【在中央阿尔卑斯山保护“神鸟”】
因日本自古以来的山岳崇拜，栖息在高山上的岩雷鸟曾被尊为神的使者。现在由于全球变暖造成的环境变化等各种因素，它们的栖息地受到了威胁。环境省、研究人员和动物园联手进行了保护和繁殖岩雷鸟的项目，目前已经取得一定成果。
——江户幕府时期的养殖尝试——
日本岩雷鸟（英文：Japanese Rock Ptarmigan）分布在本州中部的北阿尔卑斯山（飞驒山脉）和南阿尔卑斯山（赤石山脉）以及周围的山岳地区。在广泛分布于北半球寒冷地区的岩雷鸟物种中，它们孤立地分布于最南端的高山上。冬天，因为它们浑身被纯白色羽毛覆盖，所以在雪地里也很难被发现。它们一般不害怕人，与其他野生鸟类不同，即使靠近它们时也不会跑开。
日本自古就有山岳信仰，认为深山里住着神灵，而日本岩雷鸟一直被视为山神的化身，受到人们的保护。有些人认为，正是因为有这样的历史背景，所以岩雷鸟才会不惧怕人类。
在江户时代，岩雷鸟作为避雷的象征，还被制成了绘马。当时的加贺藩（现在的富山县和石川县）调查了生活在白山的岩雷鸟，并颁发对其保护的法令。第八代将军德川吉宗听说飞騨国（现在岐阜县北部）的乘鞍岳上有很多岩雷鸟，便试图捕捉和饲养它们。根据历史记录，还曾有过几次繁殖岩雷鸟的尝试，但均以失败告终。
——环境变化是数量骤降的原因——
明治维新后，修验道（日本的山中禁欲主义）被废除，对山的恐惧也随之淡薄，人们一度为了食用等目的而捕捉岩雷鸟。1910年岩雷鸟被指定为“狩猎禁止鸟兽”，1955年又被指定为“特别天然纪念物”。近年来，通常生活在低山的动物侵入岩雷鸟栖息的高地，形成新的威胁。鹿和野猪正在吞噬岩雷鸟赖以生存的高山植物，狐狸、貂、乌鸦和红隼等，新的捕食者也正在增加。
在1980年代的调查中，该种群的数量估算约为3000只，但在2000年代调查时发现已减少到不足2000只。自2012年环境省的濒危物种红色名录中将其列为的“濒危IB类”以来，已经制定并实施了一项保护和繁殖的计划。
在野外调查和保护活动中起核心作用的是信州大学的中村浩志教授（现为名誉教授），他持续20多年一直在研究岩雷鸟。在过去的10年里，信州大学研究生院研究员小林笃也一直参与支持了该项研究，自2020年4月起又作为环境省的栖息地保护合作专家延续着该项工作。
他说：“我与中村教授一起在超过3000米的高山上，调查了岩雷鸟从蛋到成鸟的各个阶段的存活率，研究了哪些阶段加以保护就能增加岩雷鸟数量。我们还对世界上最南端的岩雷鸟——日本岩雷鸟如何适应环境和进化，并能在日本的高寒环境中生息繁衍备感兴趣。自2015年以来，根据我们的研究，我们一直在实施中村教授设计的‘笼子保护’方法，以保护雏鸟免受恶劣天气和捕食者的伤害。”
——在中央阿尔卑斯山兴起的“复兴行动”——
岩雷鸟每次产6到7个蛋，但大致只有一个能成为成鸟。因其在梅雨季节末期孵化，如果天气恶劣，亲鸟将无法保护雏鸟免受寒冷和天敌的伤害。因此在孵化后的第一个月死亡率特别高，所以繁殖的关键是在这个时期保护雏鸟。
“正因为岩雷鸟不怕人，所以我们才能引导它们进入笼子。有时候需要花上两三天的时间，把它们从原来的鸟巢慢慢引到笼子里。并且每天在笼子里为它们准备饵食。我们住在当地的小屋里，晚上把它们引入到笼子里，到早上再把它们放出来自由觅食。这项工作从6月底雏鸟出生时就开始，一直要持续到8月初。”
岩雷鸟被认为在1960年代末已在中央阿尔卑斯山（木曾山脉）灭绝，但在2018年7月，一名登山者在中央阿尔卑斯山的驹岳发现了一只雌鸟。遗传分析表明，它可能是从种群相对稳定的乘鞍岳（横跨长野县和岐阜县）飞来的。这一发现催生了在中央阿尔卑斯山一带的 “复兴行动”，计划到2025年将岩雷鸟的个体数量增加到100只左右。2019年，来自乘鞍岳的野生个体的受精卵，以及在2020年又用动物园饲养的个体的受精卵，取代了这只雌鸟所产的无精卵。虽然它们都成功孵化成雏鸟，却因为恶劣天气和捕食者等原因，雏鸟最终还是全军覆没。
同时，在2020年8月，来自三个家庭的共19只岩雷鸟从乘鞍岳被运到中央阿尔卑斯山放生。在2021年7月，发现有10只雌鸟带着雏鸟，其中就有那只在2018年被确认的雌鸟。研究人员对其中5个家庭实施了“笼子保护”，其中的2个家庭最终被转移到那须动物王国（枥木县）和茶臼山动物园（长野县），其余3个家庭继续放归自然。
小林先生说：“我们打算先在动物园里进行繁殖，如果它们能返回到山上，就让其尝试回归野外。”
日本对朱鹮和东方白鹳的保护措施在它们濒临灭绝的时候开始的。目前在日本人工饲养繁殖的朱鹮来自中国，东方白鹳则是俄罗斯赠送的。
“一旦灭绝后再采取行动就太晚了。环境省、研究人员和动物园这次共同协作，趁着野生岩雷鸟仍有栖息地的情况下便开始保护和繁殖它们。我们过去也开展过类似的合作，但就实际成果而言，这是一个罕见的成功案例。”
——动物园在“物种保护”中的作用——
