【科普篇之新技术分享-你所不知道的荧光微球(上篇)】

【前言】
本期与大家分享一篇来自行业大牛的研究综述,主要围绕荧光编码微球的制备方法、荧光编码微球的主要生化应用(核酸、蛋白质以及CTC检测)、基于智能手机或者可折叠微流控芯片的POCT的应用,以及未来展望等四大板块内容进行阐述。

【背景介绍】
荧光编码微球具有优良的比表面积,提供了更加灵敏的检测,同时荧光编码微球具有编码以及解码过程简单,编码容量大以及可大批量制备等优势。荧光编码微球一般利用荧光的发射波长以及强度进行编码。荧光编码微球的编码元件包括半导体的量子点、有机荧光染料以及上转换纳米颗粒等主要编码元件。

半导体的量子点的发射光谱窄,荧光稳定性好,较宽的的激发光谱可以实现多种量子点的单一波长激发。有机荧光染料价格低廉、种类较多,适用于多种编码方法以及多种材质的微球,不同批次间的荧光均一性较好。上转换纳米颗粒利用近红外发激光,可以避免生物分子背景荧光的干扰,另外可以避免不同发射波长间的共振能量转移现象。

【荧光编码微球的制备方法】
有机溶剂溶胀法:聚合物微球在有机溶剂中溶胀,染料或者量子点等渗入微球内部,移除有机溶剂之后,微球的聚合物网络发生收缩,并将染料或者量子点包裹在微球内部,关键点:调整染料或者量子点的种类或者浓度可以实现不同的荧光编码。

方法改进:利用有机溶剂溶胀-溶剂蒸发法,利用量子点以及微球的氯仿溶液在密封条件下搅拌2h溶胀微球,之后将溶液在空气氛围下搅拌2h,随着氯仿的挥发,溶液中的量子点的浓度逐步升高,促使量子点渗入微球内部,该方法可以提高荧光编码微球的荧光稳定性以及均一性。

利用该方法最典型的的商业产品就是Luminex公司的microPlex微球,主要就是利用红色以及近红外两种染料对聚苯乙烯微球进行编码,两种染料可以分别设定10个浓度梯度,得到100种荧光编码微球,并开发了对应xMAP多重样本分析平台,该方法增加了包裹的效率以及量子点分布的均一性。

荧光编码微球第二种主流制备方法是层层的自组装法(表面交联法/利用疏水作用的结合)。

层层自组装法:利用聚电解质以及相反电性量子点之间的静电吸附作用,可以实现聚电解质以及量子点在微球表面的交替结合。调整聚电解质以及量子点结合的层数,可以控制微球表面负载的量子点的数量。

表面交联法:为了实现微球表面的固相引物的合成,Nanthakumar等利用高度交联,非溶胀的聚苯乙烯微球,通过在微球表面共价交联BODIPY染料分子,实现荧光编码寡核苷酸合成载体的制备。微球表面交联的染料数量由染料的浓度而定,利用浓度逐级稀释(10倍)的染料溶液,得到四种强度的荧光编码。

疏水作用结合:Hu等利用利用疏水作用的方法制备了量子点掺杂的介孔二氧化硅微球,利用该方法制备的量子点掺杂的介孔二氧化硅微球,编码微球表面结合聚乙二醇后包裹二氧化硅壳层。二氧化硅包裹后的荧光微球具有非常高的稳定性,避免溶剂中的量子点泄露以及化学诱导的荧光。

荧光编码微球还有通过包埋法来进行制备的,比如利用有机染料来进行编码,有机染料编码:Zhang利用单分散聚苯乙烯微球进行种子聚合,罗丹明6G(R6G)染料在聚合过程中被包埋在壳层内,调整染料的浓度可以准确控制微球的荧光强度,制备了12种不同荧光强度的荧光编码微球。Liu制备了烯丙基化的罗丹明B、荧光素以及尼罗红,将染料与聚苯乙烯的单体混合,通过分散聚合制备了三种荧光编码的微球,染料分子共聚在微球内部。有机溶胶-凝胶法(三聚氰胺–甲醛树脂微球),染料分子首先与树枝状的三聚氰胺-甲醛预聚物的分子结合,在预聚物进一步生成微球的同时,将染料分子包裹在微球内部。该方法对多种染料都有很高的包裹率,微球具有较高的热以及机械的稳定性,保存过程中几乎无染料的泄露。

量子点编码的方法:Yang等利用可聚合的表面活性剂作为乳化剂以及相转移剂,通过改进的细乳液聚合,将3-巯基丙酸修饰的CdTe量子点均匀包裹在聚苯乙烯微球内部。聚苯乙烯具有致密结构以及疏水特性,使得微球的荧光几乎不受到ph的影响。Graf的将聚乙烯吡咯烷酮修饰的量子点吸附到氨基功能化的二氧化硅微球的表面,在微球表面包裹二氧化壳层,将量子点固定在微球内部。Vaidya等在悬浮聚合过程中,将量子点包裹在聚乙烯微球内部,调整量子点的颜色以及数量实现了荧光编码微球的制备。(激光共聚焦显微镜分析证明,量子点在微球内部呈现多个团聚体分布,微球的发射光谱与非聚集态的量子点相比没有发生位移。)

