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凡事预则立,不预则废。一年365天,要想做好自己的科研工作,少不了要给自己做个科研规划!医大科研人,快来接收这份西南医科大学2021年版科研日历吧~
[注:一般依托单位的申请截止日期要早于(一般是五天)官方受理机构的截止日期,本日历中涉及相关日期以正式通知为准,此日历仅做参考使用。] https://t.cn/RGCcmWU
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###葡萄干霉菌超标的解决方法!###
葡萄干是很多人喜爱的食品之一,葡萄干可以直接食用,也是一些糕点、面包、燕麦片、乳制品等食品的原料之一,所以葡萄干自身的微生物指标对相关的食品安全有着重要影响。有科研机构曾对随机葡萄干进行微生物学调研,数据如下:
100份无核白葡萄干
菌落总数检出范围:60—30500 CFU/g;
大肠菌群检出范围:30-90 CFU/100g;
致病菌:未检出;
霉菌检出范围:80-51000 CFU/g,霉菌检出率为100%。
从上述结果来看,霉菌的情况最为严重,不但是100%检出,而且都超出了国标标准的限值(≤50 CFU/g ),所以葡萄干需要进行霉菌和微生物杀灭工作,以保证使用安全,特别是利用葡萄干进行深加工的食品企业需要引起重视。
以下内容为对霉菌的特性,污染原因和控制措施进行分析,评估辐照处理和复合型过氧化氢这两种方式对处理葡萄干霉菌的优势。
关于霉菌:
霉菌是评价食品卫生质量的指示性指标。食品中的霉菌数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后,计数所得1g或1ml样品所形成的霉菌菌落量。如果食品中霉菌超标,将会破坏食品的营养成分,令食品失去食用价值,还可以产生霉菌毒素。食用霉菌超标的食品会危害人体健康。
葡萄干霉菌污染原因分析:
霉菌无处不在,广泛存在于自然界中,可以说整个地球就是一个大的霉菌培养箱。在葡萄园中、葡萄脱水场所等都会存在霉菌和霉菌孢子。霉菌所产生的孢子(spore)能够长时间漂浮在空气中,从而对葡萄干表面造成霉菌污染。葡萄干本身营养物质丰富,霉菌菌丝和孢子一旦沾染到葡萄表皮就会存活,在适宜的温度和湿度条件下会快速繁殖,发展到一定阶段可能会出现肉眼可见的霉斑。
辐照处理效果及分析:
葡萄长成后天然就会携带较多的霉菌,加工过程中也会受到环境空气和物表中霉菌的二次污染,所以葡萄干的霉菌问题是不可避免的,所以要通过安全可靠的方式进行控制。目前“辐照”是一种较为有效的处理方式,能够杀灭葡萄干上的霉菌等微生物和虫卵,但“辐照食品”还是一种争议较大的处理方式,消费者几乎都不喜欢经过辐照处理的食品,当看到标签上有“辐照食品”时多数会放弃购买。而且辐照剂量也是难点,低剂量下效果不稳定,而高剂量又会超过国内外的标准要求,特别是一些国外法规对辐照禁止或严格限制,对葡萄干出口企业来说是个难题。
我国GB14891.3-1997中 规定干果辐照剂量0.4-1kGy.
我国GBT18525.4-2001中规定,葡萄干最低有效剂量为0.75kGy,其最高耐受剂量为3kGy。工艺剂量为0.75-2kGy.可以重复辐照但是其总剂量不能超过3kGy.