虽然环境省担纲岩雷鸟的保护和繁殖事业，但从2015年开始的生息域外保护则由日本动物园水族馆协会及下属动物园负责实施。在动物园实施的域外保护旨在将保存物种作为一项“保险”政策，通过育种和饲养积累科学知识，2018年生效的《物种保存法》的修正案，阐明了动物园在促进濒危物种保护方面的作用。
岐阜大学的楠田哲士副教授在动物园的岩雷鸟繁殖生理学研究中发挥了核心作用。他目前正在研究性激素、温度和照明条件之间的关系，以便饲养和繁殖。
“为了成功地进行域外保护，首先需要了解野生岩雷鸟的生态环境。通常情况下，性激素是从血液中分析出来的，但现在发现用粪便也是可行的，因此在中村教授和小林先生的协助下，从野外收集来粪便并对其进行了分析。另外，鸟类的繁殖受光照的影响，岩雷鸟在白昼变长时会进入繁殖期。日本岩雷鸟对光线特别敏感，所以需要建立尽可能接近野外的照明条件。温度控制也是一个挑战”。
楠田副教授的动物繁殖学实验室一直在参与动物园饲养稀有哺乳动物的域外繁殖项目，如“濒危IA类”物种之一的对马豹猫。2021年4月底，两只对马豹猫宝宝在开展共同研究的名古屋东山动物园出生。这是对马豹猫在该动物园里安全出生并成长的首次成功案例。
“我很高兴能成功地培育出了它们。对马豹猫的繁殖是相当困难的，因为每年往往只有1到2只出生。而岩雷鸟则每次产6到7个蛋，所以如果它们孵化顺利，笼子保护措施实施到位，就有可能有效地增加数量。”
——希望能在野外看到它们——
楠田副教授的大部分时间都在实验室和动物园度过的，他第一次在野外看到岩雷鸟是在2013年6月，当时他陪同中村教授前往乘鞍岳进行野外调查。
“我们恰好看到雌鸟在巢穴中孵化着蛋，而雄鸟在岩石上守护着它们。一般情况下很少有机会能看到孵化时的情景，但我们非常幸运，托中村教授的福，才能有此机遇。在壮丽的大自然中能观赏到野生动物的身影，真的让人非常激动啊。”
从那时起，他每年都会有1到2次带着学生们去乘鞍岳观察岩雷鸟。“当你在大自然中看到它们生息繁衍的样子，保护这些珍贵鸟类的决心就会更加强烈，在动物园的域外保护的方式也自然会有所改变。”
交通上，乘巴士就能到达乘鞍岳山顶周围的岩雷鸟栖息地。“每年的5、6月是建巢安家的季节，能看到雄性的岩雷鸟。到了7月，当卵开始孵化后，就有可能看到亲鸟带着雏鸟一起外出的情景。真的希望更多的人能在野外看到它们。”
——保护岩雷鸟就是保护大自然——
楠田副教授也正在积极地致力于提高人们对珍稀野生动物的认识，但他对岐阜县缺乏保护岩雷鸟的意识也感到担忧，因为该县是乘鞍岳和御岳山等岩雷鸟主要栖息的所在地。截至到2021年，日本全国有七个地方以动物园为中心开展了饲养繁殖事业，其中包括富山县和长野县，但岐阜县没有动物园。与富山县和长野县相比，岐阜县对保护项目的认知度非常低，这与动物园的宣传和公众接触密切度大有关联。尽管与富山县和长野县一样，岐阜县也将岩雷鸟指定为“县级鸟类”，但保护意识低下却是事实。
楠田副教授呼吁说：“岩雷鸟能够栖息的日本飞騨地区的高山生态系统，为南部的美浓地区带来了丰富的水源，并孕育了诸如香鱼之类的淡水鱼。我希望人们能够认识到，保护岩雷鸟也是与传承美浓和纸、鸬鹚养殖等文化及历史有着密切的关系。”
出于这样的考虑，2020年岐阜大学申办了“第19届岩雷鸟大会”。这次会议的目的，是分享和讨论以中村教授为中心，由环境省、岩雷鸟生息地的地方政府、动物园、大学研究人员等开展的各项相关工作，并向公众广泛传播这些信息。
有关人士的热情，让昔日的“神鸟”岩雷鸟作为大自然富饶的象征而得到保护和重生——这一天或许会很快到来。
全文请看日本网：https://t.cn/A6x4jIh0
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因日本自古以来的山岳崇拜，栖息在高山上的岩雷鸟曾被尊为神的使者。现在由于全球变暖造成的环境变化等各种因素，它们的栖息地受到了威胁。环境省、研究人员和动物园联手进行了保护和繁殖岩雷鸟的项目，目前已经取得一定成果。
——江户幕府时期的养殖尝试——
日本岩雷鸟（英文：Japanese Rock Ptarmigan）分布在本州中部的北阿尔卑斯山（飞驒山脉）和南阿尔卑斯山（赤石山脉）以及周围的山岳地区。在广泛分布于北半球寒冷地区的岩雷鸟物种中，它们孤立地分布于最南端的高山上。冬天，因为它们浑身被纯白色羽毛覆盖，所以在雪地里也很难被发现。它们一般不害怕人，与其他野生鸟类不同，即使靠近它们时也不会跑开。
日本自古就有山岳信仰，认为深山里住着神灵，而日本岩雷鸟一直被视为山神的化身，受到人们的保护。有些人认为，正是因为有这样的历史背景，所以岩雷鸟才会不惧怕人类。
