【问发贵：我的青春祭坛】
一九七二年七月高中毕业时，全国尚无大学招生，只得回乡参加集体生产劳动。初冬，我带着行李跟随大队支书问玉田骑自行车赶赴七十多里开外的石堡川水利工地。
迎着凛冽寒风行至冯原西街时，见一辆给水利工地拉沙子的卡车停在路边。老支书与司机搭讪，求捎一程。司机瞪眼断然拒绝后，摔上车门钻进旁边饭馆。此时卡车大厢上露出一个戴栽绒帽子的人头，叫道：“喂一一你是老问？”老支书趋前一看：“呀，老杨，你这家伙咋在这儿？”
被老支书称作老杨者，“文革”前县人民检察院检察长杨书堂，老支书三年困难时期回乡前在公安局的同事、好朋友。杨书堂让我们把自行车递上汽车大厢，又拉我俩上车。司机返回正欲发火，杨书堂先发制人起身正色道：“这是咱公安局的问中队长，拉不？”司机的嘴张了张，终究没吐一个字，一头钻进驾驶室开车上路了。
冯原距石堡川水利工地（大坝）尚有四十多里路，且全是又陡又窄的上山土石路，风大路险，满载大沙的卡车像老牛一样吭哧吭哧在山峦间蠕动。多亏坐在卡车上，否则我们天黑也到不了目的地。
蜷屈在车厢沙砾上，久别重逢的两位老朋友谈起“文革”乱象及个人遭遇，唏嘘不已。杨书堂无意间扫了我一眼，问：“这是谁？”老支书随口答：“我儿子。高中毕业没事干，在农业社下不了苦，也吃不饱，送到工地去混一混。”杨书堂一拍沙砾：“啊呀，咋不早说哩？干脆把娃交给我，我现在大坝指挥所当指挥，听说政办组最近招上调民工，我带娃去试试，不行再给你把娃送过去。”老支书未征我同意，连忙答应并谢承。于是，卡车行至本公社民工驻地史家河，老支书下了车。杨书堂将我带到大坝指挥所时已小半夜，安顿我住在他宿舍兼办公室的土窑洞里。
第二天下午，指挥所政办组对各公社推荐来的四十多名民工进行筛选。主选人是政办组长王云堂，还有政办组副组长、原《澄城报》主编刘一民。先目测，已去掉一半；再初审，又去掉不少；接着要求两个小时内自选体裁自拟题目，写一篇不少于八百字的文章。我写的是一篇散文，题目好像叫《群山遐思》。次日公布录用人员名单，七人被录用。除我外，同时被录用的还有我的高中同学李淑慧、初中同学井志平。被录用者被称之谓“上调民工”，即从工地临时借调到领导机关的民工。待遇不错：每月十八元伙食补贴，所在生产队给记全工分，当时这可算得上是份美差了。
石堡川河，发源于黄龙山冢字梁，常流量2m3／s。一九六九年陕西省革委会批准修建石堡川友谊水库灌溉工程，水库设计蓄水位936米，由澄城白水两县部分受益公社共同承建，当年十月动工。工程建设指挥部设在白水县山岭村，下设澄城和白水两个指挥部，参加建设的民工实行军事编制：公社为营，大队为连，生产队为排。澄城山后指挥所，设在大坝旁的洛川县界头庙公社盘曲河村附近，张超任总指挥，副指挥有杨书堂、郑福生、张君。下设政办组、工程组、后勤组、测量队、机电队、医院。
被录用的七人，有的当电话员、播音员、机线员，我和井志平、李淑慧被分到《大坝战报》编辑室当记者。《大坝战报》后改名《大坝简报》，主编先是刘一民，后是原县委办主任、“文革”初声噪一时的“黑笔杆子”姚仲哲。
春节来临，县委书记张宏图率县领导和各部门二百多名干部，移师石堡川大坝工地，与一万六千多名民工四班倒昼夜苦干，掀起热火朝天的筑坝大会战，县剧团也赶来昼夜演出助阵。我们跟随指挥所领导同志深入工地现场采访，在大坝旁广播室突击编写成稿即时播发，次日见《简报》。
平时除了采访、写稿，我们还要参加临时分配的其他活动。工地突击上土方或隧洞挖掘的关键时段，我们既是鼓动员、宣传员，还是安全员、监督员，常常两三天昼夜坚守在施工现场。工地架设广播线路，上山下沟蜿蜒三公里，我们和民工一起抬电杆、挖坑、拉线。
石堡川蓄水大坝高程930米，坝顶长380米、宽8米。填筑的黄土与大坝施工现场相对高差近百米，直线距离三里多，上万民工用近万辆架子车拉运黄土337万立方米。整个筑坝工地唯一的机械，是拖拉用来碾压坝堤的水泥碌碡的两台链轨拖拉机。为了引水上塬、彻底改善生活和生产条件，澄城白水的广大农民付出了艰辛的努力。他们住的是自己挖的只有门没有窗的低矮土窑洞，身下铺的是麦草，吃的是“三白”（白扛子馍、白开水、醮白盐），想的是“三糕”（咥油糕、尝晋糕、睡到日头一杆杆高），图的是“有水做饭洗衣服，地里庄稼不干枯”。当年的各级干部都是好样的，带头扛石头背沙子，亲自驾辕拉土，工地上分不清谁是干部谁是民工。在他们带领下，工地上有锁了门全家上阵的，有父子比干劲的，有志比山高的英雄少年和新婚夫妇，还湧现出“铁姑娘排”、“李铁梅班”等英雄群体。时任陕西省委第一书记李瑞山到大坝视察，看到满川遍野穿棱如织的民工和架子车，他几次把喇叭筒放到嘴边却说不出话来，眼含热泪频频向大坝的人群鞠躬致意。
