要求在产业链上的传导需要推进时间，目前来看，业内对节能环保的相关政策规划是非常乐于迎合的，但实际中运作中还有许多具体问题亟待解决。
“从最近针对行业的这些文件上来看，体现的一个是国家适度超前新基建、新城建的战略，再一个是整体的从新建筑往建筑改造方面去大方向去转型。”一位建筑行业从业人士向记者表示。
“之前推行建筑节能牵扯到的一个行业痛点，就是不管是光伏幕墙也好，还是顶层光伏发电也好，造价成本相对较高，所以结合下游客户的建筑成本考量，他们会去考虑是否采用这方面技术或相应的材料。”该位人士称，“现在出台政策了，我们也会在这个方向上去更多地承接订单，甲方的规划也发生了一定的变化，需要他不光单纯考虑成本，还要考虑到节能以及政策要求，这样的话对于我们来说其实也是个好事。”
不过，他也指出，尽管政策上对相应的技术规范做出了规定，但规模化应用仍需要些时日。
“其实，行业内朝这个方向是已经很长时间了，超低能耗建筑这个概念很早就有，其它的同行业公司已经在布局和探索了，但还没有实现规模化的应用，问题可能就在盈利上。”该位人士进一步介绍，“类似于新能源汽车，行业也是布局多年，但直到市场需求爆发后，整个产业链有了正向的引导，所以产业链上的公司的利润率、产值等也随之增长，行业也就成长起来了。”
“从建筑行业发展的方向看，政策要求提高新建建筑和基础建筑的节能水平，推广超低能耗建筑和零能耗建筑建设，然后能源应用上推动太阳能、地热等方面规模化应用，这些传导到施工企业，我们的建造方式就要发生变化，包括大力发展钢结构、推动装配式、混凝土建筑、因地制宜的发展木结构，最终再到供应链上的材料供应商，他们就要加大绿色建材关键技术的研发投入，包括高强度的钢筋、高性能的混凝土以及装配式的具体材料等等。”他坦言，建筑行业产业链长，政策的传导需要一层层渗透，“首先在需求端，下游要适当提高成本，让节能建筑的需求提起来，同时，供应端每一个环节的绿色环保程度、实用性也要提升起来，为整个建筑节能大的板块行业去做服务，那么整个建筑节能领域才能够加速推进规模化实施。”
“不过就目前市场反映上，已经有不少甲方在招标文件的过程中，已经开始对建筑材料、施工技术做具体要求了。”他表示，随着相关政策的推进实施、双碳战略推进以及节能环保意识深入人心，建筑节能行业的发展会驶进快车道。
细分行业出现供不应求
根据《发展规划》，“十四五”时期建筑节能与绿色建筑发展明确了9项重点任务，包括提升绿色建筑发展质量、提高新建建筑节能水平、加强既有建筑节能绿色改造、推动可再生能源应用等方面。同时，规划还提出，到2025年，完成既有建筑节能改造面积3.5亿平方米以上，建设超低能耗、近零能耗建筑0.5亿平方米以上，装配式建筑占当年城镇新建建筑的比例达到30%，全国新增建筑太阳能光伏装机容量0.5亿千瓦以上，地热能建筑应用面积1亿平方米以上，城镇建筑可再生能源替代率达到8%，建筑能耗中电力消费比例超过55%。
有业内人士预期，对于既有建筑的改造，一方面难度较大，另一方面需要投资金额较高，一时间大规模推进或存在难度，目前来看，需求更多的是新建建筑。同时，各个地区对文件的解读不一致，也直接导致了对当地的建筑建设以及改造要求有所差异。
不过，该业内人士也表示，整体上相关文件对整个行业产生着正面影响。一直以来，建筑节能环保是相关行业发展的大方向，政策引导也是渐进式的进行，不断地渗透到产业链上各环节推进转型升级。
记者注意到，在如装配式建筑、节能材料应用等建筑节能方面，国外发达国家起步较早，反观目前国内相关市场，诸多行业仍有非常大的市场提升空间。目前，不少行业也在当前的节能环保升级趋势中获取到红利。
以功能性遮阳材料为例，建筑遮阳是建筑节能的主要措施之一，海外发达国家功能性遮阳材料的市占率为70%，而目前我国的该项比例仅为5%，随着节能环保意识提高，该材料在国内的需求快速增长。
功能性遮阳材料企业玉马遮阳的相关负责人向记者透露，目前公司各种产品的在手订单大约维持在3-5个月左右，处于供不应求的状态。该行业目前在我国规模还比较小，功能性遮阳产品的市场还属于初级阶段，在国家相关文件的推动下未来市占率会出现一个显著增长的态势。因此公司也正加快募投项目建设进度，争取早日投产达效，扩大公司产品市场覆盖率和占有率。
据记者观察，随着建筑节能在相关产业链上的传导，未来还会有一系列的细分行业在需求带动之下迎来高光时刻。
