《小普课堂十四》
[哆啦A梦花心]【质粒抽提】
质粒作为载体广泛应用于目的基因的克隆、测序、表达等工作。质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。
理论基础:
细菌质粒是一类双链闭环的小分子DNA,独立存在于染色体之外,能够进行自我复制。
提取质粒DNA的方法:
(一)碱裂解法
碱裂解法即用碱与SDS从E. coli(大肠杆菌)中分离制备质粒DNA。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。在处理时间和强度合适的情况下,当PH值恢复中性时,质粒DNA双链就会再次形成。
(二)煮沸法
将细菌悬浮于含有Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中,然后加热到100℃破坏细菌外壁、使蛋白质和染色体DNA变性、并解开DNA链的碱基配对。但是。闭环质粒DNA链因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构,所以彼此不会分离。当温度下降后,闭环DNA的碱基又各就各位,形成超螺旋分子。接着离心除去变性的染色体DNA和蛋白质,就可从上清中回收质粒DNA。
(三)质粒提取试剂盒
用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取,它结合了优化的碱裂解法,以及方便快捷的硅膜离心技术,具有高效,快捷的特点,能在30min内完成全部操作。
其中:碱裂解法是从事生物分子学研究的实验室每天都要用到的常规技术,我们一起来看下吧~#小普课堂#
[哆啦A梦花心]【质粒抽提】
质粒作为载体广泛应用于目的基因的克隆、测序、表达等工作。质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。
理论基础:
细菌质粒是一类双链闭环的小分子DNA,独立存在于染色体之外,能够进行自我复制。
提取质粒DNA的方法:
(一)碱裂解法
碱裂解法即用碱与SDS从E. coli(大肠杆菌)中分离制备质粒DNA。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。在处理时间和强度合适的情况下,当PH值恢复中性时,质粒DNA双链就会再次形成。
(二)煮沸法
将细菌悬浮于含有Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中,然后加热到100℃破坏细菌外壁、使蛋白质和染色体DNA变性、并解开DNA链的碱基配对。但是。闭环质粒DNA链因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构,所以彼此不会分离。当温度下降后,闭环DNA的碱基又各就各位,形成超螺旋分子。接着离心除去变性的染色体DNA和蛋白质,就可从上清中回收质粒DNA。
(三)质粒提取试剂盒
用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取,它结合了优化的碱裂解法,以及方便快捷的硅膜离心技术,具有高效,快捷的特点,能在30min内完成全部操作。
其中:碱裂解法是从事生物分子学研究的实验室每天都要用到的常规技术,我们一起来看下吧~#小普课堂#
寰基基因芯片高通量核酸检测,创新性的实现多种病原体及人体自身基因的并行检测。例如我公司开发的呼吸系统检测项目(见下表),高通量检测即一次检测既可检测冠状病毒,还可同时检测其它的43种呼吸道病原体,满足诊断、治疗、防疫等多种应用需要。
只需一次检测,可覆盖44种呼吸道病原体:
病毒27项 细菌14项 真菌1项 支原体、衣原体2项
新型冠状病毒(SARS-CoV-2019) 肺炎链球菌(SP) 白色念珠菌(CAL) 肺炎支原体(MP)
甲型流感病毒(H1N1) 流感嗜血杆菌(HI) 肺炎衣原体(CP)
甲型流感病毒(H1N2) 鲍曼不动杆菌(AB)
甲型流感病毒(H3N2) 结核分枝杆菌(TB)
乙型流感病毒(IFV-B) 嗜肺军团菌(LP)