那个年代，水利工地的整个气氛是沸腾的，人们的心情是单纯轻松的，我们青年人的生活也丰富多彩。闲暇之余，约三五好友，或上山采野果、挖甘草根（中草药），或下河摸蟹捞虾，一路歌声一路笑。夜半人静，仰着脸静心聆听走资派（老干部）们讲述古今历史、处世之道、趣闻笑谈。指挥所和各公社工地都有我们同一届毕业的高中学生，大家经常抽空聚在一起，翻课本，查资料，还借来《高等数学》《微积分》等书籍，苦啃苦学。十七八岁的青年人都狂妄地坚信：有朝一日自己能踏进大学校园，来个彻底的鲤鱼跳“农门”。
后来果真还有几个人考上了大学，如大学毕业后任职铁道部的同经栓，毕业后任职澄城烟厂总工程师兼副厂长的杨春茂，毕业后任职提胡公社副书记的问春乾……。我如果不当兵，自信也一定能考上大学。
一眨眼四十年过去了，石堡川水库对改善澄白两县农业基础条件起到了至关重要的作用。如今的石堡川库区碧波共荡漾，芳草绿荫，昔日的踪迹早已难觅。但我们几个当年的同事“大坝情结”愈加炽热，几乎每隔一两年都要去一趟。我们静静地贮立在巍峨的坝顶上，虔诚地祭奠已逝去的青春，深情地怀念那沸腾的岁月……
作者简介
问发贵，男，网名问心无愧，1954年生，澄城小河西人。大专学历，澄城县作家协会会员。兵商文政磨砺40载，退休西安赋闲10余年。年过60不思进取，忘情山水田园，沉醉仙乐丝弦，不求青春永驻，安于无愧无憾。
来源：乐享澄城
一九七二年七月高中毕业时，全国尚无大学招生，只得回乡参加集体生产劳动。初冬，我带着行李跟随大队支书问玉田骑自行车赶赴七十多里开外的石堡川水利工地。
迎着凛冽寒风行至冯原西街时，见一辆给水利工地拉沙子的卡车停在路边。老支书与司机搭讪，求捎一程。司机瞪眼断然拒绝后，摔上车门钻进旁边饭馆。此时卡车大厢上露出一个戴栽绒帽子的人头，叫道：“喂一一你是老问？”老支书趋前一看：“呀，老杨，你这家伙咋在这儿？”
被老支书称作老杨者，“文革”前县人民检察院检察长杨书堂，老支书三年困难时期回乡前在公安局的同事、好朋友。杨书堂让我们把自行车递上汽车大厢，又拉我俩上车。司机返回正欲发火，杨书堂先发制人起身正色道：“这是咱公安局的问中队长，拉不？”司机的嘴张了张，终究没吐一个字，一头钻进驾驶室开车上路了。
冯原距石堡川水利工地（大坝）尚有四十多里路，且全是又陡又窄的上山土石路，风大路险，满载大沙的卡车像老牛一样吭哧吭哧在山峦间蠕动。多亏坐在卡车上，否则我们天黑也到不了目的地。
蜷屈在车厢沙砾上，久别重逢的两位老朋友谈起“文革”乱象及个人遭遇，唏嘘不已。杨书堂无意间扫了我一眼，问：“这是谁？”老支书随口答：“我儿子。高中毕业没事干，在农业社下不了苦，也吃不饱，送到工地去混一混。”杨书堂一拍沙砾：“啊呀，咋不早说哩？干脆把娃交给我，我现在大坝指挥所当指挥，听说政办组最近招上调民工，我带娃去试试，不行再给你把娃送过去。”老支书未征我同意，连忙答应并谢承。于是，卡车行至本公社民工驻地史家河，老支书下了车。杨书堂将我带到大坝指挥所时已小半夜，安顿我住在他宿舍兼办公室的土窑洞里。
第二天下午，指挥所政办组对各公社推荐来的四十多名民工进行筛选。主选人是政办组长王云堂，还有政办组副组长、原《澄城报》主编刘一民。先目测，已去掉一半；再初审，又去掉不少；接着要求两个小时内自选体裁自拟题目，写一篇不少于八百字的文章。我写的是一篇散文，题目好像叫《群山遐思》。次日公布录用人员名单，七人被录用。除我外，同时被录用的还有我的高中同学李淑慧、初中同学井志平。被录用者被称之谓“上调民工”，即从工地临时借调到领导机关的民工。待遇不错：每月十八元伙食补贴，所在生产队给记全工分，当时这可算得上是份美差了。
石堡川河，发源于黄龙山冢字梁，常流量2m3／s。一九六九年陕西省革委会批准修建石堡川友谊水库灌溉工程，水库设计蓄水位936米，由澄城白水两县部分受益公社共同承建，当年十月动工。工程建设指挥部设在白水县山岭村，下设澄城和白水两个指挥部，参加建设的民工实行军事编制：公社为营，大队为连，生产队为排。澄城山后指挥所，设在大坝旁的洛川县界头庙公社盘曲河村附近，张超任总指挥，副指挥有杨书堂、郑福生、张君。下设政办组、工程组、后勤组、测量队、机电队、医院。
被录用的七人，有的当电话员、播音员、机线员，我和井志平、李淑慧被分到《大坝战报》编辑室当记者。《大坝战报》后改名《大坝简报》，主编先是刘一民，后是原县委办主任、“文革”初声噪一时的“黑笔杆子”姚仲哲。
春节来临，县委书记张宏图率县领导和各部门二百多名干部，移师石堡川大坝工地，与一万六千多名民工四班倒昼夜苦干，掀起热火朝天的筑坝大会战，县剧团也赶来昼夜演出助阵。我们跟随指挥所领导同志深入工地现场采访，在大坝旁广播室突击编写成稿即时播发，次日见《简报》。
平时除了采访、写稿，我们还要参加临时分配的其他活动。工地突击上土方或隧洞挖掘的关键时段，我们既是鼓动员、宣传员，还是安全员、监督员，常常两三天昼夜坚守在施工现场。工地架设广播线路，上山下沟蜿蜒三公里，我们和民工一起抬电杆、挖坑、拉线。
