细胞无菌检测
无菌检测 sterility testing

----利用方法对细胞中细菌、真菌、支原体和病毒检验的过程。包括是否有污染及确定具体污染

一、一般要求
应根据细胞来源、潜在污染暴露史、细胞预期应用目的及所处环境等方面对细胞进行风险评估。考虑的因素包括但不限于以下几个方面:
a)应考虑细胞样本源。来自不同物种的细胞很可能携带潜在的微生物;
b) 应根据细胞的使用目的进行相关污染检测;
c)考虑细备和细胞培养的全周期所处的环境因素。根据暴露史评估可能的污染,如用于培养细胞的动物血清可能被特定的微生物污染。
依据风险评估判可能性最大的微生物污染类型,评估现有检验方法的话用性为待检测样本选择合适的方法。

二、方法选择
1.总体要求
在选择检测方法时,应了解该方法原理、微生物类型以及灵敏度等。
选择检测方法应依据预期目的、样本特性和处理因素。
选择的方法应经过验证或确认。

2.细菌和真菌
细菌是一大类普遍存在的单细胞微生物。细菌的直径通常只有几微米,其形状多样,如球状、杆状和螺旋状等。由于分布广泛、生长迅速和体积大小等特点,细菌以及酵母和霉菌是细胞培养中最常见的生物污染物。
细菌污染在培养物感染后几天内就很容易被肉眼观察到;受感染的培养物通常会变得浑浊,有时表面会有一层薄膜。经常还会出现培养基的pH值突然下降的情况。在低倍显微镜下,细菌以细小颗粒的形式出现在细胞之间,在高倍显微镜下观察可以分辨出单个细菌的形状。下面的模拟图像显示了贴壁培养的293细胞被大肠杆菌污染。
(1)依据需要选择适用干细菌和真菌的检测方法,如直接镜检法、膜过滤法、直接接种法、PCR法、MNP标记法、飞行时间质谱等。
(2)初步判断是否有细菌或真菌污染物,宜采用直接镜检法。
(3)若试验样品性质如可行,应首先选择膜过滤法进行检测。
(4)直接接种法对干细胞培养体系中添加抗生素的样品应考虑抗生素对细菌和直菌的抑制效应而影响检测的敏感性。
(5)利用PCR的方法检测细菌16SrRNA高保守区的序列来判断是否有细菌污染。利用PCR的方法检测细菌16SrRNA可变区的序列和MNP标记序列分析污染细菌的种属,利用MNPITS1或ITS2等序列判断感染真菌的种属。
(6)对微生物的组分进行检测可采用飞行时间质谱法等。

3.病毒
病毒是一种微小的感染性病原体,利用宿主细胞的结构进行繁殖。它们的体积极小, 难以在培养中被检测到,也难以从细胞培养实验室使用的试剂中去除。由于大多数 病毒对宿主有非常严格的要求,因此,它们通常不会对宿主以外物种的细胞培养物产生不良影响。但被病毒感染的细胞培养物会对实验室人员造成严重的健康威胁, 尤其是当实验室培养的是人类或灵长类的细胞时。要检测细胞培养物是否被病毒感染,可以使用电子显微镜观察、用抗体组合进行免疫染色、ELISA检测或是使用合适 的病毒引物进行PCR扩增。
(1)依据需要选择适用干病毒检测的方法,如直接镜检法、细胞形态观察及血吸附试验、体外不同细胞接种法、动物检查法、鸡胚接种检查法、PCR法、高通最测序法、基因片技术、荧光免疫法、酶联免疫法和血细胞凝集试验等方法。
(2)可利用光学显微镜观察病毒感染导致的细胞病变合胞体的形成:可通过电子显微镜观察大小和形态来识别病毒;可通过免疫电镜技术识别病毒。
(3)取细胞培养物的上清液或细胞培养物的裂解物,接种已知未污染病毒的相应细胞,检测是否出现细胞病变,或采用血细胞的吸附现象检测待检细胞培养物是否污染病毒。
(4)若采用动物检查法,可通过对普通动物或者含有特定病原体的动物,如小(包括乳鼠和成鼠)
豚鼠、仓鼠、家兔和非人灵长类动物等进行颅内、腹腔、鼻腔和皮下等部位接种,判断是否有病毒感染。
(5)分离黏液病毒、疱疹病毒和痘病毒宜采用鸡胚接种检查法。鸡胚应来自无特定病原(SPF)鸡群。
(6)采用PCR法检测病毒核酸高保守区的序列来判新是否有病毒污染。
(7)可采用高通量测序法鉴定病毒特异性序列。
(8)采用基因芯片技术检测病毒,需要合成与潜在污染的病毒基因组上的特定区域互补的核酸探针。
(9)用病毒抗原特异的抗体,通过荧光免疫反应用荧光显微镜检测细胞内病毒蛋白来判断特定的病毒污染。
(10)运用病毒抗原特异的抗体,通过酶联免疫反应检测细胞内或者上清液中的病毒蛋白来判断特定的病毒污染。
(11)通过凝集血细胞检测上清液中的病毒颗粒,如用鸡红细胞检测流感病毒。