在江户时代，岩雷鸟作为避雷的象征，还被制成了绘马。当时的加贺藩（现在的富山县和石川县）调查了生活在白山的岩雷鸟，并颁发对其保护的法令。第八代将军德川吉宗听说飞騨国（现在岐阜县北部）的乘鞍岳上有很多岩雷鸟，便试图捕捉和饲养它们。根据历史记录，还曾有过几次繁殖岩雷鸟的尝试，但均以失败告终。
——环境变化是数量骤降的原因——
明治维新后，修验道（日本的山中禁欲主义）被废除，对山的恐惧也随之淡薄，人们一度为了食用等目的而捕捉岩雷鸟。1910年岩雷鸟被指定为“狩猎禁止鸟兽”，1955年又被指定为“特别天然纪念物”。近年来，通常生活在低山的动物侵入岩雷鸟栖息的高地，形成新的威胁。鹿和野猪正在吞噬岩雷鸟赖以生存的高山植物，狐狸、貂、乌鸦和红隼等，新的捕食者也正在增加。
在1980年代的调查中，该种群的数量估算约为3000只，但在2000年代调查时发现已减少到不足2000只。自2012年环境省的濒危物种红色名录中将其列为的“濒危IB类”以来，已经制定并实施了一项保护和繁殖的计划。
在野外调查和保护活动中起核心作用的是信州大学的中村浩志教授（现为名誉教授），他持续20多年一直在研究岩雷鸟。在过去的10年里，信州大学研究生院研究员小林笃也一直参与支持了该项研究，自2020年4月起又作为环境省的栖息地保护合作专家延续着该项工作。
他说：“我与中村教授一起在超过3000米的高山上，调查了岩雷鸟从蛋到成鸟的各个阶段的存活率，研究了哪些阶段加以保护就能增加岩雷鸟数量。我们还对世界上最南端的岩雷鸟——日本岩雷鸟如何适应环境和进化，并能在日本的高寒环境中生息繁衍备感兴趣。自2015年以来，根据我们的研究，我们一直在实施中村教授设计的‘笼子保护’方法，以保护雏鸟免受恶劣天气和捕食者的伤害。”
——在中央阿尔卑斯山兴起的“复兴行动”——
岩雷鸟每次产6到7个蛋，但大致只有一个能成为成鸟。因其在梅雨季节末期孵化，如果天气恶劣，亲鸟将无法保护雏鸟免受寒冷和天敌的伤害。因此在孵化后的第一个月死亡率特别高，所以繁殖的关键是在这个时期保护雏鸟。
“正因为岩雷鸟不怕人，所以我们才能引导它们进入笼子。有时候需要花上两三天的时间，把它们从原来的鸟巢慢慢引到笼子里。并且每天在笼子里为它们准备饵食。我们住在当地的小屋里，晚上把它们引入到笼子里，到早上再把它们放出来自由觅食。这项工作从6月底雏鸟出生时就开始，一直要持续到8月初。”
岩雷鸟被认为在1960年代末已在中央阿尔卑斯山（木曾山脉）灭绝，但在2018年7月，一名登山者在中央阿尔卑斯山的驹岳发现了一只雌鸟。遗传分析表明，它可能是从种群相对稳定的乘鞍岳（横跨长野县和岐阜县）飞来的。这一发现催生了在中央阿尔卑斯山一带的 “复兴行动”，计划到2025年将岩雷鸟的个体数量增加到100只左右。2019年，来自乘鞍岳的野生个体的受精卵，以及在2020年又用动物园饲养的个体的受精卵，取代了这只雌鸟所产的无精卵。虽然它们都成功孵化成雏鸟，却因为恶劣天气和捕食者等原因，雏鸟最终还是全军覆没。
同时，在2020年8月，来自三个家庭的共19只岩雷鸟从乘鞍岳被运到中央阿尔卑斯山放生。在2021年7月，发现有10只雌鸟带着雏鸟，其中就有那只在2018年被确认的雌鸟。研究人员对其中5个家庭实施了“笼子保护”，其中的2个家庭最终被转移到那须动物王国（枥木县）和茶臼山动物园（长野县），其余3个家庭继续放归自然。
小林先生说：“我们打算先在动物园里进行繁殖，如果它们能返回到山上，就让其尝试回归野外。”
日本对朱鹮和东方白鹳的保护措施在它们濒临灭绝的时候开始的。目前在日本人工饲养繁殖的朱鹮来自中国，东方白鹳则是俄罗斯赠送的。
“一旦灭绝后再采取行动就太晚了。环境省、研究人员和动物园这次共同协作，趁着野生岩雷鸟仍有栖息地的情况下便开始保护和繁殖它们。我们过去也开展过类似的合作，但就实际成果而言，这是一个罕见的成功案例。”
——动物园在“物种保护”中的作用——
虽然环境省担纲岩雷鸟的保护和繁殖事业，但从2015年开始的生息域外保护则由日本动物园水族馆协会及下属动物园负责实施。在动物园实施的域外保护旨在将保存物种作为一项“保险”政策，通过育种和饲养积累科学知识，2018年生效的《物种保存法》的修正案，阐明了动物园在促进濒危物种保护方面的作用。
岐阜大学的楠田哲士副教授在动物园的岩雷鸟繁殖生理学研究中发挥了核心作用。他目前正在研究性激素、温度和照明条件之间的关系，以便饲养和繁殖。
“为了成功地进行域外保护，首先需要了解野生岩雷鸟的生态环境。通常情况下，性激素是从血液中分析出来的，但现在发现用粪便也是可行的，因此在中村教授和小林先生的协助下，从野外收集来粪便并对其进行了分析。另外，鸟类的繁殖受光照的影响，岩雷鸟在白昼变长时会进入繁殖期。日本岩雷鸟对光线特别敏感，所以需要建立尽可能接近野外的照明条件。温度控制也是一个挑战”。
楠田副教授的动物繁殖学实验室一直在参与动物园饲养稀有哺乳动物的域外繁殖项目，如“濒危IA类”物种之一的对马豹猫。2021年4月底，两只对马豹猫宝宝在开展共同研究的名古屋东山动物园出生。这是对马豹猫在该动物园里安全出生并成长的首次成功案例。