石堡川蓄水大坝高程930米，坝顶长380米、宽8米。填筑的黄土与大坝施工现场相对高差近百米，直线距离三里多，上万民工用近万辆架子车拉运黄土337万立方米。整个筑坝工地唯一的机械，是拖拉用来碾压坝堤的水泥碌碡的两台链轨拖拉机。为了引水上塬、彻底改善生活和生产条件，澄城白水的广大农民付出了艰辛的努力。他们住的是自己挖的只有门没有窗的低矮土窑洞，身下铺的是麦草，吃的是“三白”（白扛子馍、白开水、醮白盐），想的是“三糕”（咥油糕、尝晋糕、睡到日头一杆杆高），图的是“有水做饭洗衣服，地里庄稼不干枯”。当年的各级干部都是好样的，带头扛石头背沙子，亲自驾辕拉土，工地上分不清谁是干部谁是民工。在他们带领下，工地上有锁了门全家上阵的，有父子比干劲的，有志比山高的英雄少年和新婚夫妇，还湧现出“铁姑娘排”、“李铁梅班”等英雄群体。时任陕西省委第一书记李瑞山到大坝视察，看到满川遍野穿棱如织的民工和架子车，他几次把喇叭筒放到嘴边却说不出话来，眼含热泪频频向大坝的人群鞠躬致意。
那个年代，水利工地的整个气氛是沸腾的，人们的心情是单纯轻松的，我们青年人的生活也丰富多彩。闲暇之余，约三五好友，或上山采野果、挖甘草根（中草药），或下河摸蟹捞虾，一路歌声一路笑。夜半人静，仰着脸静心聆听走资派（老干部）们讲述古今历史、处世之道、趣闻笑谈。指挥所和各公社工地都有我们同一届毕业的高中学生，大家经常抽空聚在一起，翻课本，查资料，还借来《高等数学》《微积分》等书籍，苦啃苦学。十七八岁的青年人都狂妄地坚信：有朝一日自己能踏进大学校园，来个彻底的鲤鱼跳“农门”。
后来果真还有几个人考上了大学，如大学毕业后任职铁道部的同经栓，毕业后任职澄城烟厂总工程师兼副厂长的杨春茂，毕业后任职提胡公社副书记的问春乾……。我如果不当兵，自信也一定能考上大学。
一眨眼四十年过去了，石堡川水库对改善澄白两县农业基础条件起到了至关重要的作用。如今的石堡川库区碧波共荡漾，芳草绿荫，昔日的踪迹早已难觅。但我们几个当年的同事“大坝情结”愈加炽热，几乎每隔一两年都要去一趟。我们静静地贮立在巍峨的坝顶上，虔诚地祭奠已逝去的青春，深情地怀念那沸腾的岁月……
作者简介
问发贵，男，网名问心无愧，1954年生，澄城小河西人。大专学历，澄城县作家协会会员。兵商文政磨砺40载，退休西安赋闲10余年。年过60不思进取，忘情山水田园，沉醉仙乐丝弦，不求青春永驻，安于无愧无憾。
来源：乐享澄城
#原代细胞是如何培养的？选择组织块还是消化液培养法？
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是极好的工具。
那么，原代细胞是如何培养的呢？
常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。
（一）组织块培养法
许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。
1. 设备材料
培养箱、冰箱、超净工作台／无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。
2. 操作步骤
（1） 在无菌条件下，取待培养的组织适量，置入小烧杯中， 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉组织块表面的血污。
（2）用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
（3）再用Hanks 溶液反复漂洗， 直至液体不混浊为止。等组织块下沉，将烧杯倾斜，用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml 青霉素、200μg/ml 链霉素）的培养液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培养液。
（5）用弯头吸管吸取组织小块，均匀地置于培养皿内表面，吸去多余的培养液，各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖，做好标记， 置37°C 的CO2培养箱内。
（6） 2~4h 后，于超净工作台中，缓缓地向培养皿中加入上述含20％血清及双抗溶液( 100U/ml 青霉素及100μg/ml 链霉素）的培养液少量，以使组织块浸没在培养液中。
（7）轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱， 如无特殊情况，不必观察。1~2 周后，可观察到细胞从组织块边缘长出，形成生长晕。