“目前，随着这一系列的行业政策相继出台，怎么在政策利好下，充分发挥自身优势，去勇于承接这方面的订单，这也是我们今年的发力点之一。”一位业内人士向记者表示，“对建筑节能的发展，业内在非常积极地去践行，因为低碳是行业的大方向和趋势，有了政策的指引，为行业和社会带来新的理念和升级，这个行业的前景是非常广阔的。”
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日前，国家住建部发布《“十四五”建筑节能与绿色建筑发展规划》（简称《发展规划》），对建筑节能改造面积、装配式建筑新建比例以及太阳能光伏装机容量等做出了相关规划。同时，相应的《建筑节能与可再生能源利用通用规范》（简称《通用规范》）将于4月1日开始正式实施，该规范属于住建部“全文强制性”文件。
受此影响，建筑节能板块相关个股掀起一轮普涨，记者注意到，以建筑、节能玻璃、遮阳产品等相关公司最为活跃。近年来，节能环保愈发成为各行业发展的重要方向，那么在建筑领域，相关行业当前发展状况如何？
日前，证券时报·e公司记者联系相关公司了解情况，与二级市场的火热程度相比，行业经营并未遇到较大的爆发增量，相关产品的产销较为平稳，“政策确实为行业提供了非常好的发展前景，但在目前的时间节点上，不会突然间有较大的变动体现在业绩上，市场对政策的反应还需要一定过程。”业内人士告诉记者。
不过值得注意的是，在产业链上的一些细分行业，由于节能环保的需求升级，确实也出现了产品供不应求的现象。
节能玻璃产销平稳
据了解，建筑领域是玻璃行业首要的应用领域，在建筑节能环保方面，近年来Low-E玻璃（低辐射节能玻璃）产品应用广泛，其主要用途以商用建筑和民用建筑为主，特别是商用建筑玻璃幕墙上基本上采用Low-E玻璃。
申万宏源证券研报指出，“双碳”背景下我国建筑节能标准将不断提高，预计随着政策的不断催化将会继续推升Low-E玻璃在新增和存量建筑的渗透率，中长期看，新竣工房屋叠加存量房屋置换将支撑每年7.53亿平方米Low-E玻璃需求量。
不过，位于华东地区的一家玻璃制造企业的相关负责人向记者表示，暂时来看，Low-E玻璃由于原材料玻璃原片价格较贵，产品盈利能力并不强。“未来前景应该是可以的，但是产品起量的话，我估计还得等一等，没那么快。”
该负责人认为，尽管《通用规范》将在4月1日强制执行，但短期内下游对于Low-E玻璃的需求量不会出现一个猛然增加的现象。“首先，虽然新建建筑物需要强制使用节能玻璃，但新建建筑物本身在设计的时候，他就考虑到《通用规范》实行的这个因素了，所以预先有的订单就订购了节能玻璃。其次，此前虽然没有强制执行，但是很多大公司也会使用节能玻璃，因为用普通玻璃，建筑的‘高大上’就体现不出来。所以，现在是平稳地过渡，还是按照订单式生产。”
此外，他提到，近年来，相关部门一直在对建筑节能进行鼓励倡导，《发展规划》中提到的很多内容并非首次。“目前，各地政府对这个事推动的力度比较大，并且在近一年两年一直在鼓励使用节能玻璃，所以不管是生产企业还是下游的施工企业，一直是按照这个要求去做的，只不过现在要强制执行了，不仅是高端建筑要用，普通建筑也要用，实际上业内的应用已经比较多了，未来的增量会在普通建筑上。”
在价格方面，当前Low-E玻璃价格保持稳定，有业内人士向记者指出，“因为Low-E玻璃上游圆片比较贵，所以说它成本端比较高，它的下游主要针对商用建筑和民用建筑，而目前地产行业不景气销售不太好，所以涨价的逻辑还不成熟。但4月1日之后，随着政策逐渐传导，慢慢地会有一个放量的过程，未来这个产品肯定会水涨船高。”
另一方面，BIPV（光伏建筑一体化）也是建筑节能的一个重要方向，其中也涉及到光伏玻璃产品。据记者了解，目前光伏玻璃需求比较旺盛，同时生产厂商投放力度也比较大，价格维持在中等水平。
“目前光伏玻璃市场更偏成本，谁的成本低就有市场优势，其次看技术，谁的技术好大的组件厂商就用谁的。”业内人士表示。
其实从整个玻璃行业来看，浮法玻璃会呈现出更强的需求。“今年来自房地产的需求相对比较旺盛，因为2020年之前国家投资了一波房地产项目，这些项目两年才竣工，2020年上半年爆发疫情竣工期延后，所以，2022年相对来说玻璃的需求还比较旺盛。”
规模化应用仍需时日