“我很高兴能成功地培育出了它们。对马豹猫的繁殖是相当困难的，因为每年往往只有1到2只出生。而岩雷鸟则每次产6到7个蛋，所以如果它们孵化顺利，笼子保护措施实施到位，就有可能有效地增加数量。”
——希望能在野外看到它们——
楠田副教授的大部分时间都在实验室和动物园度过的，他第一次在野外看到岩雷鸟是在2013年6月，当时他陪同中村教授前往乘鞍岳进行野外调查。
“我们恰好看到雌鸟在巢穴中孵化着蛋，而雄鸟在岩石上守护着它们。一般情况下很少有机会能看到孵化时的情景，但我们非常幸运，托中村教授的福，才能有此机遇。在壮丽的大自然中能观赏到野生动物的身影，真的让人非常激动啊。”
从那时起，他每年都会有1到2次带着学生们去乘鞍岳观察岩雷鸟。“当你在大自然中看到它们生息繁衍的样子，保护这些珍贵鸟类的决心就会更加强烈，在动物园的域外保护的方式也自然会有所改变。”
交通上，乘巴士就能到达乘鞍岳山顶周围的岩雷鸟栖息地。“每年的5、6月是建巢安家的季节，能看到雄性的岩雷鸟。到了7月，当卵开始孵化后，就有可能看到亲鸟带着雏鸟一起外出的情景。真的希望更多的人能在野外看到它们。”
——保护岩雷鸟就是保护大自然——
楠田副教授也正在积极地致力于提高人们对珍稀野生动物的认识，但他对岐阜县缺乏保护岩雷鸟的意识也感到担忧，因为该县是乘鞍岳和御岳山等岩雷鸟主要栖息的所在地。截至到2021年，日本全国有七个地方以动物园为中心开展了饲养繁殖事业，其中包括富山县和长野县，但岐阜县没有动物园。与富山县和长野县相比，岐阜县对保护项目的认知度非常低，这与动物园的宣传和公众接触密切度大有关联。尽管与富山县和长野县一样，岐阜县也将岩雷鸟指定为“县级鸟类”，但保护意识低下却是事实。
楠田副教授呼吁说：“岩雷鸟能够栖息的日本飞騨地区的高山生态系统，为南部的美浓地区带来了丰富的水源，并孕育了诸如香鱼之类的淡水鱼。我希望人们能够认识到，保护岩雷鸟也是与传承美浓和纸、鸬鹚养殖等文化及历史有着密切的关系。”
出于这样的考虑，2020年岐阜大学申办了“第19届岩雷鸟大会”。这次会议的目的，是分享和讨论以中村教授为中心，由环境省、岩雷鸟生息地的地方政府、动物园、大学研究人员等开展的各项相关工作，并向公众广泛传播这些信息。
有关人士的热情，让昔日的“神鸟”岩雷鸟作为大自然富饶的象征而得到保护和重生——这一天或许会很快到来。
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10月15日，中国科学院分子细胞科学卓越创新中心（生物化学与细胞生物学研究所）周斌研究员在国际学术期刊Trends in Cell Biology发表了题为“Harnessing orthogonal recombinases to decipher cell fate with enhanced precision”的综述文章。该文章系统地回顾了正交双同源重组酶系统遗传学操作的发展历程，深入讨论了双同源重组酶系统在各个器官与系统中的应用如何弥补了单同源重组酶系统的局限进而厘清了各领域内的争议问题，并且展望了正交同源重组酶系统未来的发展方向和新的研究思路。
Cre-loxP同源重组系统是在多种模式生物，尤其是小鼠中，广泛应用的遗传学操作系统。Cre重组酶能够识别loxP DNA序列并进行DNA序列插入、删除和反转操作。Cre-loxP系统常用于基因的条件型敲除或者重组删除STOP cassette来启动转基因，例如报告基因的表达。尽管其已经发展成为组织特异性与可诱导型的系统，Cre-loxP系统依然存在一些局限性并且导致了一些研究中实验结果的误读。与此同时，多种特异位点重组酶系统，例如Flp-frt、Dre-rox等在噬菌体等生物中被发现。在神经生物学领域中，Susan Dymecki等最早联用Cre和Flp两种特异位点重组酶来精确示踪，发现了中央神经系统中脉络丛和顶板结构的发育来源。由此开始，双同源重组系统被逐步应用到多个研究领域中。该综述以c-Kit+心肌干细胞的为例，聚焦于单重组酶系统依赖于单个基因调控元件的低特异性问题。c-Kit阳性的干细胞曾经被报道为内源性成体心脏干细胞，能够分化为包括心肌细胞在内的多种细胞，为心血管疾病的治疗带来了希望。然而，三个研究组分别使用基于c-Kit的谱系示踪工具并没能发现成年小鼠中c-Kit细胞的成心肌能力。为了厘清这一问题，周斌研究课题组利用Cre和Dre两种重组酶激活的双同源重组系统（DeaLT）来排除传统谱系示踪技术示踪c-Kit成体干细胞时对于心肌细胞的异位标记，实现了心肌细胞和cKit+非心肌细胞同时不可逆标记，从而精确地得出c-Kit阳性成体哺乳动物非心肌细胞在生理或病理情况下均不能发生向心肌细胞转变的结论。DeaLT后续同样被用于探寻所有非心肌细胞向心肌细胞的转变，成体肝细胞和胆管上皮细胞转化的可塑性，新生beta细胞的来源等各种需要同时精准示踪多种细胞类型的问题。