（9） 一般说来，若培养液无明显改变， 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面，即可进行传代培养。
3. 需要说明及注意的问题
（1） 如果是用培养瓶而不是培养皿，则接种组织块千培养瓶底壁后， 要轻轻地翻转培养瓶，令瓶底在上，盖好瓶盖后轻轻置入37°C 的CO2 培养箱， 2~4h 后，取出培养瓶，在超净工作台内打开瓶盖，仍令组织块在上方。在组织块对面瓶壁加入适量上述培养液。然后，轻轻翻转培养瓶，让组织块浸没于培养液中。盖好瓶盖后放回二氧化碳孵箱，继续培养。
（2） 从培养皿表面游离下来的组织块，弃去即可。
（3） 如果使用玻璃培养瓶，而不是新的塑料培养瓶，则最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾胶原，这样不但有利于组织块的黏附，而且可使细胞生长得更好。
（4）本方法适于各种组织的培养，操作者还可根据自己的实验需要和细胞种类加以修改。
（二）消化培养法
它与上述组织块培养法的主要区别有2 点。一要用酶制剂（最常用的是胰蛋白酶）处理组织块，除去细胞间质，使细胞相互分离，形成细胞悬液；二细胞生长方式多为单层( monolayer ) 。本方法的优点在于单层细胞更易摄取营养、排出代谢产物，因此生长较快，可较快地应用于实验研究；缺点是步骤颇为繁琐，操作不慎易污染。此外，消化处理要恰到好处，不然对细胞会有一定的损伤作用。
1. 操作程序
（1） 在无菌条件下， 取待培养的组织1cm3左右，置入平皿或烧杯中，以适量Hanks 溶液消洗3 次，去掉组织块表面的血污及结缔组织。
（2）以锋利的眼科剪将组织块反复剪碎，得到约0.5mm x 1mm 大小的小块。
（3）以Hanks 溶液冲洗数遍，稍候组织块下沉，吸除Hanks 溶液。
（4）用少量Hanks 溶液，将组织小块吸入预先置有无菌的磁力搅拌子的锥形烧杯中，再加入15~30ml 上述胰蛋白酶消化液。
（5）将锥形烧杯用橡皮塞盖紧，外封以锡箔。然后移至预先置入37°C 培养箱内的电磁搅拌器上。
（6）打开搅拌器的电源开关，使搅拌子旋转， 关好培养箱，让胰蛋白酶进行消化。
（7）在消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴于载片上，于光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散，立即加入适量Hanks 溶液，终止消化。通常需消化10~20min 。
（8）先以100μm 不锈钢筛过滤，滤去未消化的组织块或大细胞团（如获得的细胞量少，这些组织块可继续进行消化，以便取得较多细胞）。继以20μ 不锈钢筛过滤。
（9）将取得的滤液进行低速（每分钟500~ 1000 转）离心5min，吸除上清液。并用Hanks 溶液离心清洗1~2 次，最后加入含血清的培养液，搅匀，制成细胞悬液。
（10）用计数板计数，确定细胞悬液浓度，通常以1×105~3×105个接种于培养瓶或培养皿中。
2. 需要说明及注意的问题
（1） 用何种酶进行消化可视所培养细胞而定，除胰蛋白酶外，常用1 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞；用II 型胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
（2）如果没有不锈钢筛， 可用4 层纱布代替，但纱布要预先经高温高压灭菌。
（3） 严格地说，原代培养是指未经传代的细胞，但在实际工作中，人们常将10 代以内的细胞用作原代培养细胞，因为此时的细胞基本上保持着原有的生物学特性。
（4） 从原代培养的操作步骤不难看出，原代细胞中含有多种细胞成分，即它们是异质型( heterogeneity) 的群体，因此在设计实验及分析结果时，切勿忘记这一因素。
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是极好的工具。
那么，原代细胞是如何培养的呢？
常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。
（一）组织块培养法
许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。
1. 设备材料
培养箱、冰箱、超净工作台／无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。
2. 操作步骤