刺激响应性的水凝胶的方法:Kuang课题组利用N-异丙基丙烯酰胺与4-乙烯基吡啶共聚物(PNIPVP)水凝胶的pH响应性,在酸性的条件下将溶胀的凝胶微球与水溶性的量子点进行共孵育,微球离心分散在ph=7的水溶液中,凝胶网络收缩将量子点包裹在微球内部,量子点在微球内均匀分布,将不同种类的量子点按照不同比例包裹在凝胶微球内,可以获得不同荧光编码的凝胶微球。

微流控技术法来制备荧光编码微球:Gerver课题组利用了全自动的微流控器件,制备了镧系的纳米荧光材料编码的亲水性聚合物微球。镧系的纳米荧光材料、聚乙二醇双丙烯酸甲酯以及光引发剂等溶剂在甲醇中作为分散相,在流体通道中生成液滴,再经紫外线照射引发液滴内聚合反应,就得到荧光编码微球。Ji等利用微流控技术,制备了量子点编码的海藻酸钙微球,含有量子点、海藻酸钠的液滴与连续流动相中的钙离子作用,生成了包裹量子点的海藻酸钙凝胶微球。利用金字塔状的微流体网络可以实现量子点逐级浓度梯度的自动化。

最后总结下荧光编码微球制备方法的主要优点以及不足之处,如下表所示。

【荧光编码微球的主要生化应用】
荧光微球的生化检测主要利用两种方式,一种为悬浮芯片技术,另外一种方式基于微流控的技术或者微井阵列的方式。

悬浮芯片的原理如下图(悬浮芯片的检测原理示意图)所示:编码微球作为免疫检测的载体,所携带的编码信息同时用作表面结合探针分子的标记。该芯片的分析过程为目目标分子先与编码微球表面负载的探针分子结合,再进一步与带有荧光标记的报告分子结合,形成夹心式结构的复合体,微球带有的编码信息用于区分目标分子的种类,而报告分子的信号强弱则反映目标分子的含量。

Simoa技术将约250,000个捕获抗体包被在2.7μm的小磁珠上,检测时加入生物素标记的检测抗体及亲和素偶联的酶和底物,通过一层油将单个磁珠分别封闭在238,000个4.5μm的反应孔(Well)中进行反应。由于每个小孔的反应体系仅仅为50飞升,比传统ELISA小20亿倍,这时小孔中即使只有一个分子,其催化底物就可产生3000个荧光分子,通过CCD摄像头即可捕获到信号,利用泊松分布理论可计算出阳性荧光小孔(OnWell)对应的蛋白浓度值,实现数字化单分子检测的愿望。

【星烁量子点微球】
星烁量子点微球通过将量子点包埋于无机材料内部,可使量子点不易受到外界环境影响,显著提高量子点的稳定性以及检测灵敏度。进行了亲水包覆的量子点微球,生物相容性好,非特异性吸附低,是高灵敏度生物检测的优秀材料。欢迎了解产品详情:https://t.cn/A6XGsRB5

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【水溶肥价格不同时,该如何选择?】
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随着近两年,种植户对水溶肥产品的认可度不断攀升,后期市场潜力巨大。很多大、小厂家、复合肥厂家、农药厂家争先开始生产水溶肥,加上种植户的辨别能力不是很强,现在水溶肥市场产品质量参差不齐,而种植户眼花缭乱,不知如何选择。很多人提出疑问,为什么外观含量都一样,水溶肥价格会差别那么大呢?小编给大家一起分析一下:

一、产品含量决定水溶肥价格

正规厂家的水溶肥,一般都会明确氮磷钾的配比和含量,而且会特别添加螯合态的中微量元素,含量只高不低。但是,由于国家对于水溶肥的检测合格标准只限于氮磷钾、部分微量元素含量总计,只要满足低标准就是合格品。这就使得很多小厂家开始打擦边球,做一些表面文章,在里面偷工减量。要知道中微量元素多一个含量少一个含量,一吨水溶肥价格都差好几万。

二、原材料来源决定了水溶肥价格

水溶肥一般都是以氮磷钾为主,看着含量一样,但是元素的来源却大不同。比如:我们常见的氮元素来源可以来自硫酸铵、尿素、硝酸钾等,虽然都能转化成氮元素被作物吸收,但是吸收利用率,纯度,对土壤的副作用却大不同,这也就决定了水溶肥价格大不同。就像夫沃施离子磷酸二氢钾,不伤细胞易流动的磷酸二氢钾,选用的是非常好的氮源,土壤残留非常少,营养丰富。