美国联邦法规21 CFR PART 179中,允许辐照的范围并没有干果。CAC(国际食品法典委员会),1991年批准<预包装食品标识的国际通用标准> (CODEX STAN 1-1985,Rev.1-1991),规定了对辐照食品标识的要求,即经过电离辐射处理食品的标签上,必须在紧靠食品名称处用文字指明该食品经过辐照处理,配料中有辐照食品也必须在配料表中指明。
欧盟辐照食品法规在1999/3/EC中规定,可辐照的食品有干燥的香草,香料及蔬菜调味料,最高剂量不超过10kGy,任何国家都要遵循此指令。
日本食品法规定目前为止只允许土豆进行辐照,剂量为0.15kGy,必须在标签上注明
加拿大食品药品法规定允许辐照的食品有土豆,洋葱,小麦,面粉,全麦粉,香辛类和脱水调味品
澳大利亚,新西兰允许的食品辐照种类里也没有葡萄干这个产品
韩国食品法规定的辐照种类也没有葡萄干这个产品
从上述规定来看,辐照也不是一种完全可靠方式,无法普遍使用。目前在葡萄干相关生产中,使用除霉菌剂来消除霉菌污染的方式越来越多。
葡萄干霉菌控制的理想方式:
我们对很多客户的要求做了总结,大家对除霉菌剂的基本有以下期望:
快速——能够快速杀灭霉菌,能够实现批量化处理,满足规模化生产的需求;
无毒——不破坏葡萄干的营养成分,不危害人体健康,不污染环境;
无味——不会改变葡萄球的外观和口味,操作人员在使用过程愉悦;
安全——使用过程没有燃烧等安全隐患;
低价——使用成本低;
当然还有其它要求,例如无副作用,广谱效应等。简而言之,最好的的除霉菌剂应该具有:高效、持久、无毒、无味、低价等特点,但是这些要求有些是相互排斥的。用于霉菌的杀菌剂越有效,越强大,其成分含量就需要越高,也就意味着其“无毒”程度降低了,使用成本也会随之升高。因此,几乎所有除霉菌产品通常在有效性、易用性和毒性之间顾此失彼。
用过氧化氢消除霉菌:
想要获得对霉菌高效且永久无毒的配方,最简单的方法是依靠一种作用后迅速分解的除霉物质。过氧化氢能够满足此要求,这种消毒效果来自于羟基自由基,羟基自由基会快速杀灭霉菌,与此过程的同时,过氧化氢分解为水和氧气。
过氧化氢本身虽然是一种安全生态的产品,但目前市场上的过氧化氢在葡萄干霉菌处理方面有一些完全无法接受的缺陷:
市场上普通过氧化氢大多数是工业级的,不纯净,药液中含有较多杂质和重金属(铅砷汞等),这写杂质违背了食品安全的初衷。
单纯过氧化氢效力有一定不足,而霉菌抗性较高。为了杀灭霉菌,需要使用较高浓度的过氧化氢,但高浓度过氧化氢有较强的漂白效力,会使葡萄干发生褪色等情况。
过氧化氢银离子消毒剂(Oxytech/奥克泰士)的出现解决了这些难题,将银离子和食品级过氧化氢用特殊工艺制成复合型溶剂,一起使用来处理霉菌,则其效果比仅使用过氧化氢强约10倍以上。这意味着您可以使用较低浓度的过氧化氢银离子溶液(例如仅仅0.5%—1%的奥克泰士 D-50/500)就可以达到高浓度过氧化氢消除霉菌的效果,这样就不会影响葡萄干等食品原料的外观色泽和营养。在安全性方面,Oxytech更是具有极大优势,银离子和铁一样,是一种亲生物体金属,在处理后不可见也不可测量(低于亿分之一),洁净的奥克泰士不含任何杂质,作用完毕后分解为水和氧气。
过氧化氢银(Oxytech)处理霉菌:为什么如此有效?