（1） 在无菌条件下，取待培养的组织适量，置入小烧杯中， 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉组织块表面的血污。
（2）用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
（3）再用Hanks 溶液反复漂洗， 直至液体不混浊为止。等组织块下沉，将烧杯倾斜，用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml 青霉素、200μg/ml 链霉素）的培养液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培养液。
（5）用弯头吸管吸取组织小块，均匀地置于培养皿内表面，吸去多余的培养液，各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖，做好标记， 置37°C 的CO2培养箱内。
（6） 2~4h 后，于超净工作台中，缓缓地向培养皿中加入上述含20％血清及双抗溶液( 100U/ml 青霉素及100μg/ml 链霉素）的培养液少量，以使组织块浸没在培养液中。
（7）轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱， 如无特殊情况，不必观察。1~2 周后，可观察到细胞从组织块边缘长出，形成生长晕。
（9） 一般说来，若培养液无明显改变， 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面，即可进行传代培养。
3. 需要说明及注意的问题
（1） 如果是用培养瓶而不是培养皿，则接种组织块千培养瓶底壁后， 要轻轻地翻转培养瓶，令瓶底在上，盖好瓶盖后轻轻置入37°C 的CO2 培养箱， 2~4h 后，取出培养瓶，在超净工作台内打开瓶盖，仍令组织块在上方。在组织块对面瓶壁加入适量上述培养液。然后，轻轻翻转培养瓶，让组织块浸没于培养液中。盖好瓶盖后放回二氧化碳孵箱，继续培养。
（2） 从培养皿表面游离下来的组织块，弃去即可。
（3） 如果使用玻璃培养瓶，而不是新的塑料培养瓶，则最好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾胶原，这样不但有利于组织块的黏附，而且可使细胞生长得更好。
（4）本方法适于各种组织的培养，操作者还可根据自己的实验需要和细胞种类加以修改。
（二）消化培养法
它与上述组织块培养法的主要区别有2 点。一要用酶制剂（最常用的是胰蛋白酶）处理组织块，除去细胞间质，使细胞相互分离，形成细胞悬液；二细胞生长方式多为单层( monolayer ) 。本方法的优点在于单层细胞更易摄取营养、排出代谢产物，因此生长较快，可较快地应用于实验研究；缺点是步骤颇为繁琐，操作不慎易污染。此外，消化处理要恰到好处，不然对细胞会有一定的损伤作用。
1. 操作程序
（1） 在无菌条件下， 取待培养的组织1cm3左右，置入平皿或烧杯中，以适量Hanks 溶液消洗3 次，去掉组织块表面的血污及结缔组织。
（2）以锋利的眼科剪将组织块反复剪碎，得到约0.5mm x 1mm 大小的小块。
（3）以Hanks 溶液冲洗数遍，稍候组织块下沉，吸除Hanks 溶液。
（4）用少量Hanks 溶液，将组织小块吸入预先置有无菌的磁力搅拌子的锥形烧杯中，再加入15~30ml 上述胰蛋白酶消化液。
（5）将锥形烧杯用橡皮塞盖紧，外封以锡箔。然后移至预先置入37°C 培养箱内的电磁搅拌器上。
（6）打开搅拌器的电源开关，使搅拌子旋转， 关好培养箱，让胰蛋白酶进行消化。
（7）在消化过程中，每隔一定时间吸取消化物滴于载片上，于光学显微镜下观察，检查细胞是否分散成单个。若大部分细胞已分散，立即加入适量Hanks 溶液，终止消化。通常需消化10~20min 。
（8）先以100μm 不锈钢筛过滤，滤去未消化的组织块或大细胞团（如获得的细胞量少，这些组织块可继续进行消化，以便取得较多细胞）。继以20μ 不锈钢筛过滤。
（9）将取得的滤液进行低速（每分钟500~ 1000 转）离心5min，吸除上清液。并用Hanks 溶液离心清洗1~2 次，最后加入含血清的培养液，搅匀，制成细胞悬液。
（10）用计数板计数，确定细胞悬液浓度，通常以1×105~3×105个接种于培养瓶或培养皿中。
2. 需要说明及注意的问题
（1） 用何种酶进行消化可视所培养细胞而定，除胰蛋白酶外，常用1 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞；用II 型胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