4.支原体
支原体是无细胞壁的简单细菌,被认为是最小的自我复制生物。由于支原体非常小( 通常小于1 µm),因此很难被检测到,除非它们达到了极高的密度,导致细胞培养物变质;在此之前,通常没有明显的感染迹象。一些生长缓慢的支原体可在培养物中持续存活,而不会导致细胞死亡,但它们可以改变培养体系中宿主细胞的行为和代谢。
(1)依据需要选择适用于支原体检测的方法,如培养法、指示细胞培养DNA染色法、PCR法、荧光原位杂交法、腺苷磷酸化酶活性检测法等方法。
(2)若对支原体检测结果报告时间没有急切要求的,宜选择培养法进行检测。
(3)利用DNA热色法,经荧光显微镜下观察看到有附着在细胞表面的大小不等,不规则的荧光着色颗粒则表明存在支原体污染。
(4)通过PCR法检测支原体16SrRNA序列保守区特异性序列来判定是否存在支原体。
(5)利用带光原位杂交法检测支原体,需要设计与支原体rRNA的高度保守区域互补的蒙光探针。
(6)腺苷磷酸化酶活性检测法不适用于本身腺苷磷酸化酶活性高的细胞。

5.过程控制
样品
(1)应根据所选方法,确定足够量的供试样品。
(2)应根据供试样品可能的稳定性考虑其储存条件。
(3)应实行严格微生物规范操作,避免取样讨程中微生物污染。

试剂材料和仪器设备用具
(1)应考虑设备、试剂和耗材对微生物检测的影响。
(2)检测过程中应使用标准物质。
(3)应根据样品尺寸选择适宜的容器,避免蒸发、确保无微生物、无毒、无浸出。
(4)应配备与微生物检测能力和工作量相适应的仪器设备,其类型、测量范围和准确度应符合检测要求。
(5)检测所用试剂应贮存在适的环境中,以确保试剂的稳定性。
(6)用于微生物检测的溶液、稀释剂或冲洗剂以及所使用的耗材若是作为微生物检测测试样品的成分,则不应具有抗微生物活性的特性。

操作
(1)待测样品的收集操作应确保无污染引人。
(2)应依据微生物的最佳生长条件和营养需求选择专门的分离方法进行检测。
(3)应根据微生物的生长速度,以获得足够数量的生物体。
(4)应考虑某些微生物种类和真菌是否形成孢子。
(5)应考虑细胞培养过程中受支原体污染时,支原体可能黏附在细胞膜上仅以最低水平浓度存在于培养上清液中。
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长期戴口罩可致肺结节增大……莫让这些谣言再增“热”度