奥克泰士为除霉菌剂具有很多优势,在痕量银离子的催化下,奥克泰士具有极高效的消毒杀菌作用,释放的羟基自由基的氧化能力还可以降解霉菌产生的大部分毒素,例如黄曲霉毒素对羟基自由基非常敏感。
当奥克泰士接触待处理的表面(葡萄干等原料表面)时,就会开始作用,能够立刻抑制霉菌菌丝的生长和霉菌孢子的萌发(孢子萌发指的是从孢子生长为霉菌的过程)。在此同时,奥克泰士会开始杀灭已经存在的霉菌本体,经过标准的作用时间后,可以将霉菌的菌落量杀灭至标准所允许的范围之内。
另外,霉菌孢子可以漂浮在空气中,在其中可以发现有过敏原性表面蛋白,也会被从过氧化氢分离出来的羟基自由基所变性和消除。使用奥克泰士 D-50/500处理霉菌时,霉菌产生孢子的能力被破坏,意味着当使用 D-50/500时,空气中霉菌孢子的问题要少得多。这种作用是葡萄干加工车间十分需要的,因为使用奥克泰士进行预消毒就可以消除葡萄干加工过程中环境、空气和设备接触面对葡萄干造成二次污染。
优势总结:
◆高效,能够在较低浓度下抑制菌丝生长和孢子萌发,能够有效杀灭霉菌。
◆广谱,除了能够杀灭霉菌外,还可以杀灭细菌、真菌、病毒等所有类型微生物。
◆洁净生态,作用完毕后分解为水和氧气,没有毒性和残留。
◆不影响葡萄干外观、色泽,不破坏营养成分,不影响口感。
◆食品级,符合国家食品安全卫生标准,严格按照食品消毒剂标准检测认证。
◆德国品质,适于高标准要求企业及出口食品使用。
◆消除二次污染,多用途,可用于食品原料接触杀菌,车间环境空间消毒,食品接触面等各环节消毒。
◆可批量化处理,满足规模化生产需求。
总结:
作用一种生态安全的处理方式,Oxytech/奥克泰士(过氧化氢银离子)在葡萄干霉菌处理中展示了卓越的效果,在葡萄种植、运输、存储、葡萄干相关食品加工中均有出色和成熟的应用。随着食品安全管理加强和生态环保理念深入人心,这种绿色生态的处理方式将会更进一步服务于食品工业。
葡萄干是很多人喜爱的食品之一,葡萄干可以直接食用,也是一些糕点、面包、燕麦片、乳制品等食品的原料之一,所以葡萄干自身的微生物指标对相关的食品安全有着重要影响。有科研机构曾对随机葡萄干进行微生物学调研,数据如下:
100份无核白葡萄干
菌落总数检出范围:60—30500 CFU/g;
大肠菌群检出范围:30-90 CFU/100g;
致病菌:未检出;
霉菌检出范围:80-51000 CFU/g,霉菌检出率为100%。
从上述结果来看,霉菌的情况最为严重,不但是100%检出,而且都超出了国标标准的限值(≤50 CFU/g ),所以葡萄干需要进行霉菌和微生物杀灭工作,以保证使用安全,特别是利用葡萄干进行深加工的食品企业需要引起重视。
以下内容为对霉菌的特性,污染原因和控制措施进行分析,评估辐照处理和复合型过氧化氢这两种方式对处理葡萄干霉菌的优势。
关于霉菌:
霉菌是评价食品卫生质量的指示性指标。食品中的霉菌数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后,计数所得1g或1ml样品所形成的霉菌菌落量。如果食品中霉菌超标,将会破坏食品的营养成分,令食品失去食用价值,还可以产生霉菌毒素。食用霉菌超标的食品会危害人体健康。
葡萄干霉菌污染原因分析:
霉菌无处不在,广泛存在于自然界中,可以说整个地球就是一个大的霉菌培养箱。在葡萄园中、葡萄脱水场所等都会存在霉菌和霉菌孢子。霉菌所产生的孢子(spore)能够长时间漂浮在空气中,从而对葡萄干表面造成霉菌污染。葡萄干本身营养物质丰富,霉菌菌丝和孢子一旦沾染到葡萄表皮就会存活,在适宜的温度和湿度条件下会快速繁殖,发展到一定阶段可能会出现肉眼可见的霉斑。
辐照处理效果及分析:
葡萄长成后天然就会携带较多的霉菌,加工过程中也会受到环境空气和物表中霉菌的二次污染,所以葡萄干的霉菌问题是不可避免的,所以要通过安全可靠的方式进行控制。目前“辐照”是一种较为有效的处理方式,能够杀灭葡萄干上的霉菌等微生物和虫卵,但“辐照食品”还是一种争议较大的处理方式,消费者几乎都不喜欢经过辐照处理的食品,当看到标签上有“辐照食品”时多数会放弃购买。而且辐照剂量也是难点,低剂量下效果不稳定,而高剂量又会超过国内外的标准要求,特别是一些国外法规对辐照禁止或严格限制,对葡萄干出口企业来说是个难题。
我国GB14891.3-1997中 规定干果辐照剂量0.4-1kGy.