合胞体病毒(RSV-A) 百日咳杆菌(BP)
合胞体病毒(RSV-B) 肺炎克雷伯氏菌(KP)
鼻病毒(RHV) 脑膜炎球菌(NM)
偏肺病毒(MPV-RP) 绿脓杆菌(PA)
副流感病毒1型(PFLU-1) 金黄色葡萄球菌(SA)
副流感病毒2型(PFLU-2) 大肠杆菌(E.coli)
副流感病毒3型(PFLU-3) 布鲁氏菌(Bru)
副流感病毒4型(PFLU-4) A族溶血性链球菌(GAS)
EB病毒(EB) B族溶血性链球菌(GBS)
巨细胞病毒(HCMV)
腺病毒1.2.5.6亚型(AV I)
腺病毒3.4.7.21亚型(AV II)
腺病毒8.14.19.25亚型(AV III)
只需一次检测,可覆盖44种呼吸道病原体:
病毒27项 细菌14项 真菌1项 支原体、衣原体2项
新型冠状病毒(SARS-CoV-2019) 肺炎链球菌(SP) 白色念珠菌(CAL) 肺炎支原体(MP)
甲型流感病毒(H1N1) 流感嗜血杆菌(HI) 肺炎衣原体(CP)
甲型流感病毒(H1N2) 鲍曼不动杆菌(AB)
甲型流感病毒(H3N2) 结核分枝杆菌(TB)
乙型流感病毒(IFV-B) 嗜肺军团菌(LP)
合胞体病毒(RSV-A) 百日咳杆菌(BP)
合胞体病毒(RSV-B) 肺炎克雷伯氏菌(KP)
鼻病毒(RHV) 脑膜炎球菌(NM)
偏肺病毒(MPV-RP) 绿脓杆菌(PA)
副流感病毒1型(PFLU-1) 金黄色葡萄球菌(SA)
副流感病毒2型(PFLU-2) 大肠杆菌(E.coli)
副流感病毒3型(PFLU-3) 布鲁氏菌(Bru)
副流感病毒4型(PFLU-4) A族溶血性链球菌(GAS)
EB病毒(EB) B族溶血性链球菌(GBS)
巨细胞病毒(HCMV)
腺病毒1.2.5.6亚型(AV I)
腺病毒3.4.7.21亚型(AV II)
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只需一次检测,可覆盖44种呼吸道病原体:
病毒27项 细菌14项 真菌1项 支原体、衣原体2项
新型冠状病毒(SARS-CoV-2019) 肺炎链球菌(SP) 白色念珠菌(CAL) 肺炎支原体(MP)
甲型流感病毒(H1N1) 流感嗜血杆菌(HI) 肺炎衣原体(CP)
甲型流感病毒(H1N2) 鲍曼不动杆菌(AB)
甲型流感病毒(H3N2) 结核分枝杆菌(TB)
乙型流感病毒(IFV-B) 嗜肺军团菌(LP)
合胞体病毒(RSV-A) 百日咳杆菌(BP)
合胞体病毒(RSV-B) 肺炎克雷伯氏菌(KP)
鼻病毒(RHV) 脑膜炎球菌(NM)
偏肺病毒(MPV-RP) 绿脓杆菌(PA)
副流感病毒1型(PFLU-1) 金黄色葡萄球菌(SA)
副流感病毒2型(PFLU-2) 大肠杆菌(E.coli)
副流感病毒3型(PFLU-3) 布鲁氏菌(Bru)
副流感病毒4型(PFLU-4) A族溶血性链球菌(GAS)
EB病毒(EB) B族溶血性链球菌(GBS)
巨细胞病毒(HCMV)
腺病毒1.2.5.6亚型(AV I)
腺病毒3.4.7.21亚型(AV II)
腺病毒8.14.19.25亚型(AV III)
只需一次检测,可覆盖44种呼吸道病原体:
病毒27项 细菌14项 真菌1项 支原体、衣原体2项
新型冠状病毒(SARS-CoV-2019) 肺炎链球菌(SP) 白色念珠菌(CAL) 肺炎支原体(MP)
甲型流感病毒(H1N1) 流感嗜血杆菌(HI) 肺炎衣原体(CP)
甲型流感病毒(H1N2) 鲍曼不动杆菌(AB)
甲型流感病毒(H3N2) 结核分枝杆菌(TB)
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副流感病毒4型(PFLU-4) A族溶血性链球菌(GAS)
EB病毒(EB) B族溶血性链球菌(GBS)
巨细胞病毒(HCMV)
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腺病毒8.14.19.25亚型(AV III)
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