夏至过后,全国多地开启了高温模式,部分地区气温甚至达到40摄氏度。伴随滚滚热浪而来的,还有谣言,包括“蚊子包越大,蚊子毒性越强”“用空气炸锅做的菜致癌”“长时间戴口罩可致肺结节增大”“地球到达远日点天气将变寒冷”……

  今天,对本月新出现的谣言逐一进行盘点,帮助您拨开迷雾、寻找真相。

  蚊子包越大,蚊子毒性越强? 真相:主要与蚊子种类和个人敏感性有关

  夏季除了高温,让人烦心的还有蚊子。有的人被蚊子叮咬后,可能就起一个小红包,而有的人被叮咬后,就会变得惨不忍睹——因被蚊子叮咬而变成“招风耳”“腊肠嘴”“猪蹄手”的新闻屡屡见诸报道。

  同样是被蚊子叮咬,为何包的“型号”如此不同?网传“蚊子包越大,蚊子毒性越强”,对于这一说法不少人深信不疑,那么真相究竟是什么呢?

  “被蚊子叮咬后,皮肤会出现风团、丘疹、瘙痒等症状,我们常说的蚊子包是皮肤局部的过敏反应。”

  蚊子叮咬人时,会将刺吸式口器刺入人体皮肤引起损伤,它会一边刺吸血液一边向人体“下毒”,即分泌唾液来防止血液凝固堵塞它的口器,同时这些唾液也能起到麻痹的作用,让人难以察觉。感应到蚊子“口水”入侵后,人体的免疫系统就会启动,分泌的组胺和细胞因子会使血管扩张、血管通透性增加、局部组织水肿,进而引起皮肤瘙痒和局部炎症反应。

  “每个人被蚊子叮咬后的炎症反应程度,主要与蚊子种类和个人敏感性有关。”解释,当过敏体质的人被蚊子叮咬后,其体内会分泌大量的组胺和细胞因子,进而引发过敏反应。轻者出现风团、丘疹、血管性水肿,严重的还会出现全身反应。

  此外,蚊子包的大小和被叮咬部位也有关系。眼睑、口唇、手背、儿童包皮等疏松结缔组织部位,被叮咬后容易出现水肿,蚊子包也会显得比较大。

  被蚊子叮咬后,不要拼命挠,搔抓会给局部皮肤施加机械压力,同时也会让血流速度加快,这些都会加重炎症反应,导致蚊子包可能变得更大。

  用空气炸锅做的菜致癌? 真相:尚无明确致癌实验性证据

  前段时间,不少人被某短视频平台上的一句“假如我有一个空气炸锅”流行语洗脑。在短视频出现的多道使用空气炸锅烹饪的美食,不仅制作方便而且用油量少。一些人因此“种草”空气炸锅,把它奉为减脂烹调“神器”。

  然而,近日网上又传出用空气炸锅做的食物会致癌,原因是会产生丙烯酰胺,而丙烯酰胺是一种致癌物。

  “在烹饪的过程中是否会产生致癌物,主要与食材、烹饪温度以及烹饪时间有关。”天津科技大学食品科学与工程学院教授王浩在接受科技日报记者采访时表示,无论用什么锅做饭,只要让食物过度受热,都有产生致癌物的可能。

  “空气炸锅就像一个带风扇的简易烤箱。”王浩介绍道,它通过内置的热管产生热空气,而后用风机将高温空气吹向四周,使热空气在封闭的空间内循环,从而使食物受热脱水。

  丙烯酰胺是淀粉在高温、低含水量条件下产生的,一般来说,当温度超过120摄氏度时,就会产生少量丙烯酰胺,当温度在160到180摄氏度时,其产出量达到高峰。而这个温度正是烤制食物和油炸食物的合适温度。此外,含淀粉越多的食材,在高温下产生的丙烯酰胺也越多。