随着单细胞转录组学等技术发展，同一细胞类型内的异质性被越来越清晰地认知。双同源重组系统的选择性标记能力也使得研究者能够使用两个标记基因以不同的遗传学构造靶向它们的交集、补集或同时实现多个亚群的标记。通过构造新的基于Cre和Dre双同源重组酶的遗传学策略，周斌研究课题组实现了对于Sca1+细胞中的Sca1与PDGFRa或PDGFRb两群双阳性细胞的谱系示踪，确认了Sca1+ 细胞在动脉平滑肌修复中的作用，并且揭示了Sca1+细胞亚群中各异的平滑肌修复能力。类似方法也被用于脂肪细胞前体细胞和气管肺泡干细胞等细胞群的命运分析，以及神经系统中神经异质性和神经环路的标记。PDGFRa与PDGFRb双阳性与单阳性亚群只有使用双同源重组系统才能够进行同时地标记并平行分析，从而直接就三种细胞亚群对于新生脂肪细胞的贡献进行比较。传统方法也无法特异标记同时表达Club和AT2细胞标记基因CC10和SPC的气管-肺泡干细胞（BASCs），而研究人员通过双同源重组系统和Split-Cre系统分别独立对BASCs进行谱系示踪并就其对于肺损伤的修复贡献进行了探究。Josh Huang等则通过联用脑区域病毒注射、Cre与Flp双同源重组系统和Tet-On系统等，实现了通过神经连接、脑区位置、基因表达谱、发育时期和来源等多种维度的亚群标记GABA能神经元，对于揭示其各异的功能具有重大意义。
为了更好地研究目标细胞的生理功能与机制，特定细胞亚群的基因敲除或者细胞清除也可以通过双同源重组系统实现，弥补了广泛基因敲除或细胞清除不特异在研究细胞亚群功能中的缺陷。周斌研究课题组通过Plin1-dCreER策略实现了靶向无特异标记基因的白色脂肪细胞亚群（WAT）的Cre活性，从而实现在WAT中转录因子PPARγ的编码基因的敲除。此外，Wt1-CrexER通过Dre重组膜定位雌激素受体（ER）序列而将诱导型CreER转化为持续性的Cre，从而在心脏中特异性敲除内皮细胞中的VEGFR2，造成了心脏血管生成障碍。而另一研究通过Flp激活的Cre进行Rbpj敲除也抑制了动脉的分化，细致地探究了血管生成和分化过程中的分子调控机制。以上系统最终的效应重组酶都是Cre，因此可以兼容以往为Cre设计的多种细胞探针或者报告基因。在细胞层面上，双同源重组系统在脊髓背侧兴奋性或抑制性神经元中启动白喉毒素受体（DTR）表达来介导特定神经元的清除，直观地展示了这两种神经元在痛觉感受神经回路中的不同作用，完善了对于痛觉感受通路的了解。胰岛beta细胞特异的DTR表达和细胞清除也使得少数非beta细胞群分泌多种激素的可塑性得到揭示。
除了利用双同源重组系统高效而精准地实现细胞亚群中的基因敲除与细胞清除，多种双同源重组系统构造策略也已经实现对于短暂性细胞状态的无缝隙捕捉。Lgals-rox-STOP-rox-Cre的STOP在平滑肌细胞中被Dre重组，从而在Lgals3表达时启动Cre。即使这一基因在细胞转移完成后不再表达，也能实现所有Lgals3+平滑肌细胞的标记。揭示了平滑肌细胞在动脉粥样硬化损伤修复中短暂表达Lgals3并首先移动到损伤处的过程。类似地，Kit-CreER通过切割Vimentin-LSL-Dre和N-Cadherin-LSL-Dre的STOP cassette，使得Dre可以在luminal细胞发生EMT时表达，帮助揭示这些基因在乳腺癌细胞发生上皮-间质细胞转移时的作用和分子机制。研究生理环境下的短暂的细胞状态差异例如细胞周期的改变同样是非常重要的，而在肝细胞、心肌细胞或神经元中细胞周期活动都比较稀少和复杂。用传统的核酸类似物掺入或者免疫荧光染色检测这些细胞的增殖都会有信噪比低、可追踪时间不长等问题，并会受到增殖更旺盛的巨噬或内皮等细胞的干扰。而基于单分子的长期谱系示踪则局限于某些细胞亚群，不同的研究人员曾经提出Axin2+中央静脉周围肝细胞、Sox9+门静脉周围肝细胞理论或分散的Terthigh肝细胞具有增殖优势。但是，利用Ki67-CrexER，周斌研究课题组实现了所有细胞类型或者肝细胞特异的增殖信息长时程、不间断的记录。而基于Ki67-CrexER的ProTracer可以看到Zone 2的肝细胞荧光标记数量尤其高，指征这一区域的增殖优势。
该综述总结了多种类型的位点特异性重组酶及其遗传学操作特点，还总结了各种正交同源重组系统的设计思路。尽管双同源重组系统拥有揭示丰富的细胞和分子层面信息的能力，但其转基因小鼠构造复杂程度较高，并且受到位点特异型重组酶本身特性的掣肘，在实际应用中依然存在一些问题。该综述总结了重组酶非特异活性及双同源重组系统转基因小鼠构造繁琐等缺点，并提示了未来突破以上问题和提高正交同源重组酶在各种细胞类型或状态的准确标记和遗传学操作能力的研究方向。此外，本文也展望了未来正交同源重组系统用于细胞间接触或是各种细胞程序性死亡后标记的研究方向。