三、原材料等级决定了水溶肥价格

水溶肥里面氮磷钾来源的等级不同,也同样决定了水溶肥价格的不同。一般水溶肥原材料等级来源分为工业级、农业级、饲料级等。正规水溶肥厂家一般都会选用工业级的原材料,工业级的原料在纯度上要高于其他等级的原材料,虽然都是氮磷钾,但是工业级的要比农业级的杂质要少的多。所以说不同原材料的级别也就决定了水溶肥价格的千差万别。

我了解的夫沃施公司的沃叶免疫大量元素,提高免疫更高产的冲施肥,属于高浓缩粉剂大量元素水溶肥,所采用的原料都是工业级的。而且下面用户的口碑也都非常不错,肥效从苗期到采果后期表现都非常不错,抗早衰,肥的后劲特别足,改善品质,连续使用整体植株的抗病能力也非常强。因此即使水溶肥价格偏高,也有非常多的用户选择使用。

通过以上的介绍,想必大家理解为何外观都差不多,但是水溶肥价格却天差地别的原因了吧。其实,我们都想用低成本,来获得好收益,但是便宜的肥料,才是昂贵的投入,解决不了根本问题,可能还会造成副作用,得不偿失。

在这里,还是建议大家理性选择产品,不要贪图便宜吃大亏,选择正规厂家产品。像夫沃施公司的产品,原料来源正规,产品质量稳定,国内连续销售七年来,得到了广大种植户的一致认可和好评。

本篇文章所述内容均为夫沃施水溶肥厂家客户真实反馈原创,未经授权,谢绝转载,如需转载,须注明出处。

#宣汉我的家# 【宣汉县水果协会科普技术】种果树必懂的9个问题,值得收藏!
1问:施肥时间为什么确定在6月10日和9月10日左右?
答:因为果树根系一年有三个活动旺盛期,分别是3、6、9月,外在表现一个是春梢停长,一个是秋梢停长,停长时间大约在6月10日和9月10日左右,所以此时施肥果树根系吸收最多,肥料利用率最大。另外,春季施肥容易伤根,同时春季施用氮肥极易阻碍钙的吸收,所以,只要这两次肥料运筹得当,春季一般不用施肥。
2问:果树施肥配方是如何确定的?
答:果树和其他作物一样,不但需要氮磷钾,还需要中量元素钙、镁、硫、硅,以及微量元素锌、铁、硼、锰等和稀土元素。每种元素虽然需求量不等,但它们的作用各不相同,无法相互替代。所以,在施肥配方上,我们把这些元素都要考虑进去。这就是我们推广的“大锅菜全元素”施肥技术。
3问:施肥数量是如何确定的?
答:根据果树的需肥规律,每生产相应的果实需要的营养元素不同。
4问:果树施肥方式为什么要实行浅沟台畦?
答:果树整个生育期只需要两次大水漫灌,一个是花前,一个是采果之后。除此之外,花芽分化和控梢都需要适度干旱,浅沟台畦可以解决无法浇小水的困惑。另外,浅沟台畦还可以提高地表面积、将根系引向深入、改善果树小气候等特点。
5问:为什么要重视中微量元素肥料的应用?
答:随着近几年化肥用量的增加,果树对中微量元素的需求越显紧迫,尤其是一些盲目施肥的果园,各种问题表现的比较明显。
6问:果树夏季施肥为什么氮肥不宜过多?
答:因为果树夏季追肥正是春梢停长阶段,之后长出的新梢为秋梢,秋梢的生长需要消耗大量养分,不利于花芽的分化和形成,而秋梢在冬季又容易发生冻害。
7问:秋施基肥为什么钾肥不宜过多?
答:秋施基肥的目的是为了积累果树的储藏营养,来年的春梢、开花以及幼果的成形,都是消耗的储藏营养。果树一年的营养需求,春季大约要消耗全年氮素的60%,钾素的10%。所以储藏营养中不需要过多的钾肥。除此之外,钾肥和钙有拮抗作用,幼果期需要钙最多,如果秋施基肥中钾肥太多,容易出现缺钙而影响果面。所以,秋施基肥中钾肥不宜过多。
8问:为什么过多施用磷肥容易得缺素症?
答:大多数的磷酸盐都不溶于水,所以,磷肥过多,就会把土壤中金属阳离子固定,形成缺素现象,所以,磷肥应用要适量。
9问:为什么果树施肥不宜施用硝态氮肥?
答:硝态氮肥以阴离子的形态存在,土壤胶体也是阴离子,所以,硝态氮肥极易流失,利用率不高,同时,硝态氮肥在土壤中活动速度快,易使果树窜条。另外,过量的硝态氮还会污染环境,所以在果园不提倡应用硝态氮肥和含有硝态氮肥的复合肥。


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