我国GBT18525.4-2001中规定,葡萄干最低有效剂量为0.75kGy,其最高耐受剂量为3kGy。工艺剂量为0.75-2kGy.可以重复辐照但是其总剂量不能超过3kGy.
美国联邦法规21 CFR PART 179中,允许辐照的范围并没有干果。CAC(国际食品法典委员会),1991年批准<预包装食品标识的国际通用标准> (CODEX STAN 1-1985,Rev.1-1991),规定了对辐照食品标识的要求,即经过电离辐射处理食品的标签上,必须在紧靠食品名称处用文字指明该食品经过辐照处理,配料中有辐照食品也必须在配料表中指明。
欧盟辐照食品法规在1999/3/EC中规定,可辐照的食品有干燥的香草,香料及蔬菜调味料,最高剂量不超过10kGy,任何国家都要遵循此指令。
日本食品法规定目前为止只允许土豆进行辐照,剂量为0.15kGy,必须在标签上注明
加拿大食品药品法规定允许辐照的食品有土豆,洋葱,小麦,面粉,全麦粉,香辛类和脱水调味品
澳大利亚,新西兰允许的食品辐照种类里也没有葡萄干这个产品
韩国食品法规定的辐照种类也没有葡萄干这个产品
从上述规定来看,辐照也不是一种完全可靠方式,无法普遍使用。目前在葡萄干相关生产中,使用除霉菌剂来消除霉菌污染的方式越来越多。
葡萄干霉菌控制的理想方式:
我们对很多客户的要求做了总结,大家对除霉菌剂的基本有以下期望:
快速——能够快速杀灭霉菌,能够实现批量化处理,满足规模化生产的需求;
无毒——不破坏葡萄干的营养成分,不危害人体健康,不污染环境;
无味——不会改变葡萄球的外观和口味,操作人员在使用过程愉悦;
安全——使用过程没有燃烧等安全隐患;
低价——使用成本低;
当然还有其它要求,例如无副作用,广谱效应等。简而言之,最好的的除霉菌剂应该具有:高效、持久、无毒、无味、低价等特点,但是这些要求有些是相互排斥的。用于霉菌的杀菌剂越有效,越强大,其成分含量就需要越高,也就意味着其“无毒”程度降低了,使用成本也会随之升高。因此,几乎所有除霉菌产品通常在有效性、易用性和毒性之间顾此失彼。
用过氧化氢消除霉菌:
想要获得对霉菌高效且永久无毒的配方,最简单的方法是依靠一种作用后迅速分解的除霉物质。过氧化氢能够满足此要求,这种消毒效果来自于羟基自由基,羟基自由基会快速杀灭霉菌,与此过程的同时,过氧化氢分解为水和氧气。
过氧化氢本身虽然是一种安全生态的产品,但目前市场上的过氧化氢在葡萄干霉菌处理方面有一些完全无法接受的缺陷:
市场上普通过氧化氢大多数是工业级的,不纯净,药液中含有较多杂质和重金属(铅砷汞等),这写杂质违背了食品安全的初衷。
单纯过氧化氢效力有一定不足,而霉菌抗性较高。为了杀灭霉菌,需要使用较高浓度的过氧化氢,但高浓度过氧化氢有较强的漂白效力,会使葡萄干发生褪色等情况。
过氧化氢银离子消毒剂(Oxytech/奥克泰士)的出现解决了这些难题,将银离子和食品级过氧化氢用特殊工艺制成复合型溶剂,一起使用来处理霉菌,则其效果比仅使用过氧化氢强约10倍以上。这意味着您可以使用较低浓度的过氧化氢银离子溶液(例如仅仅0.5%—1%的奥克泰士 D-50/500)就可以达到高浓度过氧化氢消除霉菌的效果,这样就不会影响葡萄干等食品原料的外观色泽和营养。在安全性方面,Oxytech更是具有极大优势,银离子和铁一样,是一种亲生物体金属,在处理后不可见也不可测量(低于亿分之一),洁净的奥克泰士不含任何杂质,作用完毕后分解为水和氧气。
过氧化氢银(Oxytech)处理霉菌:为什么如此有效?