建筑节能受到关注之下，建筑装饰企业首当其冲，日前，记者也向相关公司了解业内情况，相关企业负责人表示，由于建筑行业产业链比较长，政策要求在产业链上的传导需要推进时间，目前来看，业内对节能环保的相关政策规划是非常乐于迎合的，但实际中运作中还有许多具体问题亟待解决。
“从最近针对行业的这些文件上来看，体现的一个是国家适度超前新基建、新城建的战略，再一个是整体的从新建筑往建筑改造方面去大方向去转型。”一位建筑行业从业人士向记者表示。
“之前推行建筑节能牵扯到的一个行业痛点，就是不管是光伏幕墙也好，还是顶层光伏发电也好，造价成本相对较高，所以结合下游客户的建筑成本考量，他们会去考虑是否采用这方面技术或相应的材料。”该位人士称，“现在出台政策了，我们也会在这个方向上去更多地承接订单，甲方的规划也发生了一定的变化，需要他不光单纯考虑成本，还要考虑到节能以及政策要求，这样的话对于我们来说其实也是个好事。”
不过，他也指出，尽管政策上对相应的技术规范做出了规定，但规模化应用仍需要些时日。
“其实，行业内朝这个方向是已经很长时间了，超低能耗建筑这个概念很早就有，其它的同行业公司已经在布局和探索了，但还没有实现规模化的应用，问题可能就在盈利上。”该位人士进一步介绍，“类似于新能源汽车，行业也是布局多年，但直到市场需求爆发后，整个产业链有了正向的引导，所以产业链上的公司的利润率、产值等也随之增长，行业也就成长起来了。”
“从建筑行业发展的方向看，政策要求提高新建建筑和基础建筑的节能水平，推广超低能耗建筑和零能耗建筑建设，然后能源应用上推动太阳能、地热等方面规模化应用，这些传导到施工企业，我们的建造方式就要发生变化，包括大力发展钢结构、推动装配式、混凝土建筑、因地制宜的发展木结构，最终再到供应链上的材料供应商，他们就要加大绿色建材关键技术的研发投入，包括高强度的钢筋、高性能的混凝土以及装配式的具体材料等等。”他坦言，建筑行业产业链长，政策的传导需要一层层渗透，“首先在需求端，下游要适当提高成本，让节能建筑的需求提起来，同时，供应端每一个环节的绿色环保程度、实用性也要提升起来，为整个建筑节能大的板块行业去做服务，那么整个建筑节能领域才能够加速推进规模化实施。”
“不过就目前市场反映上，已经有不少甲方在招标文件的过程中，已经开始对建筑材料、施工技术做具体要求了。”他表示，随着相关政策的推进实施、双碳战略推进以及节能环保意识深入人心，建筑节能行业的发展会驶进快车道。
细分行业出现供不应求
根据《发展规划》，“十四五”时期建筑节能与绿色建筑发展明确了9项重点任务，包括提升绿色建筑发展质量、提高新建建筑节能水平、加强既有建筑节能绿色改造、推动可再生能源应用等方面。同时，规划还提出，到2025年，完成既有建筑节能改造面积3.5亿平方米以上，建设超低能耗、近零能耗建筑0.5亿平方米以上，装配式建筑占当年城镇新建建筑的比例达到30%，全国新增建筑太阳能光伏装机容量0.5亿千瓦以上，地热能建筑应用面积1亿平方米以上，城镇建筑可再生能源替代率达到8%，建筑能耗中电力消费比例超过55%。
有业内人士预期，对于既有建筑的改造，一方面难度较大，另一方面需要投资金额较高，一时间大规模推进或存在难度，目前来看，需求更多的是新建建筑。同时，各个地区对文件的解读不一致，也直接导致了对当地的建筑建设以及改造要求有所差异。
不过，该业内人士也表示，整体上相关文件对整个行业产生着正面影响。一直以来，建筑节能环保是相关行业发展的大方向，政策引导也是渐进式的进行，不断地渗透到产业链上各环节推进转型升级。
记者注意到，在如装配式建筑、节能材料应用等建筑节能方面，国外发达国家起步较早，反观目前国内相关市场，诸多行业仍有非常大的市场提升空间。目前，不少行业也在当前的节能环保升级趋势中获取到红利。
以功能性遮阳材料为例，建筑遮阳是建筑节能的主要措施之一，海外发达国家功能性遮阳材料的市占率为70%，而目前我国的该项比例仅为5%，随着节能环保意识提高，该材料在国内的需求快速增长。
功能性遮阳材料企业玉马遮阳的相关负责人向记者透露，目前公司各种产品的在手订单大约维持在3-5个月左右，处于供不应求的状态。该行业目前在我国规模还比较小，功能性遮阳产品的市场还属于初级阶段，在国家相关文件的推动下未来市占率会出现一个显著增长的态势。因此公司也正加快募投项目建设进度，争取早日投产达效，扩大公司产品市场覆盖率和占有率。