（2）如果没有不锈钢筛， 可用4 层纱布代替，但纱布要预先经高温高压灭菌。
（3） 严格地说，原代培养是指未经传代的细胞，但在实际工作中，人们常将10 代以内的细胞用作原代培养细胞，因为此时的细胞基本上保持着原有的生物学特性。
（4） 从原代培养的操作步骤不难看出，原代细胞中含有多种细胞成分，即它们是异质型( heterogeneity) 的群体，因此在设计实验及分析结果时，切勿忘记这一因素。
#桂林楼市# 桂林市七星区新建村城中村改造项目
房屋征收补偿安置方案
(征求意见稿)
为加快推进桂林市七星区新建村委城中村改造项目建设,打造桂林国际旅游胜地，提升桂林城市品位，提高村民生活质量，现根据房屋征收的政策法规，结合项目实际，制定本方案。
一、安置办法
(一)提供安置房方式
1、安置对象:在项目征地范围内的被拆迁户。
2、安置地点:桂林市七星区绕城高速尧山处西侧。
3、公寓房安置，安置房屋由政府统一规划，统一建设。
4、安置标准
①有本村户籍、享受村民待遇的，按人均75㎡的建筑面积住房进行安置，在规定时间内签订协议并主动完成搬迁的，奖励10㎡的商业用房面积份额(由集体统一经营管理，按份额分配收益)和每户一个地下室车位。
②不享受村民待遇，但有有证房屋的被拆迁户，有证房屋的建筑面积按1:1进行置换，不享受商业用房面积份额和地下车位。
5、选房办法
选房以先签先选为原则，没有在规定时间内签订《拆迁协议》的，取消选房资格，由指挥部按政策进行安置。
6、产权调换标准
①有证房屋产权面积按1:1比例进行产权置换。当有证房屋面积小于安置房指标面积的，差额面积按建设成本价购买;当有证房屋面积大于安置房指标面积的，按1:1比例进行产权置换后，差额面积只能选择货币补偿或公寓楼补足。差额面积小于公寓房最小户型建筑面积50%的进行货币补偿，差额面积大于公寓房最小户型建筑面积50%的可选择接近面积的公寓房进行产权调换，产权调换后，超出面积在10%及以内的按建设成本价购买，超出在10%以上的按市场价格6000元/m2购买。
②无证房屋的村民，以建设成本价购买公寓房指标面积，如公寓房安置面积超过安置指标10%及以内的，按建设成本价购买，如公寓房安置面积超过安置指标最小户型面积10%以上的部分，按市场价格6000元/m2购买。
7、公寓安置房屋建设成本价格
公寓安置房屋均为清水房，建设成本价格均暂定为2000元/㎡(建筑面积)，以结算为准，结算价格大于2000元/㎡的，按2000元/㎡计算，结算价格小于2000元/㎡的，按实际计算。
8、自愿放弃安置指标面积的补助标准
公寓房安置方式，自愿放弃安置或部分放弃安置指标面积的，给予2000元/㎡的补助。放弃安置指标的按88㎡/人(含安置面积和奖励商业用房面积份额、地下车位)计算。
(二)货币补偿方式
1、有证房屋的村民选择货币补偿安置的，在评估价值基础上，一是给予被征收人被征收房屋评估价值10%的货币补助；二是在规定时间15日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值15%的搬迁奖励，在规定时间16-30日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值10%的搬迁奖励，在规定时间31-45日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值5%的搬迁奖励，超过规定时间45日没有签订协议的，不给予搬迁奖励。
2、被征收房屋面积大于等于安置面积而选择货币补偿的村民不享受放弃指标的补助。
(三)自行落实宅基地建房方式
1、对象:有本村户籍、享受村民待遇、符合一户一宅政策安置的村民。
2、地点:符合村庄规划的建设用地。
3、标准:农房审批标准。
4、按农房建设要求、自行建设。
5、被征收房屋补偿标准：有证房屋，在评估价值基础上，在规定时间15日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值15%的搬迁奖励，在规定时间16-30日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值10%的搬迁奖励，在规定时间31-45日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值5%的搬迁奖励，超过规定时间45日没有签订协议的，不给予搬迁奖励。
三、无证住房自拆费标准
(一)自拆迁费标准:砖瓦房(盖水泥瓦)500—700元/㎡，砖瓦房(盖小瓦)600—850元/㎡，砖混房750—1000/㎡，具体补偿价格视房屋的新旧、装修情况而定。