  “不过,大家也不必过分担心。”王浩说,首先,丙烯酰胺属于2A类致癌物,它对动物的致癌性有充分证据,其能否导致人体患癌,尚缺乏足够的实验性证据。其次,以油炸、烧烤方式烹调富含碳水化合物的食材时,若温度超过120摄氏度,就有可能产生丙烯酰胺,而且烹调时间越长、食材含水量越少,产生的丙烯酰胺就越多。而且从量上来对比,空气炸锅的加热效率更高,食物保持在高温下的时间更短,甚至其产生的丙烯酰胺可能少于其他高温烹饪方式。

  “我们不能抛开剂量来谈毒性。”表示,对普通人来说,在日常饮食中不会短时间内大量摄入丙烯酰胺。只要正常食用,根本达不到危险摄入水平。不过,他建议大家在使用空气炸锅烹饪含淀粉的食材时,最好提前做一下预处理,比如在炸薯条前,用清水冲洗掉土豆表面的淀粉。同时合理把握烹饪时间,别在高温下烹饪过久。

  长期戴口罩可致肺结节增大? 真相:正常使用不会对肺部造成伤害

  目前,随着新冠肺炎疫情常态化,口罩依然是大家每天的“必戴品”。前不久,网上传出“长时间戴口罩可致肺结节增大”的说法,称口罩中间层熔喷布系石油产品,其中的微末颗粒会经由呼吸道进入人体肺部,长期佩戴会导致肺结节增大。

  对此,在正常使用范围内佩戴口罩,是不会产生微末颗粒的,更不会进入肺部。

  “除了棉、毛、麻、丝、再生纤维素纤维等纺织材料外,包括熔喷布在内的很多合成纤维都是利用石油基材料制成的。”介绍,聚丙烯作为主要的石油基材料,应用范围非常广泛。而制作口罩用的熔喷布,就是由聚丙烯高分子材料加工而成的超细纤维非织造材料。

  “这种高分子材料经过加工成为熔喷布后,具有一定强度和非常好的过滤性能,在正常的使用时限内,不可能产生小分子物质。”钱晓明表示,不过,聚丙烯材料不耐紫外线,经过长时间日光照射,会出现变脆、强度减弱的问题;其在外力的作用下,比如用手捻、搓,也可能会变成粉末颗粒。

  不过,强调,这种粉末颗粒都是以大颗粒形态存在的,很难被人吸入进肺里。

  “熔喷布口罩只要不在太阳下暴晒,同时不超过使用期限,就不会产生微末颗粒。一般在背光的地方储存两年内,都是没有问题的。”钱晓明补充道。

  地球到达远日点天气将变寒冷? 真相:天气的冷热与太阳照射角度有关

  近日,网上传出这样一则消息:从今年5月22日起太阳会远离地球,逐渐到达远日点,此时天气会变得比较寒冷,这一现象将一直持续至今年8月。

  目前,全国多地的高温已让传闻不攻自破,不过还是有人担心,现在的高温只是今年夏天的“昙花一现”,未来气温会持续走低,真的会如此吗?

  “地球绕太阳公转的轨道大致呈椭圆形,但它的长轴和短轴相差不大,所以基本可以看成一个圆。”介绍,地球在轨道上运动时,与太阳的距离有时近、有时远,其处在离太阳最近的位置就是近日点,离太阳最远的位置就是远日点。

  “无论处于近日点还是远日点,地球与太阳之间的距离都差不多。”表示,当地球处在近日点时,其距离太阳1.471亿千米;而当地球处在远日点时,其距离太阳约1.521亿千米。两者相差0.05亿千米,只占到地日平均距离的3.3%,几乎可以忽略不计。因此,地球在近日点和远日点所获得的热量差别非常小。

  人们在地球上感受到的温度变化,主要和太阳照射的角度有关。“地球的公转轨道面和赤道面是有一个夹角的,每年6月22日左右,即北半球夏至这天,太阳直射北回归线,此时北半球(大部分地区)距离直射点最近,获取的热量比较多,因此天气比较热;反之12月22日左右,即北半球冬至这天,太阳直射南回归线,北半球获得热量比较少,天气比较冷。”

  “其实,每年1月初,地球恰恰处于近日点,此时正好是北半球的冬天,这时天气比较寒冷。而到了7月初,地球转至远日点的时候,却是北半球的夏季,天气相对比较炎热。”阎为国表示,可以说,天气的冷热和近日点、远日点关系不大。

有人说,最近10年,投资房产的人跑赢了90%以上的生意人和工薪族,是这样吗?