据记者观察，随着建筑节能在相关产业链上的传导，未来还会有一系列的细分行业在需求带动之下迎来高光时刻。
“目前，随着这一系列的行业政策相继出台，怎么在政策利好下，充分发挥自身优势，去勇于承接这方面的订单，这也是我们今年的发力点之一。”一位业内人士向记者表示，“对建筑节能的发展，业内在非常积极地去践行，因为低碳是行业的大方向和趋势，有了政策的指引，为行业和社会带来新的理念和升级，这个行业的前景是非常广阔的。”
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#原代细胞是如何培养的？选择组织块还是消化液培养法？
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是极好的工具。
那么，原代细胞是如何培养的呢？
常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。
（一）组织块培养法
许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。
1. 设备材料
培养箱、冰箱、超净工作台／无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。
2. 操作步骤
（1） 在无菌条件下，取待培养的组织适量，置入小烧杯中， 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉组织块表面的血污。
（2）用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
（3）再用Hanks 溶液反复漂洗， 直至液体不混浊为止。等组织块下沉，将烧杯倾斜，用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml 青霉素、200μg/ml 链霉素）的培养液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培养液。
（5）用弯头吸管吸取组织小块，均匀地置于培养皿内表面，吸去多余的培养液，各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖，做好标记， 置37°C 的CO2培养箱内。
（6） 2~4h 后，于超净工作台中，缓缓地向培养皿中加入上述含20％血清及双抗溶液( 100U/ml 青霉素及100μg/ml 链霉素）的培养液少量，以使组织块浸没在培养液中。
（7）轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱， 如无特殊情况，不必观察。1~2 周后，可观察到细胞从组织块边缘长出，形成生长晕。
（9） 一般说来，若培养液无明显改变， 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面，即可进行传代培养。
3. 需要说明及注意的问题
（1） 如果是用培养瓶而不是培养皿，则接种组织块千培养瓶底壁后， 要轻轻地翻转培养瓶，令瓶底在上，盖好瓶盖后轻轻置入37°C 的CO2 培养箱， 2~4h 后，取出培养瓶，在超净工作台内打开瓶盖，仍令组织块在上方。在组织块对面瓶壁加入适量上述培养液。然后，轻轻翻转培养瓶，让组织块浸没于培养液中。盖好瓶盖后放回二氧化碳孵箱，继续培养。
（2） 从培养皿表面游离下来的组织块，弃去即可。
（3） 如果使用玻璃培养瓶，而不是新的塑料培养瓶，则最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾胶原，这样不但有利于组织块的黏附，而且可使细胞生长得更好。
（4）本方法适于各种组织的培养，操作者还可根据自己的实验需要和细胞种类加以修改。
（二）消化培养法
它与上述组织块培养法的主要区别有2 点。一要用酶制剂（最常用的是胰蛋白酶）处理组织块，除去细胞间质，使细胞相互分离，形成细胞悬液；二细胞生长方式多为单层( monolayer ) 。本方法的优点在于单层细胞更易摄取营养、排出代谢产物，因此生长较快，可较快地应用于实验研究；缺点是步骤颇为繁琐，操作不慎易污染。此外，消化处理要恰到好处，不然对细胞会有一定的损伤作用。
1. 操作程序