(二)签约奖励:在规定时间内签订协议的，给予200元/㎡的奖励，没有在规定时间内签订协议，被强制拆除的，没有任何奖励。
四、房屋装修、搬家、临时安置(过渡)等补偿补助标准
(一)有证房屋装修补偿标准:普通装修300元/㎡，精装修400元/㎡，豪华装修500元/㎡。在规定时间内签约的给予有证建筑面积装修100元/㎡奖励;在规定时间内交房的给予有证建筑面积装修100元/㎡奖励，不按时签订协议和搬迁的，不予奖励。无证房屋没有装修补偿。
(二)搬家补助费:产权调换的给予两次搬家补助费，货币补偿的给予一次搬家补助费。每次搬家补助费按10元/㎡(产权面积)计算，每次搬家费总计不足700元的或无证房屋户，统一按700元给付。
(三)临时安置费(过渡费):
1.公寓房安置的过渡期为24个月，货币补偿的过渡期为3个月，安排宅基地建房的过渡期为12个月。选择自行过渡安置，临时安置费按产权面积每月12元/㎡计算。
2.每户每月不足800元的或无证房屋户，统一按800元给付。公寓房逾期交房的临时安置费按150%支付。
3.选择由指挥部安排临时过渡安置的，不予支付临时安置费。
4.安置房屋交付使用后，停付临时安置费。
(四)附着物补偿标准及被征收房屋内的空调和独立的水、电表等迁移按我区现行标准实施。
五、补偿、安置相关问题说明
(一)安置人数以公布《桂林市七星区新建村城中村改造项目房屋征收补偿安置方案》实施之日为准，即2021年 月 日。
(二)安置人数和安置面积的确定办法:在征地拆迁范围内的被拆迁户，如在征地拆迁范围外有有证房屋的，确定安置人数是按安置标准(人均占地20㎡)扣除征地拆迁范围外有证房屋的人数。如一户多宅户的户籍人口为7人，在征地拆迁范围外有占地60㎡的有证房屋，安置人口确定时要扣除3人(60㎡÷20㎡=3人)，即安置人口为4人，安置面积为300㎡(75㎡×4人)。抵扣征地拆迁范围外的有证房屋，经批准后可以在原址原面积按规定改建。
(三)村民签订《房屋征收补偿安置协议》并将拆迁房屋钥匙交到指挥部后开始支付临时安置费、搬迁费。公寓房安置方式的，房屋装修补偿费、其它补偿(自拆)费要与购房款抵扣，抵扣后，如有多余的款额，在签订《房屋征收补偿安置协议》的20个工作日内支付给拆迁户;如果不足抵扣的，则在安置房交付使用前30日内全部付清，未付清的，不予交房并停发过渡费。
(四)项目征地范围内的被征收房屋村民在提供安置房、货币补偿和自行落实宅基地建房三种安置方式中，只能选择其中一种安置方式，且在今后不再享受农村住房建设政策。
(五)未尽事宜由桂林市七星区新建村城中村改造项目指挥部解释。 https://t.cn/RyhplWw
房屋征收补偿安置方案
(征求意见稿)
为加快推进桂林市七星区新建村委城中村改造项目建设,打造桂林国际旅游胜地，提升桂林城市品位，提高村民生活质量，现根据房屋征收的政策法规，结合项目实际，制定本方案。
一、安置办法
(一)提供安置房方式
1、安置对象:在项目征地范围内的被拆迁户。
2、安置地点:桂林市七星区绕城高速尧山处西侧。
3、公寓房安置，安置房屋由政府统一规划，统一建设。
4、安置标准
①有本村户籍、享受村民待遇的，按人均75㎡的建筑面积住房进行安置，在规定时间内签订协议并主动完成搬迁的，奖励10㎡的商业用房面积份额(由集体统一经营管理，按份额分配收益)和每户一个地下室车位。
②不享受村民待遇，但有有证房屋的被拆迁户，有证房屋的建筑面积按1:1进行置换，不享受商业用房面积份额和地下车位。
5、选房办法
选房以先签先选为原则，没有在规定时间内签订《拆迁协议》的，取消选房资格，由指挥部按政策进行安置。
6、产权调换标准
①有证房屋产权面积按1:1比例进行产权置换。当有证房屋面积小于安置房指标面积的，差额面积按建设成本价购买;当有证房屋面积大于安置房指标面积的，按1:1比例进行产权置换后，差额面积只能选择货币补偿或公寓楼补足。差额面积小于公寓房最小户型建筑面积50%的进行货币补偿，差额面积大于公寓房最小户型建筑面积50%的可选择接近面积的公寓房进行产权调换，产权调换后，超出面积在10%及以内的按建设成本价购买，超出在10%以上的按市场价格6000元/m2购买。
②无证房屋的村民，以建设成本价购买公寓房指标面积，如公寓房安置面积超过安置指标10%及以内的，按建设成本价购买，如公寓房安置面积超过安置指标最小户型面积10%以上的部分，按市场价格6000元/m2购买。
7、公寓安置房屋建设成本价格
公寓安置房屋均为清水房，建设成本价格均暂定为2000元/㎡(建筑面积)，以结算为准，结算价格大于2000元/㎡的，按2000元/㎡计算，结算价格小于2000元/㎡的，按实际计算。
8、自愿放弃安置指标面积的补助标准