在上海的时候,身边这样的例子特别多。

曾经隔壁的邻居,经历过两次动迁,一次是02年的动迁,一次是07年的动迁,摇身一变,原本市区破破的20多平米,变成了市区一套,郊区两套房。

但这并不足以让他走上人生巅峰,后来在13年和15年的时候,又倒腾了一下房子,把三套房子都卖了。

然后自己买了一套,给儿子又买了一套,两套都在中环,都是新房而且是三房。

现如今两套房子的市场价值加起来要近3000万了。

从20年前,市价20来万的一套老破小,变成如今3000万市值的两套市区学区房。

虽不能说是人生走上巅峰,但又有多少人能有这样的机遇,让自己的资产在20年翻了超过100倍呢?

打工不如买房,还在我两个同学的身上体现得淋漓尽致。

大学同学A,06年毕业后和同在上海的女友结婚,86万在市区买了一套40平的房子,双方家里凑了30万首付,剩下都是贷款。

那时候,一个月的薪资才4000块左右,贷款50多万,每个月还3200多块钱,还觉得压力挺大的。

2014年的时候,贴了点钱,又贷了些款,置换了一套市区的三房,生活比较美满,压力也不大。

还有一个室友B,那近况可是完全不同,属于标准的事业派,不近女色。

06年毕业后,一心想在事业上有所成就,也确实有所成就。

2010年左右,薪资应该就破万了,到了15年的时候,已经年薪40万了。

只可惜,情场上似乎并不是一帆风顺,也就没什么买房的打算,一直过着租房的生活。

2017年终于找到了女朋友,然后才打算买房,这时候的房价,相比10年前,已经完全不在一个量级了。

后来在外环边上买了套二手房,总价650万,几乎把这十几年的积蓄一扫而空,还背了400万的贷款,每个月的月供就超过2万。

后来还是跌跌撞撞地结了婚,好像婚姻生活也不是太好。

房贷这个数目,看似对于月薪5-6万的他来说没有太大的压力,但2020年疫情过后,他竟然失业了。

更关键的是,这种企业的中层管理,年薪在80万左右的,找工作还并不那么好找。

最后,只能屈尊找了份只有50万年薪的工作,先将就着。

只不过家里的日用开销,加上各种房贷车贷的月供,让他的生活反而一下子拮据起来。

同学聚会的时候,很明显A家庭的日子,远比B家庭要好了很多。

尽管看上去B的一生着装,气质,都比A要高级,但A的生活明显比B要舒适,悠然自得。

这些都是活生生的例子,提前10年拥有房子的人,直接跑赢了那些辛辛苦苦打工的人。

更别说那些做生意的人,还得背负着做生意的风险,不仅可能竹篮打水一场空,还有可能身负债务。

还记得那个故事,有个人2008年,卖了60万的房子去创业,经过十年的风雨打拼,到2018年的时候,终于花了600万,买回了当时那套房。

另外一个故事,2008年,有人带着300万去北京创业,100万买了一套房,200万用于创业。

2018年的时候,创业失败的他,心灰意冷,把当时已经价值800万的房子卖了,还清了500万的债务,带着300万离开了北京。

这就是为什么,我们经常会提到,选择比努力更重要。

接下来,讨论两个核心问题。

第一,为什么生意人跑不赢房产投资客?