（1） 在无菌条件下， 取待培养的组织1cm3左右，置入平皿或烧杯中，以适量Hanks 溶液消洗3 次，去掉组织块表面的血污及结缔组织。
（2）以锋利的眼科剪将组织块反复剪碎，得到约0.5mm x 1mm 大小的小块。
（3）以Hanks 溶液冲洗数遍，稍候组织块下沉，吸除Hanks 溶液。
（4）用少量Hanks 溶液，将组织小块吸入预先置有无菌的磁力搅拌子的锥形烧杯中，再加入15~30ml 上述胰蛋白酶消化液。
（5）将锥形烧杯用橡皮塞盖紧，外封以锡箔。然后移至预先置入37°C 培养箱内的电磁搅拌器上。
（6）打开搅拌器的电源开关，使搅拌子旋转， 关好培养箱，让胰蛋白酶进行消化。
（7）在消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴于载片上，于光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散，立即加入适量Hanks 溶液，终止消化。通常需消化10~20min 。
（8）先以100μm 不锈钢筛过滤，滤去未消化的组织块或大细胞团（如获得的细胞量少，这些组织块可继续进行消化，以便取得较多细胞）。继以20μ 不锈钢筛过滤。
（9）将取得的滤液进行低速（每分钟500~ 1000 转）离心5min，吸除上清液。并用Hanks 溶液离心清洗1~2 次，最后加入含血清的培养液，搅匀，制成细胞悬液。
（10）用计数板计数，确定细胞悬液浓度，通常以1×105~3×105个接种于培养瓶或培养皿中。
2. 需要说明及注意的问题
（1） 用何种酶进行消化可视所培养细胞而定，除胰蛋白酶外，常用1 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞；用II 型胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
（2）如果没有不锈钢筛， 可用4 层纱布代替，但纱布要预先经高温高压灭菌。
（3） 严格地说，原代培养是指未经传代的细胞，但在实际工作中，人们常将10 代以内的细胞用作原代培养细胞，因为此时的细胞基本上保持着原有的生物学特性。
（4） 从原代培养的操作步骤不难看出，原代细胞中含有多种细胞成分，即它们是异质型( heterogeneity) 的群体，因此在设计实验及分析结果时，切勿忘记这一因素。
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是极好的工具。
那么，原代细胞是如何培养的呢？
常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。
（一）组织块培养法
许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。
1. 设备材料
培养箱、冰箱、超净工作台／无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。
2. 操作步骤
（1） 在无菌条件下，取待培养的组织适量，置入小烧杯中， 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉组织块表面的血污。
（2）用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
（3）再用Hanks 溶液反复漂洗， 直至液体不混浊为止。等组织块下沉，将烧杯倾斜，用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml 青霉素、200μg/ml 链霉素）的培养液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培养液。
（5）用弯头吸管吸取组织小块，均匀地置于培养皿内表面，吸去多余的培养液，各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖，做好标记， 置37°C 的CO2培养箱内。
（6） 2~4h 后，于超净工作台中，缓缓地向培养皿中加入上述含20％血清及双抗溶液( 100U/ml 青霉素及100μg/ml 链霉素）的培养液少量，以使组织块浸没在培养液中。