文章链接：https://t.cn/A6xowbWp
Cre-loxP同源重组系统是在多种模式生物，尤其是小鼠中，广泛应用的遗传学操作系统。Cre重组酶能够识别loxP DNA序列并进行DNA序列插入、删除和反转操作。Cre-loxP系统常用于基因的条件型敲除或者重组删除STOP cassette来启动转基因，例如报告基因的表达。尽管其已经发展成为组织特异性与可诱导型的系统，Cre-loxP系统依然存在一些局限性并且导致了一些研究中实验结果的误读。与此同时，多种特异位点重组酶系统，例如Flp-frt、Dre-rox等在噬菌体等生物中被发现。在神经生物学领域中，Susan Dymecki等最早联用Cre和Flp两种特异位点重组酶来精确示踪，发现了中央神经系统中脉络丛和顶板结构的发育来源。由此开始，双同源重组系统被逐步应用到多个研究领域中。该综述以c-Kit+心肌干细胞的为例，聚焦于单重组酶系统依赖于单个基因调控元件的低特异性问题。c-Kit阳性的干细胞曾经被报道为内源性成体心脏干细胞，能够分化为包括心肌细胞在内的多种细胞，为心血管疾病的治疗带来了希望。然而，三个研究组分别使用基于c-Kit的谱系示踪工具并没能发现成年小鼠中c-Kit细胞的成心肌能力。为了厘清这一问题，周斌研究课题组利用Cre和Dre两种重组酶激活的双同源重组系统（DeaLT）来排除传统谱系示踪技术示踪c-Kit成体干细胞时对于心肌细胞的异位标记，实现了心肌细胞和cKit+非心肌细胞同时不可逆标记，从而精确地得出c-Kit阳性成体哺乳动物非心肌细胞在生理或病理情况下均不能发生向心肌细胞转变的结论。DeaLT后续同样被用于探寻所有非心肌细胞向心肌细胞的转变，成体肝细胞和胆管上皮细胞转化的可塑性，新生beta细胞的来源等各种需要同时精准示踪多种细胞类型的问题。
随着单细胞转录组学等技术发展，同一细胞类型内的异质性被越来越清晰地认知。双同源重组系统的选择性标记能力也使得研究者能够使用两个标记基因以不同的遗传学构造靶向它们的交集、补集或同时实现多个亚群的标记。通过构造新的基于Cre和Dre双同源重组酶的遗传学策略，周斌研究课题组实现了对于Sca1+细胞中的Sca1与PDGFRa或PDGFRb两群双阳性细胞的谱系示踪，确认了Sca1+ 细胞在动脉平滑肌修复中的作用，并且揭示了Sca1+细胞亚群中各异的平滑肌修复能力。类似方法也被用于脂肪细胞前体细胞和气管肺泡干细胞等细胞群的命运分析，以及神经系统中神经异质性和神经环路的标记。PDGFRa与PDGFRb双阳性与单阳性亚群只有使用双同源重组系统才能够进行同时地标记并平行分析，从而直接就三种细胞亚群对于新生脂肪细胞的贡献进行比较。传统方法也无法特异标记同时表达Club和AT2细胞标记基因CC10和SPC的气管-肺泡干细胞（BASCs），而研究人员通过双同源重组系统和Split-Cre系统分别独立对BASCs进行谱系示踪并就其对于肺损伤的修复贡献进行了探究。Josh Huang等则通过联用脑区域病毒注射、Cre与Flp双同源重组系统和Tet-On系统等，实现了通过神经连接、脑区位置、基因表达谱、发育时期和来源等多种维度的亚群标记GABA能神经元，对于揭示其各异的功能具有重大意义。
为了更好地研究目标细胞的生理功能与机制，特定细胞亚群的基因敲除或者细胞清除也可以通过双同源重组系统实现，弥补了广泛基因敲除或细胞清除不特异在研究细胞亚群功能中的缺陷。周斌研究课题组通过Plin1-dCreER策略实现了靶向无特异标记基因的白色脂肪细胞亚群（WAT）的Cre活性，从而实现在WAT中转录因子PPARγ的编码基因的敲除。此外，Wt1-CrexER通过Dre重组膜定位雌激素受体（ER）序列而将诱导型CreER转化为持续性的Cre，从而在心脏中特异性敲除内皮细胞中的VEGFR2，造成了心脏血管生成障碍。而另一研究通过Flp激活的Cre进行Rbpj敲除也抑制了动脉的分化，细致地探究了血管生成和分化过程中的分子调控机制。以上系统最终的效应重组酶都是Cre，因此可以兼容以往为Cre设计的多种细胞探针或者报告基因。在细胞层面上，双同源重组系统在脊髓背侧兴奋性或抑制性神经元中启动白喉毒素受体（DTR）表达来介导特定神经元的清除，直观地展示了这两种神经元在痛觉感受神经回路中的不同作用，完善了对于痛觉感受通路的了解。胰岛beta细胞特异的DTR表达和细胞清除也使得少数非beta细胞群分泌多种激素的可塑性得到揭示。