公寓房安置方式，自愿放弃安置或部分放弃安置指标面积的，给予2000元/㎡的补助。放弃安置指标的按88㎡/人(含安置面积和奖励商业用房面积份额、地下车位)计算。
(二)货币补偿方式
1、有证房屋的村民选择货币补偿安置的，在评估价值基础上，一是给予被征收人被征收房屋评估价值10%的货币补助；二是在规定时间15日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值15%的搬迁奖励，在规定时间16-30日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值10%的搬迁奖励，在规定时间31-45日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值5%的搬迁奖励，超过规定时间45日没有签订协议的，不给予搬迁奖励。
2、被征收房屋面积大于等于安置面积而选择货币补偿的村民不享受放弃指标的补助。
(三)自行落实宅基地建房方式
1、对象:有本村户籍、享受村民待遇、符合一户一宅政策安置的村民。
2、地点:符合村庄规划的建设用地。
3、标准:农房审批标准。
4、按农房建设要求、自行建设。
5、被征收房屋补偿标准：有证房屋，在评估价值基础上，在规定时间15日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值15%的搬迁奖励，在规定时间16-30日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值10%的搬迁奖励，在规定时间31-45日内签订协议并主动完成搬迁的给予被征收房屋评估价值5%的搬迁奖励，超过规定时间45日没有签订协议的，不给予搬迁奖励。
三、无证住房自拆费标准
(一)自拆迁费标准:砖瓦房(盖水泥瓦)500—700元/㎡，砖瓦房(盖小瓦)600—850元/㎡，砖混房750—1000/㎡，具体补偿价格视房屋的新旧、装修情况而定。
(二)签约奖励:在规定时间内签订协议的，给予200元/㎡的奖励，没有在规定时间内签订协议，被强制拆除的，没有任何奖励。
四、房屋装修、搬家、临时安置(过渡)等补偿补助标准
(一)有证房屋装修补偿标准:普通装修300元/㎡，精装修400元/㎡，豪华装修500元/㎡。在规定时间内签约的给予有证建筑面积装修100元/㎡奖励;在规定时间内交房的给予有证建筑面积装修100元/㎡奖励，不按时签订协议和搬迁的，不予奖励。无证房屋没有装修补偿。
(二)搬家补助费:产权调换的给予两次搬家补助费，货币补偿的给予一次搬家补助费。每次搬家补助费按10元/㎡(产权面积)计算，每次搬家费总计不足700元的或无证房屋户，统一按700元给付。
(三)临时安置费(过渡费):
1.公寓房安置的过渡期为24个月，货币补偿的过渡期为3个月，安排宅基地建房的过渡期为12个月。选择自行过渡安置，临时安置费按产权面积每月12元/㎡计算。
2.每户每月不足800元的或无证房屋户，统一按800元给付。公寓房逾期交房的临时安置费按150%支付。
3.选择由指挥部安排临时过渡安置的，不予支付临时安置费。
4.安置房屋交付使用后，停付临时安置费。
(四)附着物补偿标准及被征收房屋内的空调和独立的水、电表等迁移按我区现行标准实施。
五、补偿、安置相关问题说明
(一)安置人数以公布《桂林市七星区新建村城中村改造项目房屋征收补偿安置方案》实施之日为准，即2021年 月 日。
(二)安置人数和安置面积的确定办法:在征地拆迁范围内的被拆迁户，如在征地拆迁范围外有有证房屋的，确定安置人数是按安置标准(人均占地20㎡)扣除征地拆迁范围外有证房屋的人数。如一户多宅户的户籍人口为7人，在征地拆迁范围外有占地60㎡的有证房屋，安置人口确定时要扣除3人(60㎡÷20㎡=3人)，即安置人口为4人，安置面积为300㎡(75㎡×4人)。抵扣征地拆迁范围外的有证房屋，经批准后可以在原址原面积按规定改建。
(三)村民签订《房屋征收补偿安置协议》并将拆迁房屋钥匙交到指挥部后开始支付临时安置费、搬迁费。公寓房安置方式的，房屋装修补偿费、其它补偿(自拆)费要与购房款抵扣，抵扣后，如有多余的款额，在签订《房屋征收补偿安置协议》的20个工作日内支付给拆迁户;如果不足抵扣的，则在安置房交付使用前30日内全部付清，未付清的，不予交房并停发过渡费。
(四)项目征地范围内的被征收房屋村民在提供安置房、货币补偿和自行落实宅基地建房三种安置方式中，只能选择其中一种安置方式，且在今后不再享受农村住房建设政策。
(五)未尽事宜由桂林市七星区新建村城中村改造项目指挥部解释。 https://t.cn/RyhplWw
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