（7）轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱， 如无特殊情况，不必观察。1~2 周后，可观察到细胞从组织块边缘长出，形成生长晕。
（9） 一般说来，若培养液无明显改变， 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面，即可进行传代培养。
3. 需要说明及注意的问题
（1） 如果是用培养瓶而不是培养皿，则接种组织块千培养瓶底壁后， 要轻轻地翻转培养瓶，令瓶底在上，盖好瓶盖后轻轻置入37°C 的CO2 培养箱， 2~4h 后，取出培养瓶，在超净工作台内打开瓶盖，仍令组织块在上方。在组织块对面瓶壁加入适量上述培养液。然后，轻轻翻转培养瓶，让组织块浸没于培养液中。盖好瓶盖后放回二氧化碳孵箱，继续培养。
（2） 从培养皿表面游离下来的组织块，弃去即可。
（3） 如果使用玻璃培养瓶，而不是新的塑料培养瓶，则最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾胶原，这样不但有利于组织块的黏附，而且可使细胞生长得更好。
（4）本方法适于各种组织的培养，操作者还可根据自己的实验需要和细胞种类加以修改。
（二）消化培养法
它与上述组织块培养法的主要区别有2 点。一要用酶制剂（最常用的是胰蛋白酶）处理组织块，除去细胞间质，使细胞相互分离，形成细胞悬液；二细胞生长方式多为单层( monolayer ) 。本方法的优点在于单层细胞更易摄取营养、排出代谢产物，因此生长较快，可较快地应用于实验研究；缺点是步骤颇为繁琐，操作不慎易污染。此外，消化处理要恰到好处，不然对细胞会有一定的损伤作用。
1. 操作程序
（1） 在无菌条件下， 取待培养的组织1cm3左右，置入平皿或烧杯中，以适量Hanks 溶液消洗3 次，去掉组织块表面的血污及结缔组织。
（2）以锋利的眼科剪将组织块反复剪碎，得到约0.5mm x 1mm 大小的小块。
（3）以Hanks 溶液冲洗数遍，稍候组织块下沉，吸除Hanks 溶液。
（4）用少量Hanks 溶液，将组织小块吸入预先置有无菌的磁力搅拌子的锥形烧杯中，再加入15~30ml 上述胰蛋白酶消化液。
（5）将锥形烧杯用橡皮塞盖紧，外封以锡箔。然后移至预先置入37°C 培养箱内的电磁搅拌器上。
（6）打开搅拌器的电源开关，使搅拌子旋转， 关好培养箱，让胰蛋白酶进行消化。
（7）在消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴于载片上，于光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散，立即加入适量Hanks 溶液，终止消化。通常需消化10~20min 。
（8）先以100μm 不锈钢筛过滤，滤去未消化的组织块或大细胞团（如获得的细胞量少，这些组织块可继续进行消化，以便取得较多细胞）。继以20μ 不锈钢筛过滤。
（9）将取得的滤液进行低速（每分钟500~ 1000 转）离心5min，吸除上清液。并用Hanks 溶液离心清洗1~2 次，最后加入含血清的培养液，搅匀，制成细胞悬液。
（10）用计数板计数，确定细胞悬液浓度，通常以1×105~3×105个接种于培养瓶或培养皿中。
2. 需要说明及注意的问题
（1） 用何种酶进行消化可视所培养细胞而定，除胰蛋白酶外，常用1 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞；用II 型胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
（2）如果没有不锈钢筛， 可用4 层纱布代替，但纱布要预先经高温高压灭菌。
（3） 严格地说，原代培养是指未经传代的细胞，但在实际工作中，人们常将10 代以内的细胞用作原代培养细胞，因为此时的细胞基本上保持着原有的生物学特性。
（4） 从原代培养的操作步骤不难看出，原代细胞中含有多种细胞成分，即它们是异质型( heterogeneity) 的群体，因此在设计实验及分析结果时，切勿忘记这一因素。
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