除了利用双同源重组系统高效而精准地实现细胞亚群中的基因敲除与细胞清除，多种双同源重组系统构造策略也已经实现对于短暂性细胞状态的无缝隙捕捉。Lgals-rox-STOP-rox-Cre的STOP在平滑肌细胞中被Dre重组，从而在Lgals3表达时启动Cre。即使这一基因在细胞转移完成后不再表达，也能实现所有Lgals3+平滑肌细胞的标记。揭示了平滑肌细胞在动脉粥样硬化损伤修复中短暂表达Lgals3并首先移动到损伤处的过程。类似地，Kit-CreER通过切割Vimentin-LSL-Dre和N-Cadherin-LSL-Dre的STOP cassette，使得Dre可以在luminal细胞发生EMT时表达，帮助揭示这些基因在乳腺癌细胞发生上皮-间质细胞转移时的作用和分子机制。研究生理环境下的短暂的细胞状态差异例如细胞周期的改变同样是非常重要的，而在肝细胞、心肌细胞或神经元中细胞周期活动都比较稀少和复杂。用传统的核酸类似物掺入或者免疫荧光染色检测这些细胞的增殖都会有信噪比低、可追踪时间不长等问题，并会受到增殖更旺盛的巨噬或内皮等细胞的干扰。而基于单分子的长期谱系示踪则局限于某些细胞亚群，不同的研究人员曾经提出Axin2+中央静脉周围肝细胞、Sox9+门静脉周围肝细胞理论或分散的Terthigh肝细胞具有增殖优势。但是，利用Ki67-CrexER，周斌研究课题组实现了所有细胞类型或者肝细胞特异的增殖信息长时程、不间断的记录。而基于Ki67-CrexER的ProTracer可以看到Zone 2的肝细胞荧光标记数量尤其高，指征这一区域的增殖优势。
该综述总结了多种类型的位点特异性重组酶及其遗传学操作特点，还总结了各种正交同源重组系统的设计思路。尽管双同源重组系统拥有揭示丰富的细胞和分子层面信息的能力，但其转基因小鼠构造复杂程度较高，并且受到位点特异型重组酶本身特性的掣肘，在实际应用中依然存在一些问题。该综述总结了重组酶非特异活性及双同源重组系统转基因小鼠构造繁琐等缺点，并提示了未来突破以上问题和提高正交同源重组酶在各种细胞类型或状态的准确标记和遗传学操作能力的研究方向。此外，本文也展望了未来正交同源重组系统用于细胞间接触或是各种细胞程序性死亡后标记的研究方向。
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分手对方具体会有怎样的心态变化呢？
1.拒绝联系：这个阶段在分手后非常常见，尤其是在男生身上。
女生的沟通欲望天生比较强烈，所以在分手之后往往也不会马上切断联系，会有一个比较藕断丝连的过程，但是男生就不太一样。男生本来就属于不太沟通，或者说不擅长沟通的群体，在分手之后，往往会采取躲避的策略。见了面也不知道该说什么，分手之后也不知道如何沟通才能缓解尴尬，因此，往往三十六计走为上计。
甚至删掉对方的所有联系方式，让自己沉浸在游戏、运动的世界里，杜绝进一步的思考。你给对方发微信，得到的往往是一个红色的惊叹号，打电话永远占线，通过朋友想取得联系，往往也是吃了闭门羹，这时候任谁也是一筹莫展，既不甘心这段感情就这样白白流走，却一时无计可施了。
那么，你该怎么做？
首先，你要稍安勿躁，千万不要对方只是断了联系，你就已经乱了阵脚。上文我们已经提过，男生不善于言语沟通，所以才会采用这种逃避的方式，这也是他的一种自我修复机制
其实这就跟马拉松比赛一样，在你们感情的马拉松当中，许多的矛盾纷争让他觉得疲惫不堪，直到他选择以分手来结束这场赛程。只有切断联系，他才算是真正结束赛程，可以正式好好休息一下。但此时的你，却要应拉他起来，再次开始跑步。他怎么会愿意呢？
其实说实话，他选择跟你分手就是为了远离你、远离这段感情，无论是什么原因，但是“远离”就是他的目的。只有让他觉得自己达成了目的，才会适当的缓解他之前的一些焦虑，如果你一直步步紧逼、处处纠缠，会让他觉得自己根本无法通过分手来远离你，甚至拉黑也无法达成目的，他可能就会选择更加坚决的方式，甚至只要听到你的名字就绝对不露面。如果他感觉到窒息，他可能会选择换工作、搬家等方法来逃走，你想跟他复合的心愿也就再也无法实现了，甚至别说复合了，普通朋友都是奢望。
因此此时，你最好的行动就是不动，给足对方空间，让他可以从分手的风暴中得以呼吸，让他认识到：我们以后的恋爱不会再像马拉松那么疲惫了，给他充分的休息时间。这时候你也可以趁机深度思考你们分手的原因，找到你们之间最舒适的相处方式。
2.有所缓和：在这个阶段，他重新找回了内心的安宁和对你的信任。
这个时候他开始慢慢的重新相信你，朋友间提起你的时候也不会太过排斥，你面前终于有了一条若隐若现的小路，通往他的内心世界。但是别着急，这只是他跨出的一小步，也是你们之间进展的一大步，这个阶段如果我们掌握得当，就能有所进展，反之，如果我们太过心急，再度让对方产生压迫感，那就只会打草惊蛇。
欲速则不达