首先,并不是所有的生意人,都没有跑赢房价的上涨,还是有一小部分人,跑赢房子涨价的。

生意人之所以跑不赢房产投资客,是因为做生意的风险,远高于购买房子的风险。

即便房子过去十年没有那么大的涨幅,但固定资产的属性,也决定了其风险远小于做生意。

我们可以这么理解,通货膨胀只要存在,货币超发只要存在,它们对于资产价格的影响,就是正面的。

而且,这种因通胀带来的房价上涨,几乎是不可逆的。

供求关系的变化,也挡不住这个市场有钱,房产的价格自然也就水涨船高。

所以,房价的上涨,很大一部分原因,是因为市场大量放水导致的。

尤其是像2008年四万亿的政策,其实就是拿钱强行去砸市场。

用钱烘托出市场的火热,加上资金的前赴后继,就根本不存在什么亏损风险一说了。

而作为生意人,行业的波动影响,资金的周转,都是一些潜在的风险。

市场上有钱放水的时候,看似生意好做,一旦盲目扩张,等到市场流动性收紧,一下子可能就会遭遇危机,资金链断裂。

房地产不是没有周期,但是周期下房产的调整幅度并不大。

而对于生意人而言,周期的影响太大了,一步走错,就会存在满盘皆输的情况。

而且生意上,可能会存在上下游,有时候别人的一个环节出错,也会影响到自己的生意。

房地产十年,调整的周期,比起做生意十年,那真的是太小了,也就注定了大部分的生意,最终没能跑赢房地产。

第二,为什么工薪阶层跑不赢房产投资客?

工薪阶层跑不赢房产投资的主要原因,并不是在于工资增长慢,而是在于杠杆。

收入是不存在杠杆的,即便你的收入是线性增长的,也是日积月累的。

而房产本身,是可以通过杠杆去放大资产的。

我们不鼓吹杠杆,但杠杆是房产始终跑在工资前面的一个决定性因素。

你的工资,从5000,涨到了20000,涨幅4倍。

一套房子从300万,涨到了500万,涨幅66%。

你以为你的工资涨幅能追上房子,殊不知两者因为基数差距太大,永远追不上。

即便是按照30%的首付,从90万到150万,对于工资20000的人来说,也得辛辛苦苦存上很多年。

再加上如果没有房子,租房的开支又是一大笔。

很多年以后,房子是不是又会上涨,犹未可知。

那些利用好杠杆,早早出手贷款买房的人,基本上都享受到了房地产的红利。

而那些踏踏实实工作,却没有考虑房价,不懂得贷款,没有杠杆思维的人,却成了最大的“受害者”。

并不是说努力工作不对,而是选择错误导致的成本付出,实在是太大太大了。

资本轻轻松松地让房子几百万几百万的往上涨,你的薪资涨几万,就要付出特别大的努力了。

更何况且,绝大多数人,是不具备让薪资呈现几何基数增长的能力。

这两条的大逻辑,直接导致了房产在上涨的情况下,远远地把生意人和工薪阶层甩在了身后。

最后,灌一些鸡汤给大家,但不是毒鸡汤。

如果你是个打工族,或者是一个生意人,没有赶上房产的上涨,看着现在的高房价有点辛酸,不知道如何是好,请不要彷徨。

你知道,房产不会永远上涨,它不可能永远是个正向积累的过程。

你的工作也好,你的生意经历也罢,都是你的经历,是你可以影响和主导的,是正向的积累。

房产的涨价跌价,其实是市场的大资本去运作的,并不是你能掌控的。

我们可以在某些投资场上去做一些判断,通过资本去快速赚到一些财富。

但这并不影响我们踏踏实实地去积累经验,通过劳动,通过自己的经验去赚到钱。

大部分的人买到房,并不是他们真的有眼光,而是误打误撞的。

或许上一个十年,误打误撞对了,那么下一个十年,误打误撞还行吗?

所以,永远不要觉得自己落后了,你在财富上的起点可能是落后了,但你的积累不会白费,厚积才能薄发。

人生路不是只有一个十年,还有未来很多个十年,所以没必要觉得自己傻,你只是错过了一些机会而已,机会还有下一次,就看你能不能准备好了。

至少未来很明确,下一个十年的地产不会有太大的波澜,而你的人生下一个十年,却会很精彩。


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