奥克泰士为除霉菌剂具有很多优势,在痕量银离子的催化下,奥克泰士具有极高效的消毒杀菌作用,释放的羟基自由基的氧化能力还可以降解霉菌产生的大部分毒素,例如黄曲霉毒素对羟基自由基非常敏感。
当奥克泰士接触待处理的表面(葡萄干等原料表面)时,就会开始作用,能够立刻抑制霉菌菌丝的生长和霉菌孢子的萌发(孢子萌发指的是从孢子生长为霉菌的过程)。在此同时,奥克泰士会开始杀灭已经存在的霉菌本体,经过标准的作用时间后,可以将霉菌的菌落量杀灭至标准所允许的范围之内。
另外,霉菌孢子可以漂浮在空气中,在其中可以发现有过敏原性表面蛋白,也会被从过氧化氢分离出来的羟基自由基所变性和消除。使用奥克泰士 D-50/500处理霉菌时,霉菌产生孢子的能力被破坏,意味着当使用 D-50/500时,空气中霉菌孢子的问题要少得多。这种作用是葡萄干加工车间十分需要的,因为使用奥克泰士进行预消毒就可以消除葡萄干加工过程中环境、空气和设备接触面对葡萄干造成二次污染。
优势总结:
◆高效,能够在较低浓度下抑制菌丝生长和孢子萌发,能够有效杀灭霉菌。
◆广谱,除了能够杀灭霉菌外,还可以杀灭细菌、真菌、病毒等所有类型微生物。
◆洁净生态,作用完毕后分解为水和氧气,没有毒性和残留。
◆不影响葡萄干外观、色泽,不破坏营养成分,不影响口感。
◆食品级,符合国家食品安全卫生标准,严格按照食品消毒剂标准检测认证。
◆德国品质,适于高标准要求企业及出口食品使用。
◆消除二次污染,多用途,可用于食品原料接触杀菌,车间环境空间消毒,食品接触面等各环节消毒。
◆可批量化处理,满足规模化生产需求。
总结:
作用一种生态安全的处理方式,Oxytech/奥克泰士(过氧化氢银离子)在葡萄干霉菌处理中展示了卓越的效果,在葡萄种植、运输、存储、葡萄干相关食品加工中均有出色和成熟的应用。随着食品安全管理加强和生态环保理念深入人心,这种绿色生态的处理方式将会更进一步服务于食品工业。
SOP文件 | 抗心肌抗体操作规程及临床意义
目的:
规范抗心肌抗体的检测的操作
范围:
检验科免疫实验室
责任人:
免疫实验室专业组长和实验室工作人员
基本原理:
本试剂盒采用基因工程表达的高纯度、高活性心肌特异性抗原包被酶联板,辣根过氧化物(HRP)标记的鼠抗人IgG(抗r链)单克隆抗体为示踪物,TMB显色系统,间接ELISA方法检测人血清或血浆中的抗心肌IgG抗体。本试剂盒具有灵敏度高,特异性强,操作简单,加样变色。反应快速,反应模式及重复性好等优点。适用于病毒型心肌炎、心肌梗塞后综合症等的诊断。
试剂盒组成:
1、预包被板: 48孔
2、标本稀释液: 1瓶(6ml)
3、阴性对照: 1瓶(0.5ml)
4、阳性对照: 1瓶(0.5ml)
5、浓缩洗液(20×):1瓶(25ml)
6、酶结合物: 1瓶(6ml)
7、底物液A: 1瓶(3ml)
8、底物液B: 1瓶(3ml)
9、终止液: 1瓶(3ml)
10、塑封袋: 1个
11、封板膜: 3帖
12、说明书: 1份
标本收集:
1、最好使用新鲜血清样本,如需保存,可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。
2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。
操作步骤:
1、平衡:
将试剂盒冷藏环境中取出,置室温平衡30分钟后使用。
2、配液:
将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20倍稀释备用。
3、设定:
留一孔作空白对照,暂不加任何液体。另设阴性对照3孔、阳性对照2孔,不加标本稀释液,直接加100μl对照血清。
4、加样:
在其他反应孔中各加标本稀释液100μl,按顺序各加入待检标本10μl,加样时吹打混匀则变色效果更佳。
5、温育:
在反应板上加盖封板膜,振荡混匀,置37℃温箱或水浴锅中,反应30分钟。
6、洗板:
弃去反应液,每孔加入稀释后的洗液300μl,浸泡15秒,甩弃洗液。连续洗板5次,最后拍干。
7、加酶:
每孔加入100μl酶结合物(空白对照孔不加)。
8、温育:
在反应板上加盖封板膜,置37℃温箱或水浴锅中,反应30分钟。
9、洗板:
洗板5次,同操作步骤6。
10、显色:
每孔依次加入底物A、B液各50μl(包括空白对照孔),加盖封板膜,振荡混匀,37℃避光显色15分钟。
11、终止:
每孔加入终止液各50μl(包括空白对照孔),振荡混匀终止反应。
12、测定:
用空白对照孔调零,并尽快用酶标仪单波长450nm测定各孔OD值。
结果判定:
1、临界值(cut-off值)计算:
临界值=0.10+阴性对照OD平均值(阴性对照OD平均值≤0.05按0.05计算)。
2、结果判定:
测定标本OD值≥临界值时为抗心肌-IgG抗体阳性。
测定标本OD值< 临界值时为抗心肌-IgG抗体阴性。
注意事项:
1、检测标本尽量避免反复冻融、溶血或长菌,否则可能影响检测结果。
2、不同批号、不同品种试剂不能混用;封板膜不能重复使用。
3、各种试剂使用前要混匀;部分溶液(如洗液等)如有结晶析出,轻微加热或摇匀溶解后不影响使用。
4、请严格按说明书操作,严格控制反应时间和反应温度,各种反应液尽量用加液器加注,并经常校对其准确性。
5、反应板开封后不能一次用完时,将剩余板条和干燥剂同时放入塑料袋内封好,置2-8℃可短期保存。
6、所有标本、废液、阳性对照等均按传染性污染物处理(对照血清已进行灭活处理),121℃高压蒸汽灭菌30分钟或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。
临床意义:
许多心脏疾病和免疫有关。当细菌感染,部分心肌变性、坏死、长期冠状动脉痉挛时,患者血中常出现抗心肌抗体(AMA)。 阳性见于风湿热、心肌手术后,局部缺血性心脏病、心肌梗塞等。
SOP文件 | 抗结核杆菌抗体(胶体金法)操作规程及临床意义
目的:用于人血清中结核杆菌抗体的定性筛查检测范围:检验科免疫实验室责任人:免疫实验室专业组长和实验室工作人员检测原理:结核分枝杆菌抗体(IgG)检测试剂盒(胶体金法)应用间接固相免疫层析技术。当测试样本从样本孔向上迁移时,固定在膜上的结核抗原会与试验样本(血清、血浆或全血)中的特异性抗体形成抗原-抗体复合物。这种复合物再与标记有相应二抗的胶体金结合,形成肉眼可见的紫红色条带。质控线上的蛋白A也同时与金标二抗结合作为样本正确加入的标记。标本收集:1、最好使用新鲜血清样本,如需保存,可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。操作方法:1、检测前,将试剂盒平衡至室温。2、自包装封口处剪开一侧,打开密封袋。3、在试验反应板上标明样本名称。4、加样方孔内加样25µl。5、样本开始向上迁移,直至样本前沿到达兰色指示线。加3滴缓冲液至圆孔内。6、拉出标有“TB”字样的标签直至感到阻力。加入1滴缓冲液于加样方孔,开始标记,15分钟时读结果。结果判断与分析:1、如果在测试线处(T)和质控线处(C)出现色条带,则结核分枝杆菌抗体阳性。