任何事情都有时机，在时机到来之前就贸然进攻，结果只能是竹篮打水一场空。你应该做的是，利用他现在对你的信任，逐步展开温柔攻势，适当的对对方的生活进行问候，但这种问候点到为止，不要太具有目的性、功利性，让对方一眼就看穿你的小心思。
关心是春雨润物细无声，不要让对方刚刚卸下的心防，再度筑起高墙。在这期间，你要彻底的站在对方的角度思考问题，转换出发点，尽力规避在之前交往中，你出现的一些问题。
你是个怎样的恋人？
学会审视自己，想要维系一段好的感情，其实离不开两个人的互相体谅，放弃那些所谓的“爱情教条”，爱是两个人互相理解，而不是互相立规矩，树教条。打破自己原来的条条框框，修正自己的人格缺陷，知道你自己曾经是个什么样的恋人？对方带来了怎么样的印象？
只有清楚地认知自己，才能真正站在对方的角度思考问题，体会对方的感受，知道什么才是对方的想要的。当你能够意识到自己的短板时，你也就具备了规避自身短板的能力，成为一个对对方来说更加体贴、温柔、温暖的恋人，温暖就具有令人陷入怀念的奇迹功效，而怀念是复合的预告。
3.陷入怀念：怀念是复合的特效药，开始怀念，就会想要重拾快乐。
人往往在怀念过去的时候最想回到过去，只有当他开始回味你们之前的甜蜜感情，开始觉得时光逝去不可追的时候，才会想要重返原来的生活，希望爱可以重来。其实在之前的一段时间，你们两人的情绪都得到了冷静，你们之间的空白期也已经够长，此时，你就可以慢慢重新接近他，找回自己在他世界中的存在感。
利用共同回忆，打造心锚
上一阶段中，他对你的态度已经有所缓和，所以在这个阶段中，你只需要巩固一下当前的成果就可以，学会利用朋友圈，发布一些你们之前共同去过的地方、夜里一起听的一首歌、第一次一起看的电影等等，利用这些共同的回忆，唤起对方对于美好时光的想念。
同时，也可以利用这些回忆，形成反差的效果：过去你们是幸福快乐的情侣，各个节日都会在朋友圈大虐“单身狗”，然而现在自己却成了被虐的“单身狗”，这样的反差往往最容易引起人的感慨。
感慨一旦发生，怀念也会随之而来，人一开始怀念，就会开始想要回到过去，你的有利局面也就打开了。他自然会主动找你，打开话题，敞开心扉，主动权逐渐移交到了你的手里，复合之路也已经胜利在望了。
至此，在心态上，你已经做到了控制好自己的，掌握好对方的，可以说在复合这场马拉松赛程中，已经来到最后一百米冲刺了，你最后需要的就是一点：重建吸引力。
做更好的自己，二次吸引
做几个深呼吸，我们已经接近终点了！
这一步就是我们的最后冲刺赛段，最初两人在一起，说明你对他是有吸引力的，但这一次，光靠原本的魅力，不足以挽回一个已经离开的人，你要做的就是展示全新的自我。
在之前的心态调整过程中，他对你的态度已经非常缓和，甚至已经在主动接触你了，这时候你之前的方法施展的再多，也是老调重弹，无法取得突破。你需要的是，提升自己的个人魅力，打造华丽转身。
展现自己，可以采用线上线下相结合的方式：
线上通过朋友圈等社交媒体平台，在他开始主动联系你之后，就可以暂缓放送回忆片段了，转而开始发一些最近的生活动态。注意这个时候的生活动态最好能有一些新鲜的内容，比如去尝试一些之前没做的事情、新的爱好等等，都是可以给他带来眼前一亮的新鲜感的。
小Tips：如果能投其所好，跟他的一些兴趣爱好相重合的话，效果加成的哦！
线下在见面的时候，可以适当的调整自己的妆容和服饰，人的脸上尽管只是微小的改变，其实都会有很大的感觉，会给人形成一种“说不上来哪里不一样”的新鲜感。这种小小的改变，会让对方眼前一亮，从而会提升你自己的自信，自信的光彩往往会令一个人魅力有所提升的同时，还会让别人更加的信服你。
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那么，你该怎么做？
首先，你要稍安勿躁，千万不要对方只是断了联系，你就已经乱了阵脚。上文我们已经提过，男生不善于言语沟通，所以才会采用这种逃避的方式，这也是他的一种自我修复机制
其实这就跟马拉松比赛一样，在你们感情的马拉松当中，许多的矛盾纷争让他觉得疲惫不堪，直到他选择以分手来结束这场赛程。只有切断联系，他才算是真正结束赛程，可以正式好好休息一下。但此时的你，却要应拉他起来，再次开始跑步。他怎么会愿意呢？
其实说实话，他选择跟你分手就是为了远离你、远离这段感情，无论是什么原因，但是“远离”就是他的目的。只有让他觉得自己达成了目的，才会适当的缓解他之前的一些焦虑，如果你一直步步紧逼、处处纠缠，会让他觉得自己根本无法通过分手来远离你，甚至拉黑也无法达成目的，他可能就会选择更加坚决的方式，甚至只要听到你的名字就绝对不露面。如果他感觉到窒息，他可能会选择换工作、搬家等方法来逃走，你想跟他复合的心愿也就再也无法实现了，甚至别说复合了，普通朋友都是奢望。
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