不同颜色深度的条带无论任何密度均被认作阳性。2、如果视窗内仅位置(C)显示质控线,则结核分枝杆菌抗体为阴性。3、如果质控线处(C)未显示条带,则结果无效。此时,应使用新的试验反应板重新检测。注意事项:1、仅供体外诊断用,在有效期内使用。2、处理标本时,不能用嘴吸,不能吃食物或吸烟。3、处理标本时,戴手套,处理结束后洗手。4、所有标本应当作有传染性来处理,按正确操作步骤处理标本和使用检测卡。5、为防止交叉污染,仅使用干净的一次性吸头吸标本。6、用消毒剂清理溅出的标本。临床意义:结核分枝杆菌是引起结核的病原菌,能引起多种组织器官感染,其中以肺结核最为多见。结核分枝杆菌是一种细胞内寄生菌,进入机体后可以诱导产生抗感染的细胞免疫,也可产生抗结核分枝杆菌的抗体反应,后者对机体无保护作用。结核的诊断有赖于影像学检查和细菌学检查,抗结核分枝杆菌抗体测定对结核的诊断价值不大。
目的:
规范抗心肌抗体的检测的操作
范围:
检验科免疫实验室
责任人:
免疫实验室专业组长和实验室工作人员
基本原理:
本试剂盒采用基因工程表达的高纯度、高活性心肌特异性抗原包被酶联板,辣根过氧化物(HRP)标记的鼠抗人IgG(抗r链)单克隆抗体为示踪物,TMB显色系统,间接ELISA方法检测人血清或血浆中的抗心肌IgG抗体。本试剂盒具有灵敏度高,特异性强,操作简单,加样变色。反应快速,反应模式及重复性好等优点。适用于病毒型心肌炎、心肌梗塞后综合症等的诊断。
试剂盒组成:
1、预包被板: 48孔
2、标本稀释液: 1瓶(6ml)
3、阴性对照: 1瓶(0.5ml)
4、阳性对照: 1瓶(0.5ml)
5、浓缩洗液(20×):1瓶(25ml)
6、酶结合物: 1瓶(6ml)
7、底物液A: 1瓶(3ml)
8、底物液B: 1瓶(3ml)
9、终止液: 1瓶(3ml)
10、塑封袋: 1个
11、封板膜: 3帖
12、说明书: 1份
标本收集:
1、最好使用新鲜血清样本,如需保存,可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。
2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。
操作步骤:
1、平衡:
将试剂盒冷藏环境中取出,置室温平衡30分钟后使用。
2、配液:
将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20倍稀释备用。
3、设定:
留一孔作空白对照,暂不加任何液体。另设阴性对照3孔、阳性对照2孔,不加标本稀释液,直接加100μl对照血清。
4、加样:
在其他反应孔中各加标本稀释液100μl,按顺序各加入待检标本10μl,加样时吹打混匀则变色效果更佳。
5、温育:
在反应板上加盖封板膜,振荡混匀,置37℃温箱或水浴锅中,反应30分钟。
6、洗板:
弃去反应液,每孔加入稀释后的洗液300μl,浸泡15秒,甩弃洗液。连续洗板5次,最后拍干。
7、加酶:
每孔加入100μl酶结合物(空白对照孔不加)。
8、温育:
在反应板上加盖封板膜,置37℃温箱或水浴锅中,反应30分钟。
9、洗板:
洗板5次,同操作步骤6。
10、显色:
每孔依次加入底物A、B液各50μl(包括空白对照孔),加盖封板膜,振荡混匀,37℃避光显色15分钟。
11、终止:
每孔加入终止液各50μl(包括空白对照孔),振荡混匀终止反应。
12、测定:
用空白对照孔调零,并尽快用酶标仪单波长450nm测定各孔OD值。
结果判定:
1、临界值(cut-off值)计算:
临界值=0.10+阴性对照OD平均值(阴性对照OD平均值≤0.05按0.05计算)。
2、结果判定:
测定标本OD值≥临界值时为抗心肌-IgG抗体阳性。
测定标本OD值< 临界值时为抗心肌-IgG抗体阴性。
注意事项:
1、检测标本尽量避免反复冻融、溶血或长菌,否则可能影响检测结果。
2、不同批号、不同品种试剂不能混用;封板膜不能重复使用。
3、各种试剂使用前要混匀;部分溶液(如洗液等)如有结晶析出,轻微加热或摇匀溶解后不影响使用。
4、请严格按说明书操作,严格控制反应时间和反应温度,各种反应液尽量用加液器加注,并经常校对其准确性。
5、反应板开封后不能一次用完时,将剩余板条和干燥剂同时放入塑料袋内封好,置2-8℃可短期保存。
6、所有标本、废液、阳性对照等均按传染性污染物处理(对照血清已进行灭活处理),121℃高压蒸汽灭菌30分钟或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。
临床意义:
许多心脏疾病和免疫有关。当细菌感染,部分心肌变性、坏死、长期冠状动脉痉挛时,患者血中常出现抗心肌抗体(AMA)。 阳性见于风湿热、心肌手术后,局部缺血性心脏病、心肌梗塞等。
SOP文件 | 抗结核杆菌抗体(胶体金法)操作规程及临床意义
目的:用于人血清中结核杆菌抗体的定性筛查检测范围:检验科免疫实验室责任人:免疫实验室专业组长和实验室工作人员检测原理:结核分枝杆菌抗体(IgG)检测试剂盒(胶体金法)应用间接固相免疫层析技术。当测试样本从样本孔向上迁移时,固定在膜上的结核抗原会与试验样本(血清、血浆或全血)中的特异性抗体形成抗原-抗体复合物。这种复合物再与标记有相应二抗的胶体金结合,形成肉眼可见的紫红色条带。质控线上的蛋白A也同时与金标二抗结合作为样本正确加入的标记。标本收集:1、最好使用新鲜血清样本,如需保存,可置2-8℃冷藏48小时或-20℃冷冻4周。2、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。操作方法:1、检测前,将试剂盒平衡至室温。2、自包装封口处剪开一侧,打开密封袋。3、在试验反应板上标明样本名称。4、加样方孔内加样25µl。5、样本开始向上迁移,直至样本前沿到达兰色指示线。加3滴缓冲液至圆孔内。6、拉出标有“TB”字样的标签直至感到阻力。加入1滴缓冲液于加样方孔,开始标记,15分钟时读结果。结果判断与分析:1、如果在测试线处(T)和质控线处(C)出现色条带,则结核分枝杆菌抗体阳性。不同颜色深度的条带无论任何密度均被认作阳性。2、如果视窗内仅位置(C)显示质控线,则结核分枝杆菌抗体为阴性。3、如果质控线处(C)未显示条带,则结果无效。此时,应使用新的试验反应板重新检测。注意事项:1、仅供体外诊断用,在有效期内使用。2、处理标本时,不能用嘴吸,不能吃食物或吸烟。3、处理标本时,戴手套,处理结束后洗手。4、所有标本应当作有传染性来处理,按正确操作步骤处理标本和使用检测卡。5、为防止交叉污染,仅使用干净的一次性吸头吸标本。6、用消毒剂清理溅出的标本。临床意义:结核分枝杆菌是引起结核的病原菌,能引起多种组织器官感染,其中以肺结核最为多见。结核分枝杆菌是一种细胞内寄生菌,进入机体后可以诱导产生抗感染的细胞免疫,也可产生抗结核分枝杆菌的抗体反应,后者对机体无保护作用。结核的诊断有赖于影像学检查和细菌学检查,抗结核分枝杆菌抗体测定对结核的诊断